射干麻黃湯質量標準研究

安俐瑤，姜英子* ，徐雅娟

(1.延邊大學，吉林 延吉 133000；2.吉林省中醫藥科學院，吉林 長春 130021)

射干麻黃湯出自《金匱要略》，由射干、麻黃、生姜、細辛、紫菀、款冬花、大棗、半夏、五味子組成[1]，臨床上常用于治療痰飲咳嗽，寒痰、濕痰引起的喉中痰鳴[2]。郝文梅[3]發現射干麻黃湯治療痰濕阻肺型咳嗽療效較佳，該方能夠清除由長期咳嗽產生的咽喉部郁熱從而達到很好的鎮咳效果。脾為生痰之源，肺為儲痰之器，咳嗽不止則中不安，中不安則痰飲續生，因此，治痰飲應先鎮咳，止住咳嗽，溫肺化飲之藥才能更好地發揮作用。射干作為方中主藥苦寒清熱、解毒化痰[4]。五味子收斂肺氣，用于久咳虛喘，細辛溫肺化飲[5-7]。本研究對射干麻黃湯中的次野鳶尾黃素、五味子醇甲、細辛脂素同時進行含量測定，為射干麻黃湯的質量控制提供參考。

1儀器與試劑

高效液相色譜儀SHIMADZU LC-20AT；METTLER AG245十萬分之一天平、甲醇、乙腈為色譜純(TEDIA)，水為娃哈哈純凈水；次野鳶尾黃素對照品(中國食品藥品檢定研究院，111557-201703)，五味子醇甲對照品(中國食品藥品檢定研究院，110857-201714)，細辛脂素對照品(中國食品藥品檢定研究院，111889-201705)，射干麻黃湯干膏(自制)。

2方法與結果

2.1色譜條件

色譜柱為SHIMADZU VP-ODS(250 mm×4.6 mm×5 μm)。流動相為乙腈(A)-水(B)，0～20 min，35%A～45%A；20～30 min，45%A～50%A；30～30.5 min，50%A～70%A；30.5～45 min，70%A～100%A。檢測波長287 nm，流速1 mL/min，柱溫40 ℃。

2.2對照品溶液的制備

精密稱取次野鳶尾黃素對照品、五味子醇甲對照品、細辛脂素對照品，加甲醇制成每1 mL含44 μg次野鳶尾黃素、168.8 μg五味子醇甲、35.2 μg細辛脂素的混合溶液。

2.3供試品溶液的制備

取約2.50 g射干麻黃湯的干膏粉，加入10 mL甲醇超聲30 min，用甲醇補足減失重量，樣品過0.22 μm的微孔濾膜過濾。

2.4陰性樣品溶液的制備

按照最佳工藝制備陰性樣品干膏，樣品1不加射干，樣品2不加五味子，樣品3不加細辛。按照“2.3”項制備供試品溶液，得陰性1、陰性2、陰性3樣品。

2.5方法學考察

2.5.1線性關系考察 精密吸取“2.2”項下的混合對照品2 μL、4 μL、8 μL、12 μL、16 μL、20 μL，注入高效液相色譜儀，得到6組峰面積，以進樣量μg為橫坐標，峰面積為縱坐標作標準曲線，得到次野鳶尾黃素的回歸方程為y=2 045 185.37x+73.39，r=0.999 9，表明次野鳶尾黃素在0.088 0～0.880 0 μg之間具有良好的線性關系；五味子醇甲的回歸方程為y=326 122x-100.66，r=0.999 9，表明五味子醇甲在0.337 6～3.376 0 μg之間具有良好的線性關系，細辛脂素的回歸方程為y=1 403 945.87x+2 329.92，r=1，表明細辛脂素在0.070 4～0.704 0 μg之間具有良好的線性關系。

2.5.2精密度考察 精密吸取“2.2”項下的混合對照品溶液10 μL/次，連續進樣6次，次野鳶尾黃素峰面積的RSD值為0.09%，五味子醇甲峰面積的RSD值為0.11%，細辛脂素峰面積的RSD值為0.11%。說明儀器精密度良好。

2.5.3重現性考察 取同一批號樣品6份，按照“2.3”項下制備供試品溶液。分別精密吸取10μL注入高效液相色譜儀，測定次野鳶尾黃素、五味子醇甲、細辛脂素的含量。次野鳶尾黃素的平均含量為0.022 7%，RSD值為2.62%；五味子醇甲的平均含量為0.071 6%，RSD值為2.21%；細辛脂素的平均含量為0.018 2%，RSD為0.41%。對照品、供試品、空白對照圖譜見圖1-圖3。

注：1.次野鳶尾黃素；2.五味子醇甲；3.細辛脂素

圖1 射干麻黃湯供試品色譜

注：1.次野鳶尾黃素；2.五味子醇甲；3.細辛脂素

圖2 射干麻黃湯對照品色譜

圖3 空白對照溶液色譜

2.5.4加樣回收率考察 取同一批供試品6份，取樣量約1.25 g，精密加入3種對照品，按照“2.3”項下制備供試品溶液。分別精密吸取10 μL注入高效液相色譜儀，結果見表1-表3。

表1 次野鳶尾黃素加樣回收率試驗

表2 五味子醇甲加樣回收率試驗

表3 細辛脂素加樣回收率試驗

根據加樣試驗結果，次野鳶尾黃素的平均加樣回收率為97.02%，RSD為0.29%，五味子醇甲的平均加樣回收率為96.33%，RSD為0.26%，細辛脂素的平均加樣回收率為98.43%，RSD為0.31%，說明本方法可行。

2.5.5穩定性考察 精密吸取同一供試品溶液10 μL，分別于0 h、2 h、4 h、8 h、10 h、12 h末注入高效液相色譜儀，測得次野鳶尾黃素的峰面積RSD為2.06%，五味子醇甲峰面積的RSD為1.87%，細辛脂素峰面積的RSD為0.43%。表明供試品溶液在12 h內穩定。

2.6樣品測定

取3批樣品按“2.3”項下制備供試品溶液，精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10 μL，分別注入高效液相色譜儀進行分析，外標法計算含量。見表4。

表4 不同批次射干麻黃湯中次野鳶尾黃素、五味子醇甲、細辛脂素的含量測定結果 (mg/g)

3討論

3.1提取條件的考察

3.1.1提取方式的考察 考察了超聲處理(220 V，50 Hz)和加熱回流提取兩種提取方式，在相同的提取時間內，超聲法對樣品中3種成分的提取效率優于回流提取法。

3.1.2提取溶劑的考察 分別使用甲醇、甲醇∶水(8∶2)、乙醇三種溶劑對等量樣品進行超聲處理，在相同的提取時間內，甲醇對供試品中3種成分的提取效率最優。

3.2色譜條件的考察

3.2.1柱溫的考察 分別考察了溫度在30 ℃、35 ℃、40 ℃的指紋圖譜。結果顯示，當柱溫在40 ℃時樣品中3種成分的峰面積大于其余兩種溫度。

3.2.2檢測波長的考察 本次試驗對供試品做了全波長掃描，發現次野鳶尾黃素在204 nm處有最大的紫外吸收，其次是266 nm；五味子醇甲在216 nm處有紫外吸收，其次是252 nm；細辛脂素在202 nm處有最大的紫外吸收，其次是286 nm和236 nm納米，見圖4-圖6。參照2015年版《中國藥典》3種成分的最佳波長在266 nm，250 nm，287 nm，因此，將3個波長分別作為測試波長，結果發現細辛脂素在287 nm處峰面積遠大于其余2個波長，而其余2個成分在3個波長峰面積下相差不多，后又發現細辛脂素在287 nm處峰形較其余兩個波長處尖銳，這表明細辛脂素在266 nm和250 nm處可能有干擾，因此，最后選擇287 nm作為最佳波長。

圖4 次野鳶尾黃素的吸收光譜

圖5 五味子醇甲的吸收光譜

圖6 細辛脂素的吸收光譜

3.2.3 色譜柱考察 筆者考察了3種色譜柱：SHIMADZU-GL WondaCract ODS-2、Agilent Zorbax SB C18、SHIMADZU VP-ODS色譜柱，規格均為(250 mm×4.6 mm×5 μm)。結果顯示SHIMADZU VP-ODS色譜柱所顯示的圖譜基線最平穩，細辛脂素峰與其后邊的雜峰分離效果較好，更能穩定表達射干麻黃湯三種成分的含量測定。

3.3系統耐用性實驗

將流動相系統的初始梯度進行微調，方法1將0～20 min的流動相比例變為20%～45%，其余條件不變，方法2將0～20 min的流動相比例變為40%～45%，其余條件不變。結果顯示，初始梯度微調后各指標均有良好的分離度，且峰面積無較大差別，表明該方法系統耐用性良好。

3.4陰性樣品實驗

取“2.4”項下的3個供試品溶液各10 μL注入高效液相色譜儀，結果發現供試品1樣品無次野鳶尾黃素峰顯示，樣品2無五味子醇甲峰顯示，樣品3無細辛脂素峰顯示。由此可見，3種成分可以作為射干麻黃湯的質量控制指標。

4結論

本次研究建立了對射干麻黃湯中的3種成分同時進行含量測定的方法，其中，次野鳶尾黃素為黃酮類化合物，五味子醇甲和細辛脂素為木脂素類化合物[8-10]。3種成分同時測定，方法簡便易行，精密度、重復性、穩定性、線性、加樣回收率均符合規定，可以將次野鳶尾黃素、五味子醇甲、細心脂素作為射干麻黃湯中射干、五味子、細辛三味藥材質量控制的方法。