HMGB1、維生素D3水平與多發(fā)性骨髓瘤的相關(guān)性*

賀冠強(qiáng)，郭敏，索曉慧，劉洪峰，李俊東

（邯鄲市中心醫(yī)院 血液內(nèi)科，河北 邯鄲 056001）

多發(fā)性骨髓瘤（multiple myeloma, MM）是一種漿細(xì)胞惡性腫瘤，多發(fā)于中老年患者，約占血液腫瘤的10%，全身惡性腫瘤的1%[1]。在臨床，隨著干細(xì)胞移植、免疫調(diào)節(jié)劑及蛋白酶體抑制劑的廣泛應(yīng)用，MM患者的治療療效、預(yù)后均得到改善，精準(zhǔn)的治療方案及準(zhǔn)確的預(yù)后評估在MM患者的臨床治療中顯得尤為重要[2]。

血清高遷移率族蛋白B1（high mobility group protein B1,HMGB1）基因定位于染色體13q12，編碼由215個(gè)氨基酸殘基構(gòu)成的序列高度保守的蛋白質(zhì)[3]。HMGB1在炎癥、創(chuàng)傷、免疫系統(tǒng)疾病及惡性腫瘤等發(fā)病過程中發(fā)揮作用[4]，如HMGB1在多種惡性腫瘤組織中呈陽性表達(dá)，且與腫瘤的浸潤、轉(zhuǎn)移相關(guān)，是鑒別腫瘤的潛在生物學(xué)標(biāo)志物[5]。維生素D3是一種脂溶性維生素，具有調(diào)節(jié)鈣磷代謝、抗增殖、抗分化及免疫調(diào)節(jié)等功能。維生素D3缺乏與消化道腫瘤、前列腺癌及乳腺癌等不良預(yù)后關(guān)系密切[6-8]。本研究通過檢測MM患者血清HMGB1、維生素D3水平，以期為臨床預(yù)測MM患者病情進(jìn)展提供較為可靠的評價(jià)指標(biāo)。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2012年1月—2013年12月在邯鄲市中心醫(yī)院治療的MM患者145例作為研究組。其中，男性102例，女性43例；年齡42～87歲，平均（54.61± 9.87）歲。根據(jù)MM國際分期系統(tǒng)（international staging system, ISS）[9]：I期50例，Ⅱ期55例，Ⅲ期40例。34例采用長春地幸+阿霉素+地塞米松治療方案，36例采用硼替佐米+地塞米松+沙利度胺治療方案，75例采用其他治療方案。選取同期健康體檢者150例作為對照組。其中，男性105例，女性45例；年齡43～89歲，平均（53.98±8.21）歲。納入標(biāo)準(zhǔn)：①簽署知情同意書；②具備完整的病歷資料和隨訪資料；③符合2015年修訂的《中國多發(fā)性骨髓瘤診治指南》[10]；④采集血清樣本前未接受抗腫瘤治療。排除標(biāo)準(zhǔn)：①失訪；②嚴(yán)重肝、腎功能異常；③合并糖尿病、嚴(yán)重皮膚病及其他惡性腫瘤；④原發(fā)性骨質(zhì)疏松癥；⑤近3個(gè)月內(nèi)使用過激素和免疫抑制劑；⑥近1個(gè)月內(nèi)使用過活性維生素D3、降鈣素等；⑦化療前或化療過程中發(fā)生感染；⑧持續(xù)腹瀉、慢性感染及自身免疫性疾病。本研究通過醫(yī)院倫理委員會批準(zhǔn)。兩組性別、年齡比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。

1.2 方法

收集納入對象10 ml晨起空腹外周靜脈血，室溫靜置1 h后，低溫2 000 r/min離心10 min，收集上清，保存于-80℃冰箱。采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)檢測血清樣本中HMGB1、維生素D3、β2微球蛋白（β2-microglobulin, β2-M）及乳酸脫氫酶（lactate dehydrogenase, LDH）水平，每個(gè)樣本檢測4個(gè)平行復(fù)孔，取平均值后進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

1.3 隨訪

隨訪時(shí)間4～60個(gè)月，中位隨訪時(shí)間21個(gè)月，以患者死亡或隨訪時(shí)間截止為隨訪終點(diǎn)。根據(jù)國際骨髓瘤工作組標(biāo)準(zhǔn)[11]評價(jià)MM療效分為完全緩解（complete response, CR）、非常好的部分緩解（very good partial response, VGPR）、部分緩解（partial response, PR）、疾病穩(wěn)定（stable disease, SD）、病情進(jìn)展（progressive disease, PD）。本研究將VGPR、PR、SD及PD患者的預(yù)后列為部分緩解后復(fù)發(fā)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

數(shù)據(jù)分析采用SPSS 21.0統(tǒng)計(jì)軟件。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，比較用t檢驗(yàn)或方差分析，進(jìn)一步兩兩比較用LSD-q檢驗(yàn)；相關(guān)分析用Pearson法，繪制受試者工作特征曲線（receiver operating characteristic curve, ROC curve），P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 各組血清HMGB1、維生素D3、β2-M及LDH比較

研究組各亞組（Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期）和對照組血清HMGB1、維生素D3、β2-M及LDH比較，經(jīng)方差分析，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。與對照組比較，研究組各亞組（Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期）血清HMGB1、β2-M、LDH水平升高，而維生素D3低于對照組；研究組Ⅲ期血清HMGB1、β2-M及LDH高于Ⅰ期和Ⅱ期，Ⅱ期血清HMGB1、β2-M及LDH高于Ⅰ期（P＜0.05），Ⅲ期維生素D3低于Ⅰ期和Ⅱ期，Ⅱ期維生素D3低于Ⅰ期（P＜0.05）。見表1。

2.2 不同預(yù)后患者血清HMGB1、維生素D3、β2-M及LDH比較

經(jīng)隨訪，CR患者98例，部分緩解后復(fù)發(fā)47例。CR組與部分緩解后復(fù)發(fā)組血清HMGB1、維生素D3、β2-M及LDH比較，經(jīng)t檢驗(yàn)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），CR組血清HMGB1、β2-M及LDH低于部分緩解后復(fù)發(fā)組，而維生素D3高于部分緩解后復(fù)發(fā)組。見表2。

表1 各組血清HMGB1、維生素D3、β2-M及LDH比較 （±s）

表1 各組血清HMGB1、維生素D3、β2-M及LDH比較 （±s）

注：①與對照組比較，P ＜0.05；②與研究組Ⅰ期比較，P ＜0.05；③研究組與Ⅱ期比較，P ＜0.05。

組別 n HMGB1/（pg/ml） 維生素D3/（μg/L） β2-M/（mg/L） LDH/（u/L）對照組 150 50.46±21.82 28.74±3.20 2.06±0.29 327.43±117.27研究組 Ⅰ期 50 156.65±86.75① 19.30±3.24① 2.78±0.81① 407.94±149.93① Ⅱ期 55 378.55±143.72①② 17.16±3.04①② 5.80±2.42①② 603.03±239.36①② Ⅲ期 40 828.39±203.68①②③ 10.55±2.83①②③ 13.79±3.42①②③ 1 018.88±268.73①②③F值 630.752 462.583 544.233 173.298 P值 0.000 0.000 0.000 0.000

表2 不同預(yù)后患者血清HMGB1、維生素D3、β2-M及LDH比較 （±s）

表2 不同預(yù)后患者血清HMGB1、維生素D3、β2-M及LDH比較 （±s）

組別 n HMGB1/（pg/ml） 維生素D3/（μg/L） β2-M/（mg/L） LDH/（u/L）CR組 98 303.54±62.49 18.24±3.34 3.87±1.41 596.48±115.74部分緩解后復(fù)發(fā)組 47 682.85±249.57 11.64±2.89 13.40±2.04 761.16±164.43 t值 10.266 11.617 28.888 6.172 P值 0.000 0.000 0.000 0.000

2.3 MM患者血清HMGB1、維生素D3與β2-M、LDH的相關(guān)性

MM患者血清HMGB1與β2-M、LDH呈正相關(guān)（P＜0.05）；而維生素D3與β2-M、LDH呈負(fù)相關(guān)（P＜0.05）。見表3。

2.4 血清HMGB1、維生素D3對MM患者預(yù)后的預(yù)測價(jià)值

以CR患者為陽性樣本（98例），以部分緩解后復(fù)發(fā)患者為陰性樣本（47例），將血清HMGB1、維生素D3劃分為8～9個(gè)組段，建立ROC診斷分析模型。結(jié)果顯示單獨(dú)檢測HMGB1、維生素D3對MM患者預(yù)后的預(yù)測價(jià)值，AUC分別為0.701和0.748。在各指標(biāo)對應(yīng)的理論閾值點(diǎn)處，敏感性均＞70%，特異性為65%～72%。見表4和圖1。

表3 MM患者血清HMGB1、維生素D3與β2-M、 LDH的相關(guān)性分析

再建立HMGB1、維生素D3聯(lián)合診斷模型，仍應(yīng)用血清HMGB1、維生素D3指標(biāo)的各自閾值，對MM患者預(yù)后做預(yù)測診斷。若兩者均為陽性或陰性即做陽性或陰性的預(yù)測診斷，否則予以重測，并與臨床專家會商確定。經(jīng)本研究樣本實(shí)測，其敏感性和特異性分別為77.6%和74.5%。見表4。

表4 血清HMGB1、維生素D3對MM患者預(yù)后預(yù)測價(jià)值的ROC分析參數(shù)

圖1 血清HMGB1、維生素D3對MM患者預(yù)后預(yù)測價(jià)值的ROC曲線

3 討論

骨髓瘤細(xì)胞具有高度特異性，導(dǎo)致MM患者的臨床表現(xiàn)呈現(xiàn)多樣性，主要有貧血、高血鈣、骨痛、病理性骨折及反復(fù)感染等[12]。目前，臨床常用的MM分期以血紅蛋白、血肌酐及血鈣含量為基礎(chǔ)的Durie-Salmon分期系統(tǒng)；以β2-M、血清白蛋白水平為基礎(chǔ)的ISS分期系統(tǒng)；遺傳學(xué)異常、LDH水平納入后的R-ISS系統(tǒng)。以上各分期系統(tǒng)均可在一定程度上評估患者病情，但在臨床應(yīng)用中均存在一定的局限性[13]，如I期MM患者的臨床癥狀隱匿，無高鈣血癥、骨質(zhì)破壞等癥狀，尋找簡單、便捷的評估MM病情進(jìn)展及預(yù)后的輔助指標(biāo)，是臨床研究的熱點(diǎn)和難點(diǎn)[14]。

β2-M是一種非特異性腫瘤標(biāo)志物，主要以游離形式存在于細(xì)胞外液。腫瘤細(xì)胞可大量合成和分泌β2-M，MM患者體內(nèi)腫瘤細(xì)胞大量增殖，同時(shí)存在大量破壞細(xì)胞，導(dǎo)致患者血清β2-M水平升高。β2-M水平能夠反映MM患者體內(nèi)骨髓瘤細(xì)胞總量，是MM患者ISS分期標(biāo)準(zhǔn)的參考因素之一，血清β2-M水平可提示MM疾病進(jìn)展[15]。LDH是機(jī)體糖酵解過程中的重要代謝酶，腫瘤細(xì)胞可釋放LDH至血液，血清LDH水平升高與MM患者預(yù)后密切相關(guān)，在MM預(yù)后評估中具有重要的參考價(jià)值[16]。

HMGB1廣泛分布在心、肺、腎等組織的細(xì)胞核中，與DNA結(jié)合后參與基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控，并能夠維持核小體結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定，又被稱為DNA伴侶，參與組織再生及腫瘤轉(zhuǎn)移等[17]；而肝、腦等組織中，HMGB1定位于細(xì)胞外，主要參與機(jī)體炎癥反應(yīng)。研究表明，各種白血病患者血清HMGB1呈高表達(dá)狀態(tài)[18]。本研究發(fā)現(xiàn)，與對照組比較，研究組血清HMGB1水平升高，初步證實(shí)HMGB1在MM患者血清存在異常表達(dá)，與MM疾病發(fā)生相關(guān)，具有作為MM相關(guān)生物學(xué)標(biāo)志物的潛能。此外，MMⅠ期、Ⅱ期、Ⅲ期患者血清HMGB1水平逐漸升高，且與MM疾病進(jìn)展指標(biāo)β2-M、LDH呈正相關(guān)，提示HMGB1可能是MM發(fā)生、發(fā)展的影響因素，血清HMGB1水平可作為反映MM患者病情進(jìn)展，可為臨床醫(yī)生判斷和評估患者病情提供參考價(jià)值。

維生素D3是一種免疫調(diào)節(jié)劑，在腫瘤發(fā)生、發(fā)展中扮演重要角色[19]。大量研究證實(shí)，維生素D3缺乏與急性淋巴細(xì)胞白血病、淋巴瘤腫瘤患者的不良預(yù)后相關(guān)[20-21]，但目前有關(guān)維生素D3缺乏與MM疾病活動、進(jìn)展的關(guān)系，尚無明確結(jié)論[22-23]。本研究發(fā)現(xiàn)，MM患者血清維生素D3水平低于健康體檢者，且隨疾病分期增加而逐漸降低，初步推測MM患者維生素D3缺乏與MM好發(fā)于合并骨病的老年患者等疾病本身特點(diǎn)有關(guān)；此外，MM患者血清維生素D3水平與MM疾病進(jìn)展指標(biāo)β2-M、LDH呈負(fù)相關(guān)，維生素D3缺乏可能促進(jìn)MM疾病進(jìn)展。

MM患者不同預(yù)后的血清HMGB1、維生素D3水平比較有差異。與部分緩解后復(fù)發(fā)患者相比，CR患者血清HMGB1水平降低，維生素D3缺乏癥狀得到改善，且ROC分析結(jié)果顯示，血清HMGB1、維生素D3在預(yù)測MM患者預(yù)后的方面具有較高的臨床價(jià)值，滿足臨床實(shí)際應(yīng)用的要求，血清HMGB1、維生素D3是MM患者病情評估、預(yù)后預(yù)測的良好輔助指標(biāo)，但因本研究為單中心研究，樣本數(shù)量有限，后期仍需繼續(xù)擴(kuò)大樣本量進(jìn)行驗(yàn)證。

綜上所述，MM患者血清HMGB1水平升高且普遍存在維生素D3缺乏。血清HMGB1、維生素D3水平與MM疾病進(jìn)展指標(biāo)β2-M、LDH呈相關(guān)性，血清HMGB1、維生素D3水平檢測在MM患者病情診斷、預(yù)后預(yù)測中具有一定的應(yīng)用價(jià)值，值得臨床上進(jìn)行深入研究。