鄭州地區獻血者人群中HLA-DRB1基因多態性與HBV相關性分析

康軼青

(河南省紅十字血液中心，河南 鄭州 450000)

乙型肝炎病毒(Hepatitis B Virus，HBV)感染是全球分布的重大公共衛生健康問題，乙肝病毒可以通過血液傳播，因此也是輸血安全研究領域中的重要研究方向。全球有2.57億人長期感染HBV，其中有15%～25%的HBV感染患者最終發展為肝硬化及肝癌。2015年，HBV感染在全球共造成了88.7萬人死亡[1]。我國更是乙肝大國，2015年國家調查數據顯示，1～59歲人群中HBsAg感染率為5.2%[2]，雖然健康成年人在受到乙型肝炎病毒感染后有90%以上會在半年內完全清除病毒并痊愈，但仍有8%～10%會逐漸轉為慢性乙型肝炎、肝硬化甚至是肝細胞癌[3]，HBV感染的結局在很大程度上取決于個體對病毒的免疫過程，免疫反應不同進而出現不同的臨床過程和表型[4-5]。人類白細胞抗原(human leukocyte antigen，HLA)在人類所有基因組中多態性最高，最為復雜，在人類免疫應答中的重要作用是提呈抗原以供T細胞識別，已有研究顯示機體對于HBV的易感性或抗性與個體HLA基因有關，感染后的轉歸和結局也會受到不同程度的影響，但由于全世界不同種族、不同地域人群的HLA等位基因及其單體型分布具有明顯特征性，因此各地的研究結論也不盡相同。

在本研究中，我們以通過分析比較兩組研究對象間HLA-DRB1等位基因分布差異，進一步研究鄭州地區HLA-DRB1多態性和病毒性乙型肝炎之間的關聯性，為針對病毒性乙型肝炎開展基因預防和基因治療提供理論基礎。

1 材料與方法

1.1 研究對象選取HBV抗體經過兩遍酶聯免疫吸附試驗(ELISA)檢測均陽性的129例獻血者為乙肝組，并以鄭州地區3 874例健康造血干細胞志愿者為對照組。所有血液標本的采集在征得獻血者同意的情況下進行。

1.2 HBV抗體檢測對乙肝組標本采用2個不同廠家的試劑盒(購自上海科華生物工程股份有限公司及北京萬泰生物藥業有限公司)進行兩遍 ELISA平行檢測。實驗操作和判定結果嚴格按照試劑盒說明書進行。

1.3 HLA檢測提取人類基因組DNA均采用TBG全自動DNA提取系統(DNA提取試劑盒購自美國TBG公司)，采用聚合酶鏈-序列特異性寡核苷酸鏈技術(Polymerase Chain Reaction-Sequence-Specific oligonucleotide，PCR-SS0)對HLA位點在Luminex平臺進行基因分型(SSOP試劑盒購自美國Thermo Fisher公司)。

1.4 統計學分析本研究采用SPSS 18.0統計分析軟件，利用χ2檢驗比較分析HBV陽性組和健康對照組中HLA-DRB1的基因分布，P<0.05為差異有統計學意義，OR值(odds ratio)及95%置信區間(95% confidence interval，95%CI)用于感染風險的評價。

2 結果

DRB1*09(P=0.031，OR=1.430)、DRB1*12(P=0.012，OR=1.569)的頻率在乙肝組中高于健康對照組，差異有統計學意義(均P<0.05)。見表1。

表1 HLA-DRB1基因型與乙型病毒性肝炎的相關性分析

3 討論

HBV感染后大多數人群能清除病毒，而有些人群感染后卻發展為肝炎甚至肝癌，說明HBV感染具有個體差異。HBV病毒的清除依賴于宿主的免疫應答差異，而個體的免疫應答能力取決于主要組織相容性復合體(major histocompatibility complex，MHC)[6]。HBV感染初期由于NK細胞介導的天然免疫反應缺失，宿主依靠MHC分子對HBV的識別并提呈給T細胞或B細胞，因此MHC分子是通過細胞免疫和體液免疫對HBV感染作出清除反應的[7-8]。

HLA-DRB1是HLA-Ⅱ類分子中最復雜、多態性最高的一種，很多國家和地區都有關于HLA-DRB1與HBV感染的相關性報道，但結果卻有所不同。大多數報道發現DRB1*13與人體對HBV感染的抗性及HBV自發清除有明顯相關性，也有報道稱DRB1*12與DRB1*14與促進HBV感染有關[9]，在中國人群中也有多個地區不同人群關于HLA-DRB1與HBV感染的相關性研究，其中浙江地區報道中發現 DRB1*09與HBV持續感染有相關性[10]，在青海、臺灣、哈爾濱、山東、河南等地區均有報道說明DRB1*12與HBV的感染、持續進展及轉化為肝癌都有著顯著相關性[11-17]，這些均與本研究結果一致。雖然本研究中DRB1*13在乙肝組低于健康對照組，但差異不顯著，而在劉錚等[17]報道中發現DRB1*13、DRB1*15 可能是保護機體的基因，DRB1*11可能是促進感染發生的基因，與我們的結果有所不同，其原因有可能為HBV感染患者與獻血者人群HBV陽性有所區別，因為要保證臨床輸血的安全性，所以獻血者人群中ELISA檢測試劑要求更為嚴格。

DRB1*09、DRB1*12等基因型與HBV抗體陽性有顯著正相關，可能為HBV感染的易感基因，為深入研究HLA基因型對人類HBV感染的影響提供了線索，從而達到在基因水平進行HBV的預防及治療。