馬鹿茸組合物緩解大小鼠體力疲勞的作用研究

梁志健，陳桂煌，龍淑嫻，黎麗斯，黎耀俊，白建瑜，饒子亮

(廣東省醫學實驗動物中心，廣東 佛山 528248)

《素問·靈蘭秘典論》：“腎者，作強之官，伎巧出焉[1-2]。”即腎是主導力量運動的器官，腎虛可能引起機體體力下降、運動能力降低、容易出現疲勞的癥狀。鹿茸、淫羊藿具有溫補腎陽的功效，是補腎的常用藥物；黃精在益腎之余還能健脾補氣；而枸杞則能兼補肝腎。本研究從小鼠負重游泳時長、肝糖原含量、血清尿素氮及血乳酸堆積4個方面[3]綜合評價由鹿茸、淫羊藿、黃精、枸杞組方而成的馬鹿茸組合物是否具有抗疲勞的作用。

1 材料和方法

1.1 實驗動物

SPF級NIH小鼠，150只，雄性，18～22 g；SPF級SD大鼠，50只，雄性，180～200 g；均購自廣東省醫學實驗動物中心[SCXK(粵)2018-0002]，動物合格證號分別為：44007200063580、44007200063166、44007200063824、44007200061954。動物實驗均在廣東省醫學實驗動物中心SPF級動物房進行[SYXK(粵)2018-0002]，動物實驗證明號分別為：00215281、00214589、00215705、00212328，飼養條件∶5只/籠，自由進食飲水，采用12 h∶12 h晝夜間斷照明，飼養室條件始終保持穩定。本研究經廣東省醫學實驗動物中心實驗動物倫理委員會審核，按實驗動物使用的3R原則給予人道關懷，審核批號為：B201903-20、B201904-16、B201905-10、B201905-16。

1.2 主要試劑與儀器

馬鹿茸組合物(湯臣倍健股份有限公司，由馬鹿茸、淫羊藿、黃精、枸杞組成，每克組合物含氨基酸10.0%、淫羊藿苷0.5%)；無限極牌奕華膠囊(紐斯葆廣賽(廣東)生物科技股份有限公司，批號：18I08ADS04，每100 g含紅景天苷0.3 g、總皂苷2.0 g)；肝糖原試劑盒(南京建成生物工程研究所，批號：20190620)；尿素氮試劑盒(上海科華生物工程股份有限公司，批號：20180822)；血乳酸試紙(德國EKF，批號：2001839157)。

Multiskan Go型全波長酶標儀(美國Thermo Fisher Scientific)；LACTATE SCOUT型便攜式乳酸檢測儀(德國EKF)；日立7020型全自動生化分析儀(日本株式會社日立高新技術)。

1.3 實驗方法

1.3.1 分組和給藥

負重游泳實驗、血清尿素氮實驗、肝糖原實驗分別使用50只NIH小鼠，血乳酸實驗使用50只SD大鼠。各實驗的動物分別按體重隨機分為空白對照組、奕華膠囊組、馬鹿茸組合物低、中、高劑量組。奕華膠囊組動物以0.6 g/kg的劑量灌胃給予奕華膠囊，馬鹿茸組合物組低、中、高劑量組動物分別以0.135 g/kg、0.27 g/kg、0.81 g/kg的劑量灌胃給予馬鹿茸組合物，空白對照組動物灌胃給予純凈水。灌胃給藥每天1次，連續30 d。動物每周稱重1次。

1.3.2 負重游泳時間的測定

負重游泳實驗的動物末次灌胃30 min后于尾根部負荷5%體重的鉛皮，并置于水深不少于30 cm的游泳箱中游泳，水溫控制(25±1)℃，記錄小鼠自游泳開始至死亡的時間，即小鼠負重游泳時間。

1.3.3 血清尿素氮的測定

血清尿素氮實驗的動物末次灌胃30 min后置于水溫(30±1)℃且水深不少于30 cm的游泳箱中游泳90 min，休息60 min后動物眼眶采血并頸椎脫臼處死。血樣2000 r/min 離心15 min后，取上層血清利用日立7020型全自動生化分析儀檢測其中尿素氮含量。

1.3.4 肝糖原的測定

肝糖原實驗的動物末次灌胃30 min后頸椎脫臼處死取肝，用生理鹽水漂洗后，濾紙吸干，精確稱取100 mg，利用肝糖原試劑盒檢測其中的肝糖原含量。

1.3.5 血乳酸的測定

血乳酸實驗的動物末次灌胃30 min后尾尖采血檢測血乳酸含量，然后置于水溫(30±1)℃且水深不少于30 cm的游泳箱中不負重游泳10 min，游泳結束后立刻采血檢測血乳酸含量，休息20 min后再采血測血乳酸含量。并按以下公式計算血乳酸曲線下面積。隨后動物動物麻醉放血處死。

血乳酸曲線下面積=5×(游泳前血乳酸值+3×游泳后0 min的血乳酸值+2×游泳后休息20 min的血乳酸值)

1.4 統計學方法

2 結果

2.1 動物狀態觀察與體重

實驗期間，各組動物的體型、被毛、皮膚、糞便、肌肉張力、步態、精神、呼吸等均無異常；各組動物均見增長，且組間未見統計學差異，如圖1所示。

2.2 負重游泳實驗

與空白對照組比較，奕華膠囊組馬鹿茸組合物高劑量組動物游泳時長增加，具統計學差異(P<0.05)，如表1所示。

2.3 血清尿素氮實驗

與空白對照組比較，奕華膠囊組動物BUN濃度降低(P<0.01)，馬鹿茸組合物各劑量組動物血清尿素氮未見統計學差異，如表2所示。

2.4 肝糖原實驗

與空白對照組比較，奕華膠囊組、馬鹿茸組合物低劑量組動物的肝糖原含量升高(P<0.05或0.01)，如表3所示。

2.5 血乳酸實驗

與空白對照組比較，馬鹿茸組合物低劑量組動物的血乳酸曲線下面積降低(P<0.05)，如表4所示。

注：A：負重游泳實驗；B：血清尿素氮實驗；C：肝糖原實驗；D：血乳酸實驗。圖1 各實驗各組動物的體重比較Note. A,Loaded swimming test. B， Serum BUN test. C, Hepatic glycogen test. D, Blood lactic acid test.Figure 1 Comparison of weights among the groups

Table1Loaded swimming time of each group

組別Groups劑量(g/kg)Dosage游泳時長(min)Loading swimming time空白對照組Blank control group/8.8±1.9奕華膠囊組Yihua capsule group0.60013.2±5.3*馬鹿茸組合物低劑量組Hairy Antler composition low dosage group0.1359.2±4.1馬鹿茸組合物中劑量組Hairy Antler composition middle dosage group0.27012.0±5.3馬鹿茸組合物高劑量組Hairy Antler composition high dosage group0.81013.5±6.4*

注：與空白對照組比較，*P<0.05。

Note. Compared with the blank control group,*P<0.05.

表2 各組動物血清尿素氮的比較

注：與空白對照組比較，**P<0.01。

Note. Compared with the blank control group,**P<0.01.

表3 各組動物肝糖原的比較

注：與空白對照組比較，*P<0.05，**P<0.01。

Note. Compared with the blank control group,*P<0.05,**P<0.01.

表4 各組動物血乳酸的比較

注：與空白對照組比較，*P<0.05。

Note. Compared with the blank control group,*P<0.05.

3 討論

疲勞屬于中醫“虛勞”、“虛損”的范疇，中醫認為氣血不足是產生疲勞的基礎之一。奕華膠囊主要由補氣類中藥紅景天、西洋參和祛風濕、強筋骨的刺五加組方而成。其中紅景天所含的紅景天苷可延長小鼠負重游泳時間，降低血清中乳酸和血清尿素氮含量，提高肝糖原含量[4]；西洋參中的人參皂苷Re、Rb1、Rb2、Rg1、Rg3具有延緩疲勞產生和促進疲勞恢復的作用，主要表現在調節中樞神經系統、改善機體功能和消除疲勞等方面[5]；刺五加的脂溶性成分能減少尿素氮的損傷來增強小鼠被迫游泳能力，有效降低了肌酐濃度的增加，促進脂肪的利用[6]。奕華膠囊經動物實驗評價，具緩解體力疲勞作用。中醫又認為“人之元氣，根基于腎，培養與脾”，明代薛己也強調“治虛勞，當以脾腎二臟為要”，本研究主要探討了由補腎中藥組方而成的馬鹿茸組合物是否具有相類似的抗疲勞作用。

疲勞的表現主要有運動時體內能量降低和肌肉力量的下降，使機體不能持續在特定水平和/或不能維持預定的運動強度[7-8]。通過測定機體持續運動到力竭的時長可以反映機體的耐力。在本實驗中，馬鹿茸組合物可增加小鼠負重游泳時長顯著高于空白對照組(P<0.05)，提示馬鹿茸組合物可以提高小鼠的運動耐力。這與報道中黃精多糖可不同程度地抑制脂質過氧化損傷，調節腦內5-HT和DA含量，從而延緩運動致外周疲勞和中樞疲勞的發生相一致[9]。

人體短時間高強度運動的主要能量來源于糖原的無氧糖酵解，糖原主要分布在肝和肌肉，肝糖原與肌糖原分別是能量儲備和利用的直接組織。因此肝糖原儲備含量可以反應機體運動所能消耗的能量多少[10-11]。本實驗中，馬鹿茸組合物可以提高小鼠肝糖原含量升高(P<0.05)。其機制可能為：一是淫羊藿能夠提高大鼠睪酮水平，使糖原合成和糖異生作用加強；二是淫羊藿內含有多糖成分，可作為外源性糖分補充和延緩機體運動對內源性糖分的消耗[12]；三是枸杞中的枸杞多糖亦可增加小鼠肝糖原儲備糧[13]。糖原的無氧糖酵解過程的代謝產物是乳酸，如果機體能量代謝能正常進行，乳酸會被運輸至肝進行進一步分解；如果運動過于劇烈或持久，或乳酸分解所需的維生素、礦物質缺乏，乳酸則會堆積；產生肌肉酸痛感和疲勞感[14-15]。馬鹿茸組合物可以降低大鼠游泳后血乳酸曲線下面積(P<0.05)，提示馬鹿茸組合物可以降低機體的血乳酸堆積，減輕機體的疲勞感。這可能與馬鹿茸增加有氧代謝能力，促進乳酸代謝有關[16]。尿素氮是氨基酸和蛋白質分解代謝的產物，機體運動后血清尿素氮含量降低，反應蛋白質參與供能的比例下降，而碳水化合物和脂肪參與供能的比例升高。本試驗中，馬鹿茸組合物組動物運動后的血清尿素氮含量與空白對照組未見統計學差異。

現代社會生活方式的改變及面對來自工作的壓力，人們十分容易出現疲勞的癥狀。隨著健康意識的提高、對自身體態的要求及紓解壓力，越來越多的人投入到運動健身中，但長時間、高強度的運動可能會使機體的疲勞越加嚴重。目前國內外均有從天然植物提取抗疲勞成分的報道[17]，旨在改善人們的生活。馬鹿茸組合物是在傳統中醫理論指導下，選取馬鹿茸、淫羊藿、黃精、枸杞組方，并經過加工、提取有效成分而成，本研究驗證了該馬鹿茸組合物具有緩解疲勞、延長運動時長的作用，其機制與增加機體肝糖原儲備和降低運動所引起的血乳酸堆積有關。