胰頭癌患者尿激酶型纖溶酶原激活劑與增殖細胞核抗原Ki-67的相關性及其對預后的影響

賈富鑫，劉萌萌，劉江偉

(1.鄭州大學附屬洛陽中心醫院 肝膽外科，河南 洛陽 471000；2.洛陽市疾病預防控制中心 傳染病控制所，河南 洛陽 471002；3.新疆軍區總醫院 新疆特殊環境醫學重點實驗室，新疆 烏魯木齊 830000)

胰腺癌是一種消化系統常見惡性腫瘤，約90%的胰腺癌發生于胰頭部，手術治療是患者唯一可獲得治愈機會的方式[1-2]。隨著外科技術的不斷進步，胰頭癌外科手術切除率也不斷提高，但其診治現狀仍不樂觀，患者預后大多沒有得到顯著改善[3]。胰腺癌的早期診斷和預后評估尚缺乏靈敏度和特異度均較高的腫瘤標志物[4]。研究發現，尿激酶型纖溶酶原激活劑(urokinase-type plasminogen activator，uPA)、增殖細胞核抗原Ki-67均參與腫瘤侵襲轉移的過程[5-6]。為更確切地反映胰頭癌的生物學行為和預后，本研究聯合檢測胰頭癌患者uPA與Ki-67的表達水平，分析二者的相關性及其對預后的影響。

1 資料與方法

1.1 一般資料以2000年1月至2007年12月于新疆軍區總醫院(38例)及鄭州大學附屬洛陽中心醫院(34例)接受胰頭癌根治術的72例患者作為研究對象。男45例，女27例，年齡為28～79歲，平均(58.65±1.30)歲。腫瘤大小(瘤體最大徑)≤2 cm者2例，>2 cm且≤4 cm者50例，>4 cm者20例。高、中、低分化腺癌分別為24、34、14例。TNM(UICC 1997年版本)分期：Ⅰ～Ⅱ期33例，Ⅲ～Ⅳ期39例。淋巴結轉移43例，無轉移29例。遠處轉移12例，無遠處轉移60例。納入標準：(1)經病理檢查確診為原發性胰腺導管腺癌；(2)無其他腫瘤史；(3)術前未接受化、放療及其他任何治療；(4)臨床及病理資料完整。排除標準：胰體尾部癌、非原發于胰腺的轉移癌及多發癌除外。通過電話等方式進行隨訪，獲取患者生存或死亡信息。本研究經鄭州大學附屬洛陽中心醫院醫學倫理委員會批準。

1.2 檢測方法uPA和Ki-67蛋白表達水平采用免疫組化SP法測定，uPA、Ki-67陽性切片(隨試劑一起包裝)作陽性對照，用PBS代替一抗作陰性對照。兔抗人uPA單克隆抗體(濃縮液)，工作濃度為1∶50，購自武漢博士德公司。鼠抗人Ki-67單克隆抗體(濃縮液)，工作濃度為1∶50，PV-9000試劑盒，DAB顯色液，均購自北京中杉金橋公司。由病理專科醫生獨立觀察切片，每例切片在400倍鏡下隨機選取5個視野進行計算并取其平均值，uPA和Ki-67蛋白表達均以切片中染色細胞比例10%以下為陰性，大于或等于10%為陽性。

1.3 統計學方法采用SPSS 25.0統計軟件進行數據分析。計數資料以率(%)表示，采用χ2檢驗。生存分析采用Kaplan-Meier法，比較組間生存曲線采用Log-rank檢驗。相關性分析應用χ2檢驗和Spearman相關。多因素生存分析采用Cox回歸分析。檢驗水準為α=0.05。

2 結果

2.1 隨訪結果72例患者中共有65例獲得完整隨訪，失訪率為9.7%(7/72)，隨訪時間為4～36個月，中位生存期為12個月，1年生存率為44.6%。

2.2 uPA和Ki-67蛋白的表達及相關性72例患者uPA和Ki-67陽性表達率分別為63.9%(46/72)及76.4%(55/72)，其中39例(54.2%)uPA(+)/Ki-67(+)，7例(9.7%)uPA(+)/Ki-67(-)組，16例(22.2%)uPA(-)/Ki-67(+)組，10例(13.9%)同時呈陰性表達，二者表達呈正相關(r=0.263，P=0.026)。uPA和Ki-67蛋白均與腫瘤組織分化程度(χ2=9.841、4.844，P=0.007、0.029)、臨床分期(χ2=13.543、10.484，P=0.004、0.015)及淋巴結轉移(χ2=14.182、3.182，P<0.001、P=0.044)有關，Ki-67與腫瘤直徑存在相關性(χ2=8.905，P=0.012)，uPA和Ki-67均與遠處轉移等無相關性(均P>0.05)。

2.3 生存分析比較uPA(+)/Ki-67(+)、uPA(+)/Ki-67(-)、uPA(-)/Ki-67(+)及uPA(-)/Ki-67(-)組患者術后生存曲線，uPA(-)/Ki-67(-)組患者術后生存期長于其他組，差異有統計學意義(Log-rank檢驗，χ2=50.483，P<0.001)。見圖1、表1。單因素生存分析(Kaplan-Meier法，Long-rank檢驗)顯示，uPA及Ki-67過表達(均P<0.001)、腫瘤組織分化程度(P<0.001)、淋巴結是否轉移(P=0.013)、臨床分期(P<0.001)與患者預后密切相關。將單因素分析有統計學意義的指標納入Cox比例風險回歸模型行多因素分析，結果表明腫瘤組織分化程度(P<0.001)、臨床分期(P=0.002)、uPA(P=0.001)及Ki-67過表達(P=0.001)是胰頭癌預后的獨立影響因素，總生存預測方程建立合理(χ2=69.221，P<0.001)。見表2。

圖1 胰頭癌組織不同uPA/Ki-67表達情況患者生存曲線

表1 胰頭癌組織不同uPA/Ki-67表達情況患者生存情況比較

表2 胰頭癌預后相關因素的多因素Cox回歸分析

3 討論

uPA是一種具有多種功能的絲氨酸蛋白水解酶，其與纖溶蛋白酶結合后可溶解細胞外基質和基底膜，是腫瘤細胞發生侵襲和轉移的先決條件[7]，其存在于許多腫瘤細胞內，并可用于腫瘤預后風險評估及作為可能的治療靶點[8-10]。He等[11]研究認為，外周血中的uPA mRNA可作為食管鱗狀細胞癌潛在的不利預后的生物標志物。董愛芬等[12]研究表明，uPA與口腔癌的淋巴結轉移、臨床分期及病理分級具有相關性，可作為評估口腔癌病情及預后的指標。Lampelj等[13]研究發現，uPA和PAI-1在惡性腫瘤的侵襲和轉移中起關鍵作用，兩種蛋白水解酶水平升高與乳腺癌患者預后不良有關。本研究顯示，uPA與胰頭癌組織分化程度、臨床分期及淋巴結是否轉移密切相關，提示uPA可作為評估胰頭癌病理分型的一項指標。同時，本研究發現uPA陰性組胰頭癌患者術后生存期高于uPA陽性組，uPA為影響胰頭癌預后的獨立因子。臨床分期高的胰頭癌患者uPA表達率更高，預后更差。

Ki-67是一種存在于增殖細胞中的核蛋白，又稱為MKi-67，在細胞增殖的G1、S、G2和M期中均有表達，但在G0期不表達[14]。Ki-67可作為反映腫瘤細胞群體增殖活性的可靠標記物[15]。研究表明，Ki-67參與多種惡性腫瘤的發生、發展過程并影響患者預后[16-19]。秦娟等[20]研究發現，Ki-67、P53和表皮生長因子受體協同促進胃癌發展，可作為判斷胃癌惡性程度的可靠指標。陳卓等[21]研究認為，Ki-67和P63表達增高可能與食管癌的發生、發展有關。許金金等[22]認為，Ki-67高表達與腦膠質瘤侵襲性高有關，可作為評估腫瘤發生、發展過程中較敏感的指標。本研究發現，Ki-67的表達與胰頭癌患者組織分化程度、臨床分期及淋巴結是否轉移密切相關，這與既往胰腺癌報道內容一致[23-25]，提示Ki-67與胰頭癌高增殖、浸潤生長和轉移有關。同時，生存分析顯示，Ki-67為胰頭癌預后的獨立危險因素。

胰腺癌的發生發展受包括細胞增殖、細胞外基質降解等多種因素調控，uPA和Ki-67均參于上述過程。本研究顯示，72例胰頭癌患者中uPA和Ki-67同為陽性的概率為54.2%(39/72)，Spearman相關性分析顯示，二者表達呈正相關，這與其在其他腫瘤中的報道一致[26-27]，表明在腫瘤發生發展中uPA和Ki-67可能共同參與細胞的增殖失控。同時，uPA和Ki-67均與腫瘤組織分化程度、淋巴結是否轉移及臨床分期密切相關，提示在胰頭癌的演變過程中，uPA與Ki-67是一對協同因素，均可影響胰頭癌的淋巴結轉移。uPA和Ki-67均與遠處轉移無顯著相關性，這可能與胰頭癌較胰體尾癌患者臨床表現出現早、患者及早得到手術治療概率高有關。本研究隨訪結果顯示，uPA和Ki-67均為陰性組患者術后生存期長于其他組。經多因素Cox比例風險回歸模型分析后發現，組織分化程度、臨床分期、uPA及Ki-67是影響胰頭癌患者預后的獨立危險因素。因此，聯合檢測uPA及Ki-67蛋白表達水平有助于更確切地評估胰頭癌患者預后，兩指標均陽性者術后復發可能性較大，需加大隨訪密度。

綜上所述，uPA與Ki-67在胰頭癌進展過程中是一對協同因素，其表達情況可作為判斷胰頭癌侵襲力和患者預后的重要指標。