我院地中海貧血的基因型特點(diǎn)

孔鳳珍 吳贊開(kāi) 溫嘉敏 劉惠

[摘要]目的 研究我院地中海貧血的基因型特點(diǎn)。方法 選取2016年1月～2018年6月在我院接受健康體檢及產(chǎn)前檢測(cè)的1600例受檢人員實(shí)施項(xiàng)目數(shù)據(jù)指標(biāo)分析，采用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)法+膜雜交法測(cè)定全部受檢人員的α地中海貧血或β地中海貧血型別，統(tǒng)計(jì)檢測(cè)結(jié)果。結(jié)果 1600例受檢人員中，地中海貧血的檢出率為47.19%，比較常見(jiàn)的有SEA雜合缺失的α地中海貧血、41-42位點(diǎn)雜合突變的β地中海貧血、3.7雜合缺失的α地中海貧血、654位點(diǎn)雜合突變的β地中海貧血、-28位點(diǎn)雜合突變的β地中海貧血、3.7缺失復(fù)合東南亞型缺失的α地中海貧血、17位點(diǎn)雜合突變的β地中海貧血及4.2雜合缺失的α地中海貧血、71-72位點(diǎn)雜合突變的β地中海貧血。結(jié)論 我院α地中海貧血型別以SEA雜合缺失為主，β地中海貧血型別以41-42位點(diǎn)雜合突變?yōu)橹鳎枰訌?qiáng)咨詢(xún)和干預(yù)管理，控制及減少地中海貧血情況。

[關(guān)鍵詞]α地中海貧血;β地中海貧血;型別

[中圖分類(lèi)號(hào)] R556.61? ? ? ? ? [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A? ? ? ? ? [文章編號(hào)] 1674-4721（2020）3（c）-0156-04

Genotypic characteristics of thalassemia in our hospital

KONG Feng-zhen? ?WU Zan-kai? ?WEN Jia-min? ?LIU Hui

Department of Laboratory， People′s Hospital of Gaoyao District in Zhaoqing City， Guangdong Province， Zhaoqing? ?526040， China

[Abstract] Objective To study the genotypic characteristics of thalassemia in our hospital. Methods From January 2016 to June 2018， 1600 health examinees and prenatal examinees in our hospital were selected and analyzed for item data. The α thalassemia or β thalassemia types of all the examinees were determined by polymerase chain reaction and membrane hybridization， and the statistical results were obtained. Results Among the 1600 subjects， the detection rate of thalassemia was 47.19%. The most common ones were α thalassemia with SEA heterozygosity deletion， β thalassemia with 41-42 heterozygosity mutation， α thalassemia with 3.7 heterozygosity deletion， β thalassemia with 654 heterozygosity mutation， β thalassemia with -28 heterozygosity mutation， 3.7 deletion combined with Southeast Asia type deletion of alpha thalassemia， 17-locus heterozygous mutation of beta-thalassemia and 4.2-locus heterozygous deletion of alpha-thalassemia， 71-72 locus heterozygous mutation of β thalassemia. Conclusion In our hospital， the main type of α thalassemia is sea heterozygous deletion， and the main type of β thalassemia is 41-42 heterozygosity mutation. It is necessary to strengthen counseling and intervention management to control and reduce the situation of thalassemia.

[Key words] α thalassemia; β thalassemia; Type

地中海貧血為常見(jiàn)的一種遺傳性血液疾病，α地中海貧血、β地中海貧血是地中海貧血常見(jiàn)的兩種類(lèi)型，地中海貧血的患病率較高，對(duì)地中海貧血患者機(jī)體健康帶來(lái)不良影響的同時(shí)，也導(dǎo)致地中海貧血患者心理健康受到一定影響，同時(shí)導(dǎo)致地中海貧血患者的日常生活質(zhì)量顯著下降[1-2]。不同地區(qū)的地中海貧血型別存在一定差異性，中國(guó)廣東省地中海貧血人數(shù)較多，嚴(yán)重?fù)p害人們的機(jī)體健康[3-4]。因此，實(shí)行地中海貧血檢測(cè)具有重要價(jià)值，有助于盡早檢出地中海貧血并予以及時(shí)干預(yù)[5-6]。本研究對(duì)在我院接受健康體檢及產(chǎn)前檢測(cè)的1600例受檢人員予以調(diào)查及統(tǒng)計(jì)，評(píng)估我院受檢人員地中海貧血型別的檢測(cè)結(jié)果，為本地區(qū)地中海貧血情況提供數(shù)據(jù)支持，現(xiàn)報(bào)道如下。

1資料與方法

1.1一般資料

選取2016年1月～2018年6月在我院接受健康體檢及產(chǎn)前檢測(cè)的1600例受檢人員，其中男451例，女1149例;年齡22～45歲，平均（30.59±2.65）歲。本研究已經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

納入標(biāo)準(zhǔn)：受檢人員自愿參與本研究并簽署知情同意書(shū)，且愿意接受地中海貧血檢測(cè)。排除標(biāo)準(zhǔn)：①存在缺鐵性貧血疾病者;②存在急性出血現(xiàn)象者。

1.2方法

1.2.1檢測(cè)儀器及試劑? 檢測(cè)儀器：ABI2720 PCR擴(kuò)增儀（美國(guó)賽默飛世爾）、HB2012A 凱普核酸分子雜交儀（潮州凱普生物化學(xué)有限公司），試劑：α-地中海貧血基因檢測(cè)試劑盒（廣州凱普醫(yī)藥科技有限公司）、β-地中海貧血基因檢測(cè)試劑盒（廣州凱普醫(yī)藥科技有限公司）。

1.2.2檢測(cè)方法? 采用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)法+膜雜交法。

1.2.3 DNA獲取方法? 采集受檢人員2 ml靜脈血，加入3倍體積溶血溶液，放在冰水浴內(nèi)靜置1 h，讓紅細(xì)胞溶血，實(shí)施離心干預(yù)，添加SE液（75 mmol/L氯化鈉，25 mmol/L乙二胺四乙酸）適宜懸浮細(xì)胞，添加十二烷基硫酸鈉（SDS）調(diào)節(jié)濃度至1%，將蛋白酶K加入，調(diào)節(jié)濃度到100 mg/L，在56℃水浴內(nèi)靜置7 h，采取等體積酚、酚/氯仿、氯仿/異戊醇各抽提1次，采取醋酸鈉/無(wú)水乙醇處理得到DNA[7]。

1.2.4聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)法? 采取DNA合成儀得到聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)引物及探針，設(shè)定反應(yīng)體積為50 μl，設(shè)定擴(kuò)增條件是94℃、50 s，50℃、50 s，70℃、50 s，實(shí)行30次循環(huán)[8]。

1.2.5 DNA電泳法? 得到10 μl擴(kuò)增產(chǎn)物，采取1.3%瓊脂糖予以凝膠電泳，于100伏電壓下實(shí)施1 h凝膠電泳，采取溴乙啶予以染色，于紫外檢測(cè)儀分析檢測(cè)結(jié)果[9]。

1.2.6反向斑點(diǎn)雜交法? 將反向斑點(diǎn)雜交膜條置入添加雜交液的反應(yīng)管內(nèi)，添加產(chǎn)物，采取水浴實(shí)施變性干預(yù)，予以過(guò)夜雜交，實(shí)行洗膜操作，添加酶對(duì)生物蛋白實(shí)行標(biāo)記，實(shí)行洗膜操作，添加酶底物予以顯色處理，分析檢測(cè)結(jié)果[10]。

2結(jié)果

1600例受檢人員中，檢測(cè)結(jié)果正常的有845名，占比52.81%（845/1600）;檢出地中海貧血755例，占比47.19%（755/1600）。其中，SEA雜合缺失的α地中海貧血最為常見(jiàn)，占比17.81%，其次是41-42位點(diǎn)雜合突變的β地中海貧血，占比5.31%，然后依次是3.7雜合缺失的α地中海貧血（4.81%）、654位點(diǎn)雜合突變的β地中海貧血（3.25%）、-28位點(diǎn)雜合突變的β地中海貧血（2.94%）、3.7缺失復(fù)合東南亞型缺失的α地中海貧血（1.94%）、17位點(diǎn)雜合突變的β地中海貧血（1.44%）及4.2雜合缺失的α地中海貧血（1.44%）、71-72位點(diǎn)雜合突變的β地中海貧血（1.12%），其余α地中海貧血或β地中海貧血不同型別所占比率均在1%以下（表1）。

3討論

地中海貧血為多見(jiàn)的一種溶血性疾病，主要由于珠蛋白產(chǎn)生存在障礙而引發(fā)，該疾病具有遺傳特征[11-13]。α地中海貧血、β地中海貧血為地中海貧血的常見(jiàn)類(lèi)型，同時(shí)也為廣東省較為高發(fā)的貧血類(lèi)型[14]。

本研究統(tǒng)計(jì)我院地中海貧血的型別情況，旨在為本地區(qū)地中海貧血的針對(duì)性干預(yù)及預(yù)防提供參考。本研究結(jié)果顯示，接受健康體檢及產(chǎn)前檢測(cè)的1600例受檢人員中，檢測(cè)結(jié)果不正常的占比高于47.00%，較常見(jiàn)的包括SEA雜合缺失的α地中海貧血（17.81%）、41-42位點(diǎn)雜合突變的β地中海貧血（5.31%）、3.7雜合缺失的α地中海貧血（4.81%）、654位點(diǎn)雜合突變的β地中海貧血（3.25%）、-28位點(diǎn)雜合突變的β地中海貧血（2.94%）、3.7缺失復(fù)合東南亞型缺失的α地中海貧血（1.94%）、17位點(diǎn)雜合突變的β地中海貧血（1.44%）及4.2雜合缺失的α地中海貧血（1.44%）、71-72位點(diǎn)雜合突變的β地中海貧血（1.12%），其余α地中海貧血或β地中海貧血不同型別較為少見(jiàn)，所占比率都處于1%以下。提示我院地中海貧血情況較為多見(jiàn)，有可能和本地區(qū)人們對(duì)地中海貧血的認(rèn)知度較低、婚前及產(chǎn)前接受地中海貧血檢測(cè)率較低等存在一定關(guān)系。黃爍丹等[15]的研究中，對(duì)廣東省梅州地區(qū)本市戶(hù)籍人口人員的血液標(biāo)本實(shí)施檢測(cè)，檢出血液學(xué)陽(yáng)性29 852例，明確存在地中海貧血的有18 770例，α地中海貧血相關(guān)基因突變類(lèi)型共有6種，α地中海貧血相關(guān)基因突變類(lèi)型最為常見(jiàn)的是-SEA，所占比率為75.224%，β地中海貧血相關(guān)基因突變類(lèi)型有14種，β地中海貧血相關(guān)基因突變類(lèi)型最為常見(jiàn)的是IVS-Ⅱ-654（C-T），所占比率為38.069%，然后是CD41/42（-TTCT），所占比率為33.626%。與本研究結(jié)果存在部分相似性，提示本研究結(jié)果具有可靠性。

綜上所述，我院α地中海貧血型別主要為SEA雜合缺失，β地中海貧血型別主要為41-42位點(diǎn)雜合突變，應(yīng)進(jìn)一步增強(qiáng)咨詢(xún)及干預(yù)管理，有效控制和減少地中海貧血情況。

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（收稿日期：2019-08-12? 本文編輯：閆? 佩）