高致病性H5N1禽流感病毒研究進展

黃薈穎 趙振偉 王然 肖勁男

[摘 要] H5N1禽流感病毒是一種高致病性病毒，是禽流感病毒的一種亞型。自1997年以來，該病毒每年都給大型家禽養殖者造成了重大經濟損失，近幾年在中國和越南還出現了變種病毒。本文對高致病性H5N1禽流感病毒的基本特征、致病力、檢測及疫苗等方面的研究情況進行總結，為高致病性H5N1禽流感的有效防控提供科學依據。

[關鍵詞] H5N1禽流感病毒;致病力;檢測;疫苗

[中圖分類號] S855.3 [文獻標識碼] A [文章編號] 1674-7909（2020）01-111-2

1 高致病性H5N1禽流感病毒概述

1.1 H5N1禽流感簡介

高致病性禽流感是21世紀最令人關注的人畜共患傳染病之一，在家禽之間呈流行性傳播，造成了嚴重的經濟損失。1997年，從我國香港農場和家禽市場的雞、鴨和鵝中分離出H5N1流感病毒。經測試，來自我國香港家禽市場的每種H5N1病毒對雞均具有致死性，在HA1的羧基末端具有多價氨基酸，根據定義，其對禽類具有高致病性。

1.2 H5N1禽流感病毒的進化

H5N1 HPAIV被H5 HA命名法分類為10個進化枝（0～9）和幾個第二進化枝，H5N1病毒已于2005—2006年在中國共同傳播，而2007—2009年中國家禽和水禽中的已傳播病毒屬于進化枝2.3.2、2.3.4和7[1]。自2005年以來，在中國北方的雞只中出現了進化枝7的H5N1 HPAIV。7.2型進化枝病毒于2008年在中國出現。1996年第一次在中國廣東的鵝中分離出H5N1病毒[2，3]，在此之后病毒繼續在中國進行傳播。1997年，在我國香港新界農場的雞中發生該流感[4]，其基因型與之前的相似。2003年人類H5N1發生表明，鵝/廣東樣病毒已分化為8種基因型。2005年在中國的青海湖野禽中發生了禽流感，經研究該種病毒后被定義為2.2枝[5]，同年2.2.1進化枝進入埃及。青海湖發生后，H5N1病毒繼續在亞洲、歐洲和非洲發生。2009年中期，一組2.3.2種病毒（2.3.2.1a）向西移動，在俄羅斯和歐洲也發現了類似的情況。2015年，在俄羅斯發現了2.3.2.1c病毒。近年來，2.3.4.4支病毒傳播廣泛，這些病毒還于2014年年底進入美國和加拿大。

1.3 H5N1禽流感病毒對動物的致病力

根據禽流感病毒對家禽的致病力強弱，一般被分為低致病性或高致病性，H5N1禽流感病毒則屬于后者，這是由于HA切割位點中多個堿性氨基酸積累的結果。與低致病性禽流感不同的是，高致病性禽流感發病迅速且死亡率高。

1996年發生H5N1禽流感后，世界各國都發生了不同程度的H5N1禽流感，其特征均為家禽、水禽及野禽大面積突然死亡，這些都證實了H5N1對禽類的高致病性。

H5N1禽流感病毒也可以感染哺乳動物，但是由很多因素決定。PA-X是一種甲型流感病毒（IAV）的融合蛋白。已有研究表明，缺失PA-X蛋白后會增強高致病性H5N1禽流感病毒對小鼠的致病性和復制力[6]。同時，對2012、2013年從越南分離出的病毒進行分析發現，其聚合復合體中PA蛋白中的2個氨基酸變化影響了小鼠中病毒聚合酶復合物的活性和毒力。2009年，H5N1和H1N1pdm09的共同流通引起了人們的擔憂，即重組事件可能導致高致病性流感病大發生。已有研究表明，從H1N1pdm09獲得NS片段會增強小鼠中H5N1的毒力[7]。

2 高致病性H5N1禽流感病毒檢測

根據世界動物衛生組織（OIE）的規定，雞胚病毒分離培養常用于禽流感的檢測。我國發布的針對H5N1亞型的國家檢測標準有《H5亞型禽流感病毒熒光RT-PCR檢測方法》《H5亞型禽流感病毒NASBA檢測方法》。近年來，許多研究利用生物傳感器來檢測病毒，如基于DNA模板的銀納米簇熒光分子信標，只要嵌入相應的識別序列，即可將設計精巧的分子信標方便地用于檢測多種毒力基因，包括H5N1病毒的基因[8]。適體傳感器也可以用于檢測，在診斷和檢測分析中適體代表了抗體作為識別劑的替代品，并具有優勢。2016年有學者提出了一個結合近紅外光與2個光子激發的H5N1病毒基因序列熒光檢測的分析平臺[9]。同時，已有研究提出了一種基于表面增強拉曼散射的數字微流體技術免疫測定方法，設計了一種夾心免疫測定法，可以靈敏地檢測出H5N1病毒[10]。

3 高致病性H5N1禽流感病毒的疫苗

3.1 滅活疫苗

利用反向遺傳技術，通過人工制造致病力極弱、很好地適應了在雞胚胎中生長的H5NI滅活疫苗種毒株，利用該毒株制成禽流感滅活疫苗[11]。

3.2 重組病毒載體疫苗

與滅活疫苗相比，重組的病毒載體疫苗能引發更多的輔助性T細胞產生免疫反應。給病毒基因注射一種保護性外來抗原來獲得重組病毒，免疫系統產生相應的目標蛋白，從而誘導免疫反應[12]。目前研制出的針對H5N1禽流感的重組病毒載體疫苗主要有禽痘病毒載體疫苗、新城疫病毒載體疫苗、火雞皰疹病毒載體疫苗、鴨腸炎病毒載體疫苗以及傳染性喉氣管炎病毒載體疫苗。

3.3 DNA疫苗

與其他疫苗相比，DNA疫苗具有更多的優勢。有研究報道在pCAGGS載體中插入optiHA從而構建出一種DNA疫苗，當肌肉注射給雞后會引起強烈的免疫反應[13]。為了提高針對H5N1流感病毒的DNA疫苗的功效，有研究在巨細胞病毒啟動子的上游和SV40晚期聚腺苷酸信號的下游插入3個重復的Kappa B（κB）基序，這些基序由5 bp核苷酸間隔區隔開，雞只中具有κB位點的變體刺激了針對目標抗原的更強的體液反應[14]。

4 結語

H5N1禽流感是一種嚴重傳染病，雖然近年來我國未發生過嚴重的H5N1禽流感，但是我們不能掉以輕心，病毒在不斷進化，所以繼續研發疫苗依然是重中之重，以保證養殖業穩定發展以及人類生命健康。

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