禽蛋產品沙門氏菌生化型和血清型分析

馬麗萍，張素艷，蔣 健

(余姚市朗霞街道辦事處， 浙江 余姚 315480)

沙門氏菌是公共衛生學上具有重要意義的人畜共患病病原菌之一，目前全世界已發現約2500種血清型。在世界各地的細菌性食物中毒中，沙門氏菌引起的中毒事件和病例數列為榜首。沙門氏菌源于家畜、家禽及糞便之中，常污染的食品為豬肉、雞肉、牛肉、鴨肉、香腸、火腿及熏肉制品和雞蛋等。其眾多的血清型中鼠傷寒沙門氏菌、腸炎沙門氏菌等是常見的污染菌，它們是引起人類沙門氏菌食物中毒的主要致病菌，已對食品安全構成了嚴重威脅。傳統的生化和血清分型方法目前仍然是流行病學調查中對食源性疾病病原菌鑒定分析的基礎手段。為了解人們生活必需的畜禽產品中沙門氏菌的污染狀況，于2015-2016年系統地開展了某地零售禽蛋產品中沙門氏菌監測，監測了4大類(鵪鶉蛋，鴨蛋，雞蛋，鵝蛋)，并對沙門氏菌分離株進行血清型和生化型分析研究，以揭示沙門氏菌分布狀況，流行病學特征以及菌株之間的同源性，為食源性疾病爆發的預防和控制提供技術支持。

1 材料與方法

1.1樣品 于2015年7月至2016年6月分別從某市各大超市、批發市場購買食品樣品209份(鵪鶉蛋58份，鴨蛋32份，雞蛋101份，鵝蛋18份)，置于2～8 ℃采樣箱中盡快送實驗室檢驗。

1.2培養基和試劑 沙門氏菌檢驗所需培養基(廣東環凱微生物科技有限公司)，沙門氏菌診斷血清(寧波天潤生物藥業有限公司)，API 20E生化鑒定試劑條及其配套試劑(法國梅里埃公司)。

1.3檢驗方法

1.3.1分離培養和生化鑒定 食品中沙門氏菌檢驗依據GB4789.4-2010《食品安全國家標準 食品微生物學檢驗 沙門氏菌檢驗》方法進行，疑似菌落經三糖鐵生化實驗和A-F O多價血清凝集實驗初篩，符合者進行API 20E生化試劑條鑒定。

1.3.2血清診斷 對分離的沙門氏菌用玻片凝集法進行血清分型。首先檢查沙門氏菌O抗原，與A-F群多價血清凝集的分別用O2、O4、O7、O8、O9、O10、O11因子血清分群，與A-F群多價血清不凝集者，則用OMA-OMG沙門氏菌多價血清凝集，再進行分群，最后以H血清鑒定其鞭毛抗原，參照沙門氏菌屬診斷抗原表，并根據生化反應特征，做出菌型診斷。

2 結果

2.1畜禽產品中沙門氏菌污染情況 209份樣本中，共檢出沙門氏菌陽性42份，總檢出率為20.10%。不同禽蛋產品中沙門氏菌的污染情況詳見表1，不同采樣地點沙門氏菌陽性檢出情況見表2。

雞蛋的蛋殼上殘留的污漬中，攜帶部分沙門氏菌，相鄰的雞蛋基本都有一定影響。本次實驗中，所有禽蛋類陽性樣品，未測出沙門氏菌腸毒素。

表2 不同采樣地點沙門氏菌陽性檢出情況

2.2畜禽產品中沙門氏菌分離株血清分型結果 42個陽性樣品中檢出的46株沙門氏菌，分為15個血清型。

2.3畜禽產品中沙門氏菌API 20E鑒定生化譜與血清型對應關系 46株菌株經API 20E鑒定，根據生化反應的不同，分為7種不同生化譜的沙門氏菌API生化型，主要的2種為API Ⅰ型(6704752)和API Ⅱ型(6704552)，分別占檢出菌株的52.17%和34.78%，這兩種主要API生化型的區別僅在于肌醇(INO)的陰陽性不同。由此可以看出沙門氏菌的生化特性比較穩定，以肌醇陰陽性不同為特征，可以將7種不同的沙門氏菌生化譜歸為兩大類。肌醇為陽性的包括5種：最主要的是API I型(6704752)，以及API Ⅲ型(6604752)鳥氨酸脫羧酶(ODC)陰性的沙門氏菌菌株，API Ⅳ型(6704742)鼠李糖(RHA)陰性的沙門氏菌菌株，API Ⅴ型(6704712)蜜二糖(MEL)陰性的沙門氏菌菌株，API Ⅵ型(6704352)山梨醇(SOR)陰性的沙門氏菌菌株。肌醇為陰性的包括2種：最主要的API Ⅱ型(6704552)和API Ⅶ型(2704552)賴氨酸脫羧酶(LDC)陰性的沙門氏菌菌株。

3 討論

食物傳播是人類感染沙門氏菌的主要途徑，肉類(尤其是畜禽肉)等很多食品都與沙門氏菌疾病有關。本次調查發現，禽蛋產品受到沙門氏菌污染的情況比較嚴重，209份食品中，沙門氏菌陽性樣品數為42份，其中制作蛋糕的雞蛋中檢出20份，總檢出率為9.57%。調查發現，農村市場零售禽蛋被沙門氏菌污染現象較大型超市和城市集貿市場普遍。這與目前禽蛋銷售逐漸走向集團化，超市、城市集貿市場和農貿市場的產品來自相同上級批發商，產品質量上基本無多大差異，只是超市和集貿市場均是集團管理，對銷售和貯藏的衛生條件較好，因而減少了致病菌的交叉污染。因此，加強禽蛋生產集團的運輸和銷售管理，是降低和控制食源性致病菌污染的關鍵。

在我國，引起食物中毒最常見的血清型主要是鼠傷寒沙門氏菌、德爾卑沙門氏菌和腸炎沙門氏菌等。本研究表明，某地禽蛋污染沙門氏菌血清型以德爾卑(21.74%)、鼠傷寒(10.87%)、腸炎(8.7%)、茨昂威(8.7%)、印第安納(8.7%)、韋太夫雷登(8.7%)為主。

本研究應用API 20E生化試劑條對分離菌株進行了鑒定，鑒定出7種不同生化譜的沙門氏菌API生化型。研究發現，不同血清型沙門氏菌菌株的生化反應具有相似性，差別不大，其主要的變化在于肌醇(INO)、鳥氨酸脫羧酶(ODC)、鼠李糖(RHA)、蜜二糖(MEL)、山梨醇(SOR)、拉氨酸脫羧酶(LDC)的反應，這與其他學者的研究結果也一致。對沙門氏菌分離菌株進行生化型和血清型研究分析，是沙門氏菌監測的首要任務，是流行病學調查的基礎，對當地禽蛋沙門氏菌監測和防治工作具有重要的理論和實踐意義。