β2-腎上腺素能受體基因多態(tài)性與慢性心力衰竭后室性心律失常的關系

王保功，劉華玲，王瑞麗，王學惠

(1.周口市中心醫(yī)院心血管內科，河南 周口 466000；2.周口市中心醫(yī)院小兒內科，河南 周口 466000；3.新鄉(xiāng)醫(yī)學院第一附屬醫(yī)院心血管內二科，河南 衛(wèi)輝453100)

慢性心力衰竭主要由各種心臟疾病進展引起，其發(fā)生、發(fā)展中神經(jīng)內分泌系統(tǒng)被激活后發(fā)揮重要作用：維持循環(huán)穩(wěn)定。β腎上腺素能受體作為神經(jīng)內分泌系統(tǒng)重要組成部分,其表達與心血管疾病發(fā)生密切相關,對心肌收縮能力介導且舒張血管[1]。慢性心力衰竭易合并心律失常，是導致患者死亡的主要原因之一[2,3]。目前臨床治療慢性心力衰竭合并心律失常以β受體阻滯劑、利尿劑等為主，關于其治療相關報道較多。近年來隨著對基因學研究的深入，關于基因多態(tài)性與心血管疾病診斷、治療或預后評估的關系報道不斷增多,而關于β腎上腺素能受體基因多態(tài)性與慢性心力衰竭患者的關系報道較少。有文獻發(fā)現(xiàn)β2受體基因改變是決定心力衰竭進展的1個重要要素[4]。基于此，本文主要分析β2-腎上腺素能受體基因多態(tài)性與慢性心力衰竭后室性心律失常的關系,為臨床疾病診治提供依據(jù)。現(xiàn)報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇本院2016年5月-2018年1月就診的慢性心力衰竭后室性心律失常患者115例，計為觀察組。入選標準：⑴年齡＞18歲，均為漢族人群；⑵經(jīng)既往病史、癥狀、相關實驗室檢查確診為慢性心力衰竭；⑶美國紐約心臟病學會 (NYHA)心功能分級II～IV級；⑷心電圖或心動圖檢查顯示室性心律失常。排除標準：⑴近期有急性心肌梗死病史；⑵肝、腎功能嚴重障礙：⑶腫瘤、嚴重感染、急性感染者；⑷慢性心力衰竭急性發(fā)作者；⑸合并嚴重糖尿病、心房顫動、甲亢者；⑹合并自身免疫性疾病、代謝異常者。其中男67例，女48例，年齡 40～72 歲，平均（52.46±5.86）歲，病程 6 個月～10 年，平均（3.62±2.48）年；其中冠心病 29 例，冠心病并發(fā)高血壓心臟病34例，擴張型心肌病52例；心功能分級：II級21例，III級46例，IV級48例。選擇同期行健康體檢的正常人員90例為對照組，其中男 53 例,女 37 例,年齡 38～69 歲,平均（50.96±6.00）歲。年齡、性別構成兩組比較差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），有可比性。本次研究所有對象均知情，并自愿參與。

1.2 方法 通過聚合酶鏈式反應法（PCR）測定β2-腎上腺素能受體基因多態(tài)性,脫氧核糖核酸（DNA）相關試劑盒購自美國GRENTRA公司，主要步驟：⑴標本采集：清晨空腹狀態(tài)對兩組對象肘靜脈采集4mL，乙二胺四乙酸（EDTA）抗凝，保存于零下80℃環(huán)境中。⑵DNA處理：嚴格按照試劑盒說明書操作，采取酚/氯仿法對標本中DNA提取，紫外分光光度計對DNA純度、濃度測定，依據(jù)結果將DNA濃度適當稀釋，保證OD1（波長260nm）/OD2（波長 280nm）比值 1.8～2.0；⑶PCR 擴增：本研究β2-腎上腺素能受體基因多態(tài)性位點包括16Arg/Gly、27Gln/Glu、178Arg A/C。PCR 反應體系體積50μl，包括正向引物 10μmol/L、逆向引物 10μmol/L、Taq酶、三磷酸脫氧核糖糖苷2mmol/L及DNA模板 10ng/μL。PCR 反應條件：94℃ 240s，94℃ 20s，55℃ 30s，72℃ 30s， 共 35 個循環(huán)，72℃最后延伸300s。⑷測序：測序反應含有引物1μmol/L、PCR產物 3μl和 測 序 試劑 Big Dye Terminator 1μl，共5μl。96孔板各孔內加入醋酸鈉乙醇溶液25μl，溶液中包括醋酸鈉3mol/L與100%乙醇，之后將Hi-Di甲酰胺10μl加入，95℃變性300s后快速放入冰內，冷卻后通過測序儀測序。

對觀察組患者性別、年齡、心功能分級、疾病類型等資料收集，分析上述資料與β2-腎上腺素能受體基因多態(tài)性的關系。

1.3 統(tǒng)計學處理 應用SPSS21.0統(tǒng)計軟件分析數(shù)據(jù)，Hardy-Weinberg平衡定律對樣本的群體代表性進行分析；計數(shù)資料以%表示,行χ2或秩和檢驗；P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 Hardy-Weinberg平衡定律分析結果 16Arg/Gly、27Gln/Glu、178Arg A/C 位點在觀察組與對照組基因型分布頻率方面符合Hardy-Weinberg平衡（P＞0.05），提示樣本有群體代表性。

2.2 各組β2-腎上腺素能受體基因型及等位基因頻率比較 觀察組多態(tài)性位點27Gln/Glu基因型中G/C型頻率明顯高于對照組，等位基因G頻率明顯高于對照組，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；多態(tài)性位點16Arg/Gly、178Arg A/C基因型及等位基因頻率兩組比較差異均無統(tǒng)計學意義 （P＞0.05）。見表1。

2.3 不同性別患者β2-腎上腺素能受體基因多態(tài)性位點27Gln/Glu分布 觀察組與對照組不同性別組間β2-腎上腺素能受體基因多態(tài)性位點27Gln/Glu基因型及等位基因頻率比較差異均無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。 見表 2。

2.4 不同心功能分級β2-腎上腺素能受體27Gln/Glu分布 多態(tài)性位點27Gln/Glu基因型中C/G型心功能IV級8例，所占比例最大，與CC型比較差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。 見表 3。

2.5 不同疾病類型β2-腎上腺素能受體27Gln/Glu分布 β2-腎上腺素能受體多位點27Gln/Glu基因型分布與原發(fā)性疾病無顯著相關性，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。 見表 4。

3 討論

表1 觀察組與對照組β2-腎上腺素能受體基因型、等位基因頻率比較[n（%）]

表2 不同性別β2-腎上腺素能受體基因多態(tài)性位點27Gln/Glu基因型、等位基因頻率比較[n（%）]

表3 不同心功能分級β2-腎上腺素能受體多態(tài)性位點27Gln/Glu基因型比較

表4 不同疾病類型β2-腎上腺素能受體多位點27Gln/Glu基因型比較

慢性心力衰竭后室性心律失常發(fā)病機制復雜,主要包括[5]：⑴原發(fā)性疾病。臨床上慢性心力衰竭一半以上由缺血性心肌病引起,第二則為擴張型心肌病，以心肌損傷或心肌壞死為病理改變，損傷心肌細胞經(jīng)由纖維組織取代,導致心肌組織纖維化，進而促心臟重構，造成心肌肥大，最終導致室性心律失常發(fā)生。⑵機械因素。慢性心力衰竭后導致左室容量及壓力上升,促心室重構，對心肌纖維牽拉，造成心肌電重構，進而誘發(fā)室性心律失常。⑶電解質異常；⑷神經(jīng)-體液-內分泌系統(tǒng)紊亂；⑸藥物因素。

目前關于慢性心力衰竭并室性心律失常的治療相關報道較多，療效各異，且多以綜合干預為主,無標準統(tǒng)一方案[6,7]。β腎上腺素能受體包括β1、β 2、β3等，與心血管疾病發(fā)生、發(fā)展密切相關，β受體阻滯劑在心血管疾病治療中比較常見。劉永生等[8]研究發(fā)現(xiàn)β2腎上腺素能受體基因多態(tài)性與冠心病發(fā)病有關，但與疾病嚴重程度無關，認為冠心病發(fā)病時多種基因改變及后天因素（環(huán)境、生活方式等）共同影響的結果。動物實驗發(fā)現(xiàn)β3-腎上腺素能受體參與慢性心力衰竭進展,其機制可能與它促心肌重構及心肌纖維化有關[9]。β2-腎上腺素能受體為G蛋白偶聯(lián)受體超家族成員之一，含有413個氨基酸，定位在5q上，已發(fā)現(xiàn)其多態(tài)性位點包括16Arg/Gly、27Gln/Glu等。較多研究表明β2腎上腺素能受體基因多態(tài)性與支氣管哮喘、高血壓等發(fā)病、進展可能有關[10-13]。李星輝等[14]研究發(fā)現(xiàn)β2腎上腺素能受體基因Arg16Gly、Gln27Glu多態(tài)性與高海拔地區(qū)藏族人群原發(fā)性高血壓發(fā)生無關。袁銘等[15]研究發(fā)現(xiàn)β2腎上腺素能受體Gly16Arg、Glu27Gln多態(tài)性與動脈硬化、心室重構密切相關。目前國內外關于β2腎上腺素能受體多態(tài)性與慢性心力衰竭、室性心律失常的關系報道尚少。本文選擇 16Arg/Gly、27Gln/Glu、178Arg A/C 為 β2腎上腺素能受體多態(tài)性觀察位點，結果顯示觀察組27Gln/Glu G/C型、等位基因G頻率比對照組均顯著高，提示27Gln/Glu雜合子（G/C型）可能是慢性心力衰竭后室性心律失常發(fā)生的易感因子，而16Arg/Gly、178Arg A/C多態(tài)性與慢性心力衰竭后室性心律失常無關。這可能與β2-腎上腺素能受體27Gln/Glu多態(tài)性對心肌收縮能力調節(jié)、影響自主神經(jīng)活性等,致使心臟自主神經(jīng)功能障礙發(fā)生有關[16]。有研究發(fā)現(xiàn)心力衰竭患者血清β1腎上腺素能受體水平下降，β2腎上腺素能受體水平幾乎不變，認為β2受體對心力衰竭引發(fā)心律失常可能有更大的判斷價值[17]。本文還發(fā)現(xiàn)β2-腎上腺素能受體多位點27Gln/Glu基因型與心功能分級有關，心功能分級越大，27Gln/Glu中G/C型比例越大。提示β2-腎上腺素能受體基因多態(tài)性可能與慢性心力衰竭嚴重程度有關。另外本文發(fā)現(xiàn)27Gln/Glu多態(tài)性與慢性心力衰竭后室性心律失常患者性別、原發(fā)性疾病類型無關。由于本文樣本量較少，且均為漢族人群，難以對全部慢性心力衰竭后室性心律失常患者反映，但通過本研究也可為慢性心力衰竭后室性心律失常分子遺傳學機制研究提供一定的參考。

綜上，β2-腎上腺素能受體基因多態(tài)性位點27Gln/Glu基因型G/C型可能是慢性心力衰竭后室性心律失常發(fā)生易感基因,且與慢性心力衰竭嚴重程度有關。