基于正交試驗優(yōu)選芍藥甘草湯胃漂浮緩釋片處方工藝研究

何利，劉巍，王冠華，王云霞，陳淮臣，石亞，劉文

(1.貴州中醫(yī)藥大學 研究生院，貴州 貴陽 550002；2.貴州醫(yī)科大學附屬醫(yī)院，貴州 貴陽 550004)

芍藥甘草湯出自《傷寒論·太陽篇》，是中醫(yī)治療的經典名方，由芍藥、甘草兩味藥物1∶1組成，可養(yǎng)陰生津、調和肝脾，具柔肝理脾、緩急止痛之效，在臨床上廣泛用于急性、慢性胃潰瘍的治療[1-3]。在本課題組前期實驗篩選出芍藥甘草湯最佳提取工藝的基礎上，本實驗將其制成胃漂浮緩釋制劑，以延長藥物病灶部位的滯留時間，提高藥物生物利用度。

1 儀器與材料

1.1 儀器

安捷倫1260高效液相色譜儀，ZRS-8 G智能溶出試驗儀(天津天大天發(fā)科技有限公司)；TDP-5單沖壓片機(吉首市中誠制藥機械廠，湖南)；科導SK 8210 HP型臺式超聲波清洗器(上海科導超聲儀器有限公司)；TB-1-1型電子調溫電熱套(天津泰斯特儀器有限公司)等。

1.2 材料

芍藥苷(批號：110736-201842)購自中國食品藥品檢定研究院，供含量測定用；白芍、炙甘草藥材購至康美藥業(yè)有限股份公司，經貴州中醫(yī)藥大學周漢華教授鑒定白芍為毛茛科植物芍藥PaeonialactifloraPall的干燥根，炙甘草為豆科植物甘草GlycyrrhizauralensisFisch的干燥根和根莖的炮制加工品；羥丙基甲基纖維素HPMC(K 4M，合肥巴斯夫生物科技有限公司)；聚乙烯吡咯烷酮(K 30，合肥巴斯夫生物科技有限公司)；十八醇(天津市科密歐化學試劑有限公司)；微晶纖維素(源葉生物)；甲醇、乙腈等試劑為色譜純；水為超純水。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱：Diamonsil(2)C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)。流動相：乙腈(A)-0.2%磷酸水(B)，梯度洗脫(0～5 min，10%～13% A；5～11 min，13%～14% A；11～20 min，14%～16% A；20～25 min，16%～18% A；25～27 min，18%～18% A；27～28 min，18%～20% A；28～34 min，20%～20% A；34～40 min，20%～30% A；40～50 min，30%～40% A；50～60 min，40%～55% A)。檢測波長：多波長測定(0～7 min，258 nm；7～35 min，230 nm；35～46 min，360 nm；46～60 min，258 nm)。流速：1 mL/min；柱溫：35 ℃；進樣量：10 μL。色譜見圖1。

2.2 樣品提取物及溶液的制備

2.2.1 樣品提取物的制備 取白芍、炙甘草藥材粉末(過4號篩)各200 g，加8倍量80%乙醇，回流提取3次，每次1.5 h，過濾，合并濾液，減壓濃縮，60 ℃鼓風干燥箱中干燥至恒重，干燥器中保存。

2.2.2 供試品溶液的制備取本品15片，研細，精密稱取0.6 g，精密稱定，置100 mL具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50 mL，搖勻稱重后超聲處理45 min(功率500 W，頻率59 kHz)，放冷后稱重，甲醇補足重量，搖勻后用0.45 μm濾膜濾過，取續(xù)濾液，作為供試品溶液。

2.2.3 對照品溶液的制備 精密稱取芍藥苷對照品適量，加甲醇制成濃度822.00 μg/mL的芍藥苷對照品溶液。

2.3 方法學考察

2.3.1 線性關系考察 分別精密吸取不同體積芍藥苷對照品溶液適量，置10 mL量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，制備系列濃度的混合對照品溶液，分別精密吸取1 μL，注入液相色譜儀，按“2.1”項下色譜條件進行測定，以對照品濃度為橫坐標(X)，峰面積為縱坐標(Y)，用最小二乘法進行線性回歸，以計算線性方差和相關系數(r)，線性方程為Y=9.7852X+140.61，r=0.999 5，芍藥苷在82.20～739.80 μg/mL范圍內線性關系良好。

2.3.2 精密度試驗 按“2.2.2”項下方法制備供試品溶液，并按“2.1”項下色譜條件連續(xù)進樣6次，記錄芍藥苷的峰面積，計算得到芍藥苷、甘草苷峰面積的RSD為2.34%，表明儀器精密度良好。

注：1.芍藥苷

圖1 芍藥苷對照品(B)和芍藥甘草胃漂浮緩釋片樣品溶液(A)的HPLC圖譜

2.3.3 穩(wěn)定性試驗 取同一供試品溶液，按“2.1”項下色譜條件分別于0、2、4、6、8、10、12 h進樣測定，計算得到芍藥苷峰面積的RSD分別為1.71%，表明供試品溶液在12 h內穩(wěn)定性良好。

2.3.4 回收率試驗 取本品15片，研細，每份0.3 g。精密稱定6份，分別置100 mL容量瓶中，分別加入各對照品適量，按“2.2.2”項下方法制備供試品溶液，按“2.1”項下色譜條件依次測定，計算得到芍藥苷的平均加樣回收率為101.61%，RSD為1.43%，表明該方法的準確度良好。

2.4 體外釋放度考察

根據2015版《中國藥典》四部(通則0931)溶出度與釋放度測定法第二法(漿法)，釋放介質為0.1 mol/mL的鹽酸溶液，轉速為75 r/min，溫度控制(37±1)℃，分別在2、4、6、8、10、12 h六個時間點進行取樣，每次5 mL(并及時添加等體積的新鮮介質)，吸取出的溶出液經水浴揮干后，甲醇溶解，定容至2 mL，過0.45 μm微孔濾膜后，取續(xù)濾液，同時測定樣品中芍藥苷的累計釋放度。

2.5 處方的篩選和優(yōu)化

2.5.1 處方初步篩選 在預實驗的基礎上，根據片劑的可壓性、漂浮性、體外溶出度暫定處方比例為芍藥浸膏粉30%、HPMC K4M 25%、十八醇 15%、NaHCO34%、聚乙烯吡咯烷酮 3%，MCC補足重量，采用粉末直接壓片法進行壓片。

2.5.2 正交試驗設計 以HPMC K4M(A)、PVPK 30(B)、NaHCO3(C)用量作為考察因素，每個因素設置3個水平進行正交設計。根據2015版中國藥典4部緩釋制劑指導原則確定本漂浮片以其體外累計釋放度為處方篩選依據。本實驗確定以下3個時間點的累計釋放度作為評價指標，2 h累計釋放度(Q2)以30%為標準；6 h累計釋放度(Q6)以60%為標準；10 h累計釋放度(Q10)以85%為標準，采用綜合評分法對正交試驗結果分析，即綜合評分K的計算公式為：K= |Q2-30% | + |Q6-60% | + |Q10-85% |。K值越小說明優(yōu)化條件越佳。因素水平見表1，正交實驗結果見表2，方差分析見表3。

表1 因素水平

表2 正交實驗

表3 方差分析

由表2可知，各因素對芍藥苷釋放度的影響為：A>C>B，直觀分析最佳工藝為A3B2C1，方差分析結果表明，A有顯著性影響，B、C無明顯差異，故選定芍藥甘草湯胃漂浮緩釋片最佳處方工藝為：芍藥甘草浸膏粉30%，HPMC 35%，聚乙烯吡咯烷酮 6%，NaHCO34%，十八醇 15%，MCC補重。

2.6 驗證試驗

為了進一步驗證上述輔料配比和制備工藝的可行性及穩(wěn)定性，按照最優(yōu)處方混合藥物粉末與各輔料制備了3批樣品，進行驗證試驗，按“2.4”項下方法分別計算6個時間點累計釋放度，結果見表4，釋放曲線擬合圖見圖2。

表4 3批樣品不同取樣時間累計釋放度

實驗結果表明，芍藥苷甘草湯胃漂浮緩釋片在12 h內緩慢釋放，可達到長效的目的，且3個批次間的體外累積釋放率無顯著差異，工藝重現性良好，制劑處方優(yōu)化成功。

圖2 芍藥苷累計釋放曲線

3 討論

胃內滯留型制劑，主要是依據流體動力學平衡原理制備而成的密度<1，口服后“漂浮”在胃內的制劑[4-5]。能顯著延長藥物在胃內滯留時間，以達到直接作用于病灶部位并緩慢持續(xù)釋放，提高藥物生物利用度的效果。通常是由藥物、緩釋材料、助漂劑、發(fā)泡劑和其他輔料組成[6]，原輔料的篩選和配比，是制劑制備成功的關鍵。

本實驗選用HPMC為緩釋材料，其與胃液接觸后，可水化成凝膠，在片劑表層形成屏障，有效控制藥物的釋放，同時由于水化膨脹后使片劑體積松大，改善了片劑的漂浮性能。實驗發(fā)現，不同黏度的HPMC水化速度不同，黏度與水化速度成反比，對藥物的溶出有顯著的影響。處方中十八醇是一種密度小、疏水性的蠟質材料，在方中作為助漂劑，與碳酸氫鈉聯合使用，起到協同作用，使得片劑快速起漂并長時間處于漂浮狀態(tài)。聚乙烯吡咯烷酮為致孔劑，加快藥物在親水性凝膠屏障中的溶出，控制藥物的溶出速度。

另外，由于芍藥甘草浸膏含有大量多糖成分，制成的干浸膏流動性差、吸濕性嚴重，導致混合藥粉黏性過強，成型過程困難，故以微晶纖維素為填充劑，減少黏沖，改善其成型性。制備胃漂浮緩釋片，需綜合考慮各方面因素，優(yōu)化原輔料的配比，才可制成工藝可行、滿足生產需求的制劑。