冷凍精子復蘇及人工輸精

李德柏，李喜春，何 超

長春新牧科技有限公司，吉林長春 130000

1 精液復蘇

1.1 精液復蘇前的準備

精液復蘇之前需要檢查配種箱中溫度計、秒表、解精杯、輸精槍、槍套、鑷子、剪刀、衛生紙以及長臂手套是否齊全；液氮罐中是否裝滿液氮且罐中凍精數目是否夠用；調節水溫的熱水和涼水是否夠用。

溫度計校正后方可使用，調節水溫嚴禁使用牛舍水槽內的水，恒溫解凍杯在每次使用前先用溫度計校正水溫。

1.2 凍精復蘇過程及注意事項

輸精槍及槍套應提前預熱，水平直視溫度計刻度，將解精杯中水溫調至38～40 ℃，用鑷子夾取液氮罐中的凍精細管，將精液置于調好水溫的解精杯中，計時45 s，用紙巾擦熱輸精槍，以靠近臉部不燙為宜，精液復蘇后，用紙巾擦干細管表面水分，裝槍細管剪剪開細管封口，將預熱的輸精槍外套固定于輸精槍上，做好配種前精液保溫工作。

液氮罐中正在使用的提桶內只能裝1個大管精液，防止在精液提取的過程中對過多待用精液造成不良影響。精液復蘇必須在避光處進行，每次只能復蘇一根精液，從液氮罐取精液的過程中，提桶的提取高度要低于罐口10 cm。5 s內未能完成精液提取操作，則應將提桶再次放入液氮中，30 s后重試，從液氮中取出精液后，將凍精細管在空氣中暴露 1～2 s，使液氮揮發，防止爆管。復蘇水溫38～40 ℃，復蘇時間45 s，精液復蘇時，凍精細管必須完全浸于水中。用紙擦熱輸精槍，以靠近臉部感覺槍體微熱而不燙臉為宜。用細管剪剪掉細管封口時，剪口必須平整，且禁止將精液部分剪掉。輸精槍套上外套后，檢查輸精槍外套是否固定到輸精槍上。冬季配種時，輸精槍及槍套應提前預熱，并做好精液復蘇后的保溫工作。裝槍后，嘗試推出少量精液，觀察精液能否正常流出，防止精液倒流和槍套堵塞。

2 人工輸精

2.1 人工輸精步驟

對發情牛進行保定，清理直腸內糞便，并用紙巾擦去陰門外的糞便，左手握拳，在陰門上方垂直下壓，打開陰門，將輸精槍斜向上45°角進入陰道，槍頭達到子宮頸外口時，撕開槍套外的保護套，引導槍頭進入子宮體進行輸精。輸精后緩慢拔出輸精槍，觀查輸精槍外套的保護套是否脫落，避免精液流入輸精槍外套的保護套內造成配種失敗，最后對配種牛只進行詳細登記，記錄好配種時間和配種凍精編號。

2.2 人工輸精操作細節

①輸精槍進入陰道后槍頭位置與手應平行前進。②握住子宮頸向前推，將陰道拉直，將槍頭送抵子宮頸位置。③握住子宮頸口，閉合陰道穹窿，引導槍頭進入子宮頸。④活動手腕握住子宮頸，使輸精槍槍頭部位穿過子宮頸。⑤輸精前用手檢查槍頭在子宮體內的位置。⑥緩慢推動槍芯，將精液釋放到子宮體內。

配種員每周應修剪一次指甲，配種時不允許佩戴戒指或手表等裝飾物。配種前應該摸清子宮狀態，確定是否為有胎牛，育成初配牛檢查子宮發育是否正常有無生殖缺陷，對存在生殖缺陷牛只盡早淘汰。經產母牛檢查子宮恢復情況有無產后恢復不良等情況。對于子宮未回復牛只暫停輸精，子宮恢復正常后再對該牛進行配種。進槍時以向上進入分開的陰門前庭段后，略向前下方進入陰道宮頸段；輸精槍頭部到達子宮頸口時，撕開槍套外的保護套；用拇指和食指上下握住子宮頸口以閉合陰道穹窿并活動手腕引導槍頭進入子宮頸。切勿使用蠻力，防止傷害陰道穹窿；輸精槍頭部進入子宮體 2 cm 處，用手指確定槍頭位置并緩慢輸精。若輸精槍頭超出子宮頸2.5 cm，精液就只能釋放到一側子宮角，影響受胎率。凍精解凍后應在10 min內完成輸精操做。