乳腺癌患者PTPRO、HER2和PIASy表達情況

王沖，邱衛強

（駐馬店市中心醫院醫學檢驗科，河南 駐馬店 463000）

乳腺癌（breast cancer,BC）為女性常見惡性腫瘤之一，近年來該病在女性中發病率逐年上升，且有年輕化趨勢，研究顯示乳腺癌平均發病年齡為45.8歲,其發病率與病死率分別為每年11.19/10萬及9.97/10萬左右[1]。選擇特異性腫瘤分子標志物，以建立靈敏高效的檢測方法是提高乳腺癌診療水平、改善患者預后的關鍵，其中受體O型蛋白酪氨酸磷酸酶 （protein epidermal growth factor receptor,PTPRO）為細胞增殖分化、代謝、細胞與細胞間通訊、基因轉錄及細胞存活等重要信號通路的媒介，參與細胞生長、分化、分裂周期、癌基因轉化等多種生物學過程[2,3]。表皮生長因子受體2（human epidermal growth foctor receptor 2,HER2）則是具有絡氨酸激酶活性的細胞跨膜受體糖蛋白,與乳腺癌異常增生、局部浸潤與轉移等密切相關[4]。激活的STAT蛋白抑制因子 （protein inhibitor of activated STAT，PIASy）同眾多轉錄因子發生作用，參與基因轉錄調控與細胞信號通路調控,在腫瘤發生發展中有重要功能[5]。本文主要分析乳腺癌患者中PTPRO、HER2、PIASy表達水平及其臨床意義,報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2016年5月至2018年4月我院收治的乳腺癌患者56例，納入標準：⑴均為單側乳腺病變，且有明確的病理學確診結果；⑵未接受放化療或內分泌治療；⑶接受乳腺癌根治術、改良根治術或保乳手術,腋窩淋巴結清掃數目超過10個，對本研究內容知情且簽署知情同意書。排除標準：⑴其他部位乳腺轉移癌或雙側乳腺癌者；⑵已行新輔助化療、放療或內分泌治療者；⑶合并其他惡性腫瘤或重心血管疾病。年齡26～73歲，平均（49.15±5.08）歲；TNM 分期：Ⅰ期 11 例，Ⅱ期 26例，Ⅲ期19例；有淋巴結轉移22例，無淋巴結轉移34例。

1.2 方法

1.2.1 標本采集及處理 取乳腺癌患者的乳腺癌癌組織、癌旁組織（距離乳腺癌組織邊緣5 cm以上，均經病理證實為無癌變標本）。對采集的標本以4%中性甲醛緩沖液固定,石蠟包埋后,切片成4 μm/片,以0.01 mol/L檸檬酸鹽緩沖液抗原熱修復，依據EnVision二步法 （試劑盒購自上海長島生物技術有限公司）進行染色，PTPRO與HER2抗體工作濃度均為1：100，應用DAB（試劑盒購自中山金橋生物有限公司）顯色，蘇木素對比染色，透明封固，后以鼠抗人即用型單克隆抗體血清（上海麥莎公司）作為代替對照，PBS代替一抗作為空白對照。

1.2.2 結果判讀PTPRO及PIASy細胞漿及細胞核出現明顯黃色至棕黃色顆粒為陽性細胞信號，采用染色強度（0～3 分）、陽性細胞數（0～4 分）與兩者積分乘積的半定量計數法,最后得分1～3分為陰性，＞3分為陽性。HER2：陽性表達定位于細胞膜，細胞膜無染色或≤10%的腫瘤細胞染色為陰性；＞10%腫瘤細胞呈弱染色,且細胞膜染色不完整，為陰性（+）；＞10%細胞呈弱至中度染色，細胞膜染色輕至中度完整，為弱陽性（++），＞10%腫瘤細胞呈細胞膜強染色為陽性（+++），弱陽性及陽性占比之和為HER2陽性率。

1.3 統計學方法 采用SPSS19.0軟件處理數據，計數資料以%表示，采取χ2檢驗，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 PTPRO、HER2、PIASy表達水平 乳腺癌患者癌組織PTPRO陽性率低于癌旁組織,而HER2、PIASy陽性率高于癌旁組織，P＜0.05。見表1、圖1。

表1 PTPRO、HER2、PIASy表達水[n(%)]

圖1 PTPRO、HER2、PIASy表達水平

2.2 PTPRO、HER2、PIASy表達水平與臨床病理參數的關系 無淋巴結轉移、PR陰性表達者PTPRO陽性率高于淋巴結轉移、PR陽性表達者，臨床分期Ⅲ～Ⅳ期、PR陽性表達者的HER2陽性率高于臨床分期Ⅰ～Ⅱ期、PR陰性表達者，臨床分期Ⅲ～Ⅳ期、有淋巴結轉移者PIASy陽性率高于臨床分期Ⅰ～Ⅱ期、無淋巴結轉移者，P＜0.05。見表2。

表2 PTPRO、HER2、PIASy表達水平與臨床病理參數的關系[n(%)]

3 討論

最新癌癥統計數據顯示,乳腺癌在國內女性中發病率位居腫瘤首位，死亡率占第4位，早期診斷為提高乳腺癌患者生活質量的重要手段[6]。PTPRO為新發現的潛在抑癌基因,作為蛋白絡氨酸激酶PTPs家族成員，PTPRO基因啟動子甲基化在乳腺癌發生發展中起著重要作用,同乳腺癌預后有密切關系，可作為獨立的預后生物學指標[7]。HER2也是參與乳腺癌病理進展的重要因子，HER2過度表達可能在乳腺癌異常增生、致瘤性及局部浸潤、轉移等方面發揮重要促進作用[8]。PIASy則是一種可抑制信號傳導與轉錄激活蛋白轉錄活性的蛋白質，研究發現其對乳腺癌具有較高的診斷靈敏度與準確度[9]。

本研究以癌旁組織作為對照,發現乳腺癌患者癌組織PTPRO陽性率低于癌旁組織,而HER2陽性率高于癌旁組織，這與李文梅等[10]的報道結果相似,表明在乳腺癌患者中,PTPRO呈低表達,而HE R2呈高表達狀態。PTPRO為受體型蛋白絡氨酸磷酸酶家族重要成員,該基因定位于人染色體12p1 2-p13,編碼全長由1215個氨基酸組成的蛋白質,包含1個由8個fibronec-tinⅢ樣結構域重復構成的胞外區，1個跨膜區，1個由活性催化區及活性調節區構成的胞內結構域[11]，在細胞周期中，受E2F1及miR-17-92協同調控，參與調節神經發育、腎臟結構與功能、單核巨噬細胞分化、淋巴細胞增殖與腫瘤形成[12,13]，HER2則定位于人染色體17q21，參與細胞生長因子信號傳導過程,若乳腺癌患者腫瘤細胞中HER2高表達，則會刺激細胞生長轉移，因此在乳腺癌患者中HER2高表達，可能與乳腺癌浸潤、侵襲性增強、復發與轉移、藥物治療抵抗等有關聯[14]。本研究中癌組織的PIASy陽性率也高于癌旁組織,這與朱杰等[15]的研究結果一致,表明在乳腺癌患者中PIASy呈高表達，PIASy蛋白最早是在STAT信號通路調控時發現的,其可抑制STAT蛋白轉錄活性，PIASy經sumo化促進p73蛋白酶體降解,高表達的PIASy可抑制p21轉錄，繼而調控p73α轉錄活性,在缺氧時PIASy途徑可抑制STRT1基因轉錄，繼而促進腫瘤轉移。

此外本研究也進一步對比了不同臨床病理患者上述指標表達水平，結果發現無淋巴結轉移、PR陰性表達者PTPRO陽性率高于淋巴結轉移、PR陽性表達者,臨床分期Ⅲ～Ⅳ期、PR陽性表達者的HE R2陽性率高于臨床分期Ⅰ～Ⅱ期、PR陰性表達者，臨床分期Ⅲ～Ⅳ期、有淋巴結轉移者PIASy陽性率高于臨床分期Ⅰ～Ⅱ期、無淋巴結轉移者,表明PTPRO、HER2、PIASy表達水平與乳腺癌患者臨床病理參數有密切關系。PTPRO在腫瘤發展過程中發揮重要抑制性調節作用的磷酸化酶,其表達下調會導致腫瘤細胞發生浸潤與轉移,第十七屆全國臨床腫瘤學大會[16]提出，PTPRO基因啟動子甲基化在乳腺癌發生發展中起著重要作用,可能與乳腺癌預后有關，并將PTPRO基因甲基化作為乳腺癌臨床診斷的新穎而無創性分子生物學指標。PIASy在缺氧環境下則能通過抑制SIRT1基因而促進腫瘤轉移，HER2也參與乳腺癌浸潤和轉移等生物學過程,因此HER2、PIASy的激活也是乳腺癌發展的潛在因素。

綜上所述，乳腺癌患者癌組織中PTPRO低表達，HER2、PIASy呈高表達,三者與臨床病理參數均有一定關聯，可對其進行檢測，指導臨床醫師制定個體化治療方案，提高乳腺癌的整體診療水平。