結(jié)核病患者外周血T淋巴細(xì)胞亞群及ADA檢測(cè)意義的探討

馬賽君，張寶華

（聯(lián)勤保障部隊(duì)第900醫(yī)院梅峰院區(qū)檢驗(yàn)科，福建 福州 350003）

結(jié)核病是由結(jié)核分支桿菌引起的傳染性疾病，具有傳染性強(qiáng)、病程緩慢、可累計(jì)全身多個(gè)器官等臨床特征[1]，發(fā)病率及患者的病死率均較高，嚴(yán)重危害到人類的生命健康[2]。其中以肺結(jié)核最為常見(jiàn)，約占發(fā)病總數(shù)的80%-90%，其余為肝、腦、腸、淋巴等肺外結(jié)核[3]。由于結(jié)核病的免疫主要是T細(xì)胞介導(dǎo)細(xì)胞免疫，機(jī)體T淋巴細(xì)胞亞群對(duì)結(jié)核病的發(fā)生、發(fā)展意義重大。研究表明T淋巴細(xì)胞亞群的異常是結(jié)核病灶存在與發(fā)展的基礎(chǔ)[4]。另外ADA是一種對(duì)機(jī)體細(xì)胞免疫活性有重要作用的核酸代謝酶[3]，在T淋巴細(xì)胞的分化與成熟過(guò)程中不可或缺[4]，其活性可以反映機(jī)體的免疫功能狀態(tài)，并且與T淋巴細(xì)胞亞群比例變化具有一定的相關(guān)性[5]。為此我們對(duì)82例結(jié)核患者外周血中T淋巴細(xì)胞亞群及ADA活性進(jìn)行檢測(cè)，旨在探討二者的變化規(guī)律及與結(jié)核病的相關(guān)性，以期為臨床診斷與治療提供一定的理論依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集2017年5月至2018年5月，在本院接受住院治療的結(jié)核病患者84例。結(jié)核病確診按照《臨床診療手冊(cè)（結(jié)核病分冊(cè)）》[6]，經(jīng)結(jié)核分枝桿菌培養(yǎng)及臨床確診。排除腫瘤、免疫系統(tǒng)疾病、服用免疫抑制藥物的患者及哺乳期婦女、孕婦等。同時(shí)按發(fā)病部位將87例患者分為肺結(jié)核組63例和肺外結(jié)核組24例。其中肺結(jié)核組中，男46例，女17例，年齡15-81歲，平均(50.4±19.6)歲。肺外結(jié)核組中，男17例，女7例，年齡17-82歲，平均(42.0±20.2)，其中結(jié)核性胸膜炎15例，結(jié)核性腦膜炎3例，頸部淋巴結(jié)核3例，泌尿系統(tǒng)結(jié)核2例，附睪結(jié)核1例。隨機(jī)選擇我院同期健康體檢20例作為對(duì)照組,其中男11例，女9例，年齡22-80歲，平均(47.0±17.5)。各組對(duì)象的一般資料比較差異均無(wú)顯著性( P ＞0.05)，具有可比性。

1.2 儀器與試劑

主要儀器：美國(guó)BD公司FACSCalibur四色流式細(xì)胞儀和美國(guó)Beckman AU5800 全自動(dòng)生化分析儀。主要試劑：淋巴細(xì)胞亞群檢測(cè)試劑盒(美國(guó)BD公司)，ADA檢測(cè)試劑盒（寧波美康生物科技股份有限公司）。

1.3 方法

1.3.1 T淋巴細(xì)胞亞群檢測(cè)

1)將每個(gè)患者30μl乙二胺四乙酸(EDTA)抗凝血加入試管底部同時(shí)加入10μl CD3FITC/CD8PE/CD45PerCP/CD4APC單克隆抗體充分混勻，避光，室溫孵育15分鐘。

2)溶血：向管中加300ul1×BD lysing solution，避光，室溫孵育10分鐘。

3)打 開(kāi)Work listmanager 軟件，在Panel 中選擇“CD3CD8CD45CD4”，調(diào)出儀器質(zhì)控條件，開(kāi)始檢測(cè)樣本。分析CD3+、CD3+CD4+、CD3+CD8+T淋巴細(xì)胞百分比，計(jì)算出CD4+/CD8+比值。

1.3.2 ADA活性檢測(cè)：應(yīng)用全自動(dòng)生化分析儀測(cè)定結(jié)核患者以及健康對(duì)照組的血清腺苷脫氨酶（ADA）的總活性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

應(yīng)用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示，兩組間比較采用t檢驗(yàn)，多組間比較采用方差分析。計(jì)數(shù)資料采用x2檢驗(yàn)，P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 不同年齡階段結(jié)核患者T淋巴細(xì)胞亞群、ADA檢測(cè)結(jié)果比較

將不同年齡階段的結(jié)核患者分為4個(gè)組別（＜30歲、31-50歲、51-70歲、＞70歲），T檢驗(yàn)與方差分析結(jié)果如表1所示：31-50歲與51-70歲組患者的CD3+、CD4+T淋巴細(xì)胞表達(dá)率明顯高于高齡組患者（＞70歲），差異顯著（P＜0.05），這與井楠[7]等的研究結(jié)果一致，說(shuō)明結(jié)核病高齡患者的細(xì)胞免疫水平相較于中青年患者更為低下；其余指標(biāo)如CD8+、CD4+/CD8+及ADA，各組的檢測(cè)結(jié)果差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

2.2 T淋巴細(xì)胞亞群、ADA檢測(cè)結(jié)果比較

結(jié)核患者與健康對(duì)照組T淋巴細(xì)胞亞群及ADA檢測(cè)結(jié)果統(tǒng)計(jì)詳見(jiàn)表2：結(jié)核患者CD3+、CD4+T淋巴細(xì)胞表達(dá)率均低于健康對(duì)照組，ADA活性則高于健康對(duì)照組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；而CD8+T淋巴細(xì)胞表達(dá)率、CD4+/CD8+表達(dá)率比值兩個(gè)指標(biāo)的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；另外肺結(jié)核組與肺外結(jié)核組相比，各指標(biāo)的差異也無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

表1 結(jié)核患者各年齡階段T淋巴細(xì)胞亞群、ADA結(jié)果分析(±s)

表1 結(jié)核患者各年齡階段T淋巴細(xì)胞亞群、ADA結(jié)果分析(±s)

注：與＞70歲組比較，aP＜0.05

組別 例數(shù) CD3+(%) CD4+(%) CD8+(%) CD4+/CD8+ ADA＜30歲 25 66.0±11.2 33.6±8.2 29.6±9.4 1.3±0.6 15.8±6.631-50歲 23 68.9±7.2a 37.3±8.8a 28.4±8.5 1.5±0.6 15.5±7.551-70歲 22 66.9±8.0a 39.7±8.5a 24.5±8.7 1.8±0.9 14.9±8.7＞70歲 17 60.2±12.8 29.8±10.5 28.3±9.7 1.4±0.6 16.5±9.2 F 2.671 4.686 1.326 1.437 0.138 P 0.049 0.004 0.277 0.238 0.937

表2 結(jié)核患者與健康對(duì)照組T淋巴細(xì)胞亞群與ADA結(jié)果分析(±s)

注：與對(duì)照組比較，aP＜0.05，

組別 例數(shù) CD3+(%) CD4+(%) CD8+(%) CD4+/CD8+ ADA肺結(jié)核組 63 65.6±10.5a 34.6±9.9a 28.2±9.6 1.4±1.2 14.6±6.9a肺外結(jié)核組 24 66.5±9.3a 35.7±8.2a 29.1±7.9 1.3±0.5 18.5±9.3a健康對(duì)照組 20 72.6±4.4 42.2±4.3 27.5±5.3 1.6±0.5 8.5±1.4 F 4.239 4.913 0.496 1.533 11.478 P 0.017 0.009 0.610 0.221 0.000

3 討 論

由于結(jié)核桿菌是胞內(nèi)寄生菌，機(jī)體的抗結(jié)核免疫以細(xì)胞免疫為主，并且主要取決于T淋巴細(xì)胞[2]。在正常生理狀態(tài)下，T淋巴細(xì)胞亞群數(shù)量與比例相對(duì)穩(wěn)定，如若失衡則可能造成機(jī)體免疫力下降，容易受病菌侵襲[2,8]。大量研究[9-12]表明結(jié)核病患者的外周血T淋巴細(xì)胞亞群存在異常改變的現(xiàn)象。然而有部分實(shí)驗(yàn)結(jié)果不一致，如關(guān)于CD4+T淋巴細(xì)胞表達(dá)率與CD8+T淋巴細(xì)胞表達(dá)率，Leung WL[9]等研究發(fā)現(xiàn)結(jié)核患者外周血中上述指標(biāo)與健康對(duì)照組比較時(shí)沒(méi)有顯著差異，但略有升高趨勢(shì)；周穎[10]等則發(fā)現(xiàn)肺結(jié)核組的上述指標(biāo)（絕對(duì)值水平）均顯著低于正常組；王景勝[11]等認(rèn)為結(jié)核患者CD4+T淋巴細(xì)胞表達(dá)率明顯低于正常組，而CD8+T淋巴細(xì)胞表達(dá)率明顯高于正常組。

本文采用流式細(xì)胞術(shù)對(duì)結(jié)核病患者T淋巴細(xì)胞亞群進(jìn)行檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)結(jié)合患者外周血中CD3+、CD4+T淋巴細(xì)胞比例與健康對(duì)照組相比明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，這與大部分文獻(xiàn)[10-11]報(bào)道一致；CD8+淋巴細(xì)胞表達(dá)率與健康對(duì)照組相比略有增加，不過(guò)無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05），與Leung WL[9]等報(bào)道一致；CD4+/CD8+比值與對(duì)照組相比略有下降，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）。眾所周知，機(jī)體的抗結(jié)核免疫力與T淋巴細(xì)胞密切相關(guān)，尤其是CD4+T淋巴細(xì)胞[12]，故CD4+T淋巴細(xì)胞表達(dá)率下降能反映出結(jié)核患者的免疫功能不良。近年來(lái)研究者逐漸重視CD8+T淋巴細(xì)胞在結(jié)核病診斷中的作用，雖然有結(jié)果顯示CD8+T淋巴細(xì)胞表達(dá)率在結(jié)核患者外周血中顯著增高[11]，但仍有爭(zhēng)議；如楊銘等[12]統(tǒng)計(jì)發(fā)現(xiàn)1561名肺結(jié)核患者中有743例CD8+T淋巴細(xì)胞降低（占47.60%），而升高的患者較少。因此，結(jié)核患者外周血T淋巴細(xì)胞亞群相對(duì)于健康對(duì)照組，其最典型的特點(diǎn)為CD3+T淋巴細(xì)胞、CD4+T淋巴細(xì)胞的表達(dá)率減少，且CD3+T淋巴細(xì)胞減少的原因主要是CD3+CD4+T淋巴細(xì)胞減少導(dǎo)致，而CD8+T淋巴細(xì)胞與結(jié)核病的關(guān)系則有待更深入研究。

ADA在血液細(xì)胞中以T淋巴細(xì)胞含量最為豐富[13]。目前主流觀點(diǎn)認(rèn)為：ADA是促進(jìn)T淋巴細(xì)胞分化成熟的成分，持續(xù)高活性的ADA能夠使T淋巴細(xì)胞處于旺盛的增殖狀態(tài)[4]；其活性可反映細(xì)胞免疫的功能狀態(tài)，是活動(dòng)性肺結(jié)核輔助性T淋巴細(xì)胞(CD4+)的一種標(biāo)志物[13]。然而也有觀點(diǎn)認(rèn)為外周血ADA水平缺乏特異性，對(duì)活動(dòng)性肺結(jié)核的診斷意義有待進(jìn)一步考察[14]。本研究顯示肺結(jié)核和肺外結(jié)核患者外周血ADA水平均顯著增高，與健康對(duì)照組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；其中肺結(jié)核患者的結(jié)果與馮曉朦[13]等報(bào)道一致；另外關(guān)于肺外結(jié)核患者外周血ADA的研究相對(duì)較少，但也有文獻(xiàn)[3]報(bào)道肺外結(jié)核患者ADA水平顯著增高，陽(yáng)性率達(dá)84.9%。鑒于ADA在T淋巴細(xì)胞的分化與成熟促進(jìn)作用，故推測(cè)結(jié)核患者外周血ADA水平增高極有可能為機(jī)體免疫功能失調(diào)導(dǎo)致的代償性增高。因此，檢測(cè)外周血ADA水平對(duì)于結(jié)核病具有一定輔助診斷價(jià)值。

綜上所述，結(jié)核病患者的免疫功能存在一定的紊亂，檢測(cè)外周血T淋巴細(xì)胞亞群尤其是CD3+T、CD4+T表達(dá)率并綜合考慮ADA水平，有助于了解病人的免疫功能狀態(tài)，可以為臨床疑似病例的診斷、病情動(dòng)態(tài)監(jiān)控及預(yù)后提供一定依據(jù)。