CCL5、CCL18、CXCL13 在類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者血清和滑液中的表達(dá)及臨床意義

王振杰 ，王菁 ，王曉東 ，程海華

（1.濮陽(yáng)市人民醫(yī)院風(fēng)濕免疫科，河南 濮陽(yáng) 457000；2.濮陽(yáng)醫(yī)學(xué)高等專科學(xué)校，河南 濮陽(yáng) 457000）

類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎（RA）為臨床上的一種常見(jiàn)的自身免疫性疾病,主要可累及關(guān)節(jié)及關(guān)節(jié)滑膜等組織，可見(jiàn)關(guān)節(jié)軟骨及骨質(zhì)破壞、滑膜炎、血管翳等病理改變[1,2]。目前RA的形成機(jī)制尚未完全清晰，分析其原因多與免疫、遺傳、環(huán)境以及機(jī)體諸多細(xì)胞因子異常表達(dá)相關(guān)[3,4]。隨著RA相關(guān)研究的逐漸深入,目前已明確趨化因子在本病炎性細(xì)胞的關(guān)節(jié)侵襲中發(fā)揮著至關(guān)重要的作用[5,6]。CXCL13為趨化因子CXC亞型,其表達(dá)水平與RA、成人Still病、系統(tǒng)性紅斑狼瘡等諸多自身免疫性病變的發(fā)生與演進(jìn)相關(guān)。趨化因子CC亞族受體5及受體18在RA患者關(guān)節(jié)炎性細(xì)胞中可見(jiàn)過(guò)高表達(dá)，說(shuō)明RA患者患關(guān)節(jié)內(nèi)CC亞族趨化因子受體的相應(yīng)配體合成增多，選擇性趨化CC亞族趨化因子受體，使陽(yáng)性白細(xì)胞亞群大量進(jìn)入至患關(guān)節(jié)內(nèi)。為了明確CCL5、CCL18、CXCL13在 RA患者患關(guān)節(jié)滑液與血清中的表達(dá)情況，及其與RA病情活動(dòng)度的相關(guān)性，本院特開(kāi)展本次研究，以為RA的臨床診斷與病情活動(dòng)度評(píng)估提供新的參考。現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取本院2015年1月-2018年12月間收治的91例RA患者納入RA組,另選取同期本院收治的91例骨關(guān)節(jié)炎（OA）患者納入OA組。OA組中男29例，女62例；年齡為36～78歲，平均57.65±8.79 歲；病程 1.2～15 年,平均 9.62±3.34 年。RA組中男28例，女63例；年齡為35～76歲，平均56.87±8.12 歲；病程為 1～16 年,平均 9.73±3.52 年。兩組患者的一般資料差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P>0.05。

1.2 病例選取標(biāo)準(zhǔn) 診斷標(biāo)準(zhǔn)：歐洲抗風(fēng)濕聯(lián)盟與美國(guó)風(fēng)濕病協(xié)會(huì)所制定的RA診斷標(biāo)準(zhǔn)、《骨關(guān)節(jié)炎診治指南(2007年版)》[7,8]。納入標(biāo)準(zhǔn)：⑴符合上述RA或OA診斷標(biāo)準(zhǔn)的患者；⑵相關(guān)檢查、臨床資料完整的患者；⑶自愿參與本次研究，且符合知情同意書(shū)的患者。排除標(biāo)準(zhǔn)：⑴入組前1個(gè)月內(nèi)有感染性疾病史者；⑵入組前6個(gè)月內(nèi)有外傷或手術(shù)、穿刺史者；⑶處于妊娠、哺乳等特殊生理時(shí)期的患者；⑷合并惡性腫瘤患者；⑸合并其他自身免疫性疾病、血液系統(tǒng)疾病的患者。本次研究經(jīng)本院倫理委員會(huì)審批。

1.3 檢測(cè)方法 全部患者均于本院確診后，首次治療前，抽取清晨空腹靜脈血6ml，抽取患關(guān)節(jié)滑液3ml。血樣使用離心機(jī)按3000r/min速度離心處理10min,取得血清待檢,如需儲(chǔ)存則置于-80℃專用冰箱內(nèi)；使用酶標(biāo)儀，按免疫酶聯(lián)吸附法檢測(cè)血清、滑液中CCL5、CCL18、CXCL13水平，試劑盒均購(gòu)自美國(guó)R&D公司。

1.4 分析方法 對(duì)比兩組患者血清與患關(guān)節(jié)滑液中 CCL5、CCL18、CXCL13 水平,分析 CCL5、CCL18、CXCL13水平與RA發(fā)生的相關(guān)性。對(duì)RA組患者分別以紅細(xì)胞沉降率計(jì)算的28個(gè)關(guān)節(jié)疾病活動(dòng)指數(shù)（DAS28ESR）、臨床疾病活動(dòng)性指數(shù)（CDAI）、簡(jiǎn)化疾病活動(dòng)性指數(shù)（SDAI）評(píng)估病情活動(dòng)程度[9]。DAS28ESR、CDAI、SDAI均以得分越高表明病情活動(dòng)度越高。分析RA患者病情活動(dòng)程度與血清、患關(guān)節(jié)滑液CCL5、CCL18、CXCL13水平的相關(guān)性。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 使用SPSS 21.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。計(jì)量數(shù)據(jù)對(duì)比采取獨(dú)立t檢驗(yàn)，按x±s格式描述；等級(jí)資料相關(guān)性采取Spearman檢驗(yàn)，連續(xù)資料相關(guān)性采取Pearson檢驗(yàn)，r>0為正相關(guān)、r<0為負(fù)相關(guān)，以|r|≥0.8為高度相關(guān)性，0.5≤|r|<0.8為中度相關(guān)性，0.3≤|r|<0.5為低度相關(guān)性，|r|<0.3為基本不相關(guān)。P<0.05為具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 血清檢驗(yàn) RA組患者血清CCL5、CCL18、CXCL13水平高于OA組患者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；見(jiàn)表 1。

表1 兩組患者血清CCL5、CCL18、CXCL13對(duì)比(x±s)

2.2 患關(guān)節(jié)滑液檢驗(yàn) RA組患者患關(guān)節(jié)滑液CCL5、CCL18、CXCL13 水平高于 OA 組患者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；見(jiàn)表 2。

表2 兩組患者患關(guān)節(jié)滑液CCL5、CCL18、CXCL13對(duì)比(x±s)

2.3 RA疾病發(fā)生相關(guān)性分析 血清、患關(guān)節(jié)滑液CCL5、CCL18、CXCL13水平與 RA疾病發(fā)生均具有高度正相關(guān)性，r≥0.8，P<0.05；見(jiàn)表 3。

表3 RA疾病發(fā)生與血清、滑液CCL5、CCL18、CXCL13水平相關(guān)性分析

2.4 RA病情活動(dòng)程度相關(guān)性分析 血清、患關(guān)節(jié)滑液 CCL5、CCL18、CXCL13水平與 RA病情活動(dòng)程度均具有高度正相關(guān)性，r≥0.8，P<0.05；見(jiàn)表4。

表4 RA病情活動(dòng)程度與血清、滑液CCL5、CCL18、CXCL13水平相關(guān)性分析

3 討論

RA為臨床上常見(jiàn)疾病,可導(dǎo)致患者關(guān)節(jié)腫大、變形，嚴(yán)重者甚至可能致殘，給患者的生活質(zhì)量造成極大不良影響[10]。目前，RA尚無(wú)特效根治療法，臨床治療仍以積極控制病情、緩解臨床癥狀以及對(duì)癥治療等為主要手段[11]。隨著RA相關(guān)研究的不斷豐富與深入，B細(xì)胞在RA致病機(jī)制中的作用逐漸得到廣泛關(guān)注,通過(guò)抗CD20單抗類藥物清除RA患者機(jī)體內(nèi)B細(xì)胞的療法取得了較理想療效，從而證實(shí)了B細(xì)胞在RA發(fā)生與演進(jìn)過(guò)程中所扮演的重要角色。但目前這一療法仍有其局限性，有部分RA患者對(duì)該療法不敏感，因此我們認(rèn)為可能存在有一部分以B細(xì)胞為致病細(xì)胞的RA患者，對(duì)于此類患者通過(guò)抗CD20單抗類藥物治療可取得理想療效。同時(shí)，盡早診斷或預(yù)判RA對(duì)于疾病的治療、控制與預(yù)防均具有重要意義。

人體B細(xì)胞具有一系列趨化因子，分為：CXC型（α-趨化因子）、CC 型（β-趨化因子）、C 型（γ-趨化因子）、CX3C 型（δ-趨化因子）[12]。 CCL5、CCL18、CXCL13均為B細(xì)胞的趨化因子，目前我國(guó)已有部分關(guān)于RA患者血清、患關(guān)節(jié)滑液及炎性細(xì)胞等CCL5、CXCL13表達(dá)水平的相關(guān)研究，但對(duì)于CCL 18的研究較少。血清CXCL13具有調(diào)節(jié)白細(xì)胞介素-6（IL-6）、腫瘤壞死因子-α（TNF-α）等炎性因子的作用,并通過(guò)這一途徑參與機(jī)體炎性應(yīng)激反應(yīng)過(guò)程中，其表達(dá)水平與RA的發(fā)生、炎性反應(yīng)進(jìn)程均具有密切相關(guān)性。有研究表明，血清CXCL13水平的異常升高提示RA病情的活動(dòng)度較高，認(rèn)為血清CXCL13可作為RA強(qiáng)化治療的一項(xiàng)血清標(biāo)志物[13]。同時(shí)，由于血清CXCL13與RA病情活動(dòng)度的明確相關(guān)性，其還可作為RA患者病情程度的監(jiān)測(cè)的指標(biāo)及RA療效評(píng)估當(dāng)中。CCL18能夠誘導(dǎo)人體B細(xì)胞、T細(xì)胞、造血祖細(xì)胞、樹(shù)突狀細(xì)胞（DC）、單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、纖維原細(xì)胞等諸多細(xì)胞的生物反應(yīng)，但對(duì)中性粒細(xì)胞無(wú)效[14]。CCL18蛋白質(zhì)合成需在白細(xì)胞介素-10（IL-10）及維生素D3聯(lián)合作用下發(fā)生，RA患者因炎性應(yīng)激反應(yīng)而導(dǎo)致IL-10異常升高，從而激活CCL18大量釋放。而過(guò)量釋放的CCL18可作用于巨噬細(xì)胞、DC等抗原遞呈細(xì)胞，從而使RA炎性反應(yīng)加重，繼而使患者整體病情進(jìn)展。CCL5可與靶細(xì)胞表層基因CCR5選擇性結(jié)合，而特異性的趨化CCR5的陽(yáng)性白細(xì)胞亞群大量積聚于炎癥病灶。免疫病理學(xué)研究認(rèn)為，RA類患者患關(guān)節(jié)滑膜組織中T細(xì)胞主要為TH1表型[15]。而CCL5在介導(dǎo)TH1向RA炎癥病灶游走中發(fā)揮重要的促進(jìn)作用,從而可致炎癥病變反復(fù)遷延不愈。

本研究中,我們對(duì)RA患者與OA患者血清、患關(guān)節(jié)滑液中的CCL5、CCL18、CXCL13水平進(jìn)行檢測(cè)對(duì)比，結(jié)果表明，RA患者血清、患關(guān)節(jié)滑液中的CCL5、CCL18、CXCL13水平均顯著高于OA患者；為檢測(cè)血清、患關(guān)節(jié)滑液中的CCL5、CCL18、CXCL13水平作為RA診斷的輔助指標(biāo)提供了理論支持，同時(shí)也提示RA患者的血清、患關(guān)節(jié)滑液中CCL5、CCL18、CXCL13存在著明確的異常升高表達(dá)。這一研究與以往研究中認(rèn)為RA患者血清、患關(guān)節(jié)滑液中趨化因子系列存在有明確升高表達(dá)結(jié)論相符[16,17]。經(jīng)相關(guān)分析可知，血清、患關(guān)節(jié)滑液CCL5、CCL18、CXCL13水平與 RA 疾病發(fā)生、病情活動(dòng)度間均具有高度正相關(guān)性；提示，血清、患關(guān)節(jié)滑液CCL5、CCL18、CXCL13水平的異常升高與RA發(fā)病密切相關(guān),且其表達(dá)水平隨RA病情活動(dòng)程度加重而升高。本次研究中本院對(duì)于以往研究中涉及較少的CCL5、CCL18、CXCL13在血清與關(guān)節(jié)滑液中的表達(dá)水平進(jìn)行了詳細(xì)檢測(cè)與分析，可為類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎今后的臨床診斷提供參考。

綜上所述，血清、患關(guān)節(jié)滑液CCL5、CCL18、CXCL13水平與類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的發(fā)生及病情活動(dòng)程度密切相關(guān)，因此，其可作為RA診斷、病情活動(dòng)度評(píng)估、RA強(qiáng)化治療判斷、RA療效觀察等的參考指標(biāo)應(yīng)用于臨床。