血清25-羥基維生素D在慢性乙型肝炎患者中檢測(cè)的臨床意義

王玉起,蔣兆年,劉利鋒,李 莉*

(1.北京市豐臺(tái)區(qū)南苑醫(yī)院,北京100076；2.首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京佑安醫(yī)院,北京100069)

維生素 D (vitamin D,Vit D)是一種脂溶性維生素,在肝臟中產(chǎn)生的25-羥基維生素D3[25-hydroxyvitamin D,25(OH)D3]又被稱為骨化二醇,是血液循環(huán)系統(tǒng)中穩(wěn)定的Vit D,其含量可以用于評(píng)估機(jī)體內(nèi)Vit D的總水平。其代謝活性產(chǎn)物1,25二 羥 維 生 素D[1,25-dihydroxyvitaminD3,1,25(OH)2D3],即骨化三醇與各器官上的維 生 素D受體(vitamin D receptor,VDR)結(jié)合,發(fā)揮生理功能。現(xiàn)認(rèn)為1,25(OH)2D3是類固醇類激素之一,具有廣泛生物學(xué)作用:①鈣磷代謝調(diào)節(jié),預(yù)防骨質(zhì)疏松；②調(diào)節(jié)免疫系統(tǒng),具有抗細(xì)菌、病毒等多種微生物的作用；③抗腫瘤：抑制腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移、浸潤(rùn)等。維生素D 缺乏普遍存在于各類人群中,目前全球有10 億多人存在 Vit D 缺乏的風(fēng)險(xiǎn)[1]。在慢性肝病患者中Vit D 缺乏癥也是很常見(jiàn)的。由于檢測(cè)方法的不同,Vit D在慢性乙型肝炎中的作用及相關(guān)影響因素存在差異,因此,本文探討化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)25(OH)D3在慢性乙型肝炎患者中的分布情況,與肝臟生化指標(biāo)、HBV-DNA載量、乙肝血清學(xué)指標(biāo)等進(jìn)行相關(guān)性分析,進(jìn)一步探討血清25(OH)D3的臨床意義。

1 材料與方法

1.1 研究人群

研究對(duì)象為北京市豐臺(tái)區(qū)南苑醫(yī)院2015年1月至2018年9月就診的82例慢性乙型肝炎(chronic hepatitis B,CHB)患者,其中男51 例,女31例,年齡 19-64 歲,中位年齡 44歲。選取同期門診的健康體檢的人員95例作為健康對(duì)照(healthy controls,HCs),其中男 53例,女42 例,年齡25-60 歲,中位年齡42 歲。收集上述兩組人員的人口資料、肝功、乙肝病毒血清學(xué)及病毒學(xué)資料,并收集血清進(jìn)行后續(xù)試驗(yàn)。慢性乙型肝炎納入標(biāo)準(zhǔn)：血清乙型肝炎表面抗原(hepatitis B surface antigen,HBsAg)陽(yáng)性超過(guò)6個(gè)月,而乙型肝炎e抗原(hepatitis B e-antigen,HBeAg)及乙肝病毒脫氧核糖核酸(HBV-DNA)可陽(yáng)性或不是陽(yáng)性,谷丙轉(zhuǎn)氨酶(Alanine transaminase,ALT)可升高或不升高,腹部B超顯示有慢性肝炎的表現(xiàn)。入組人員年齡大于18歲。排除合并有影響Vit D 代謝的疾病的患者；排除合并丙型肝炎,酒精性肝病等其他因素影響肝臟功能疾病的患者；排除甲狀旁腺激素(parathyroid hormone,PTH)檢測(cè)異常的患者等。

1.2 研究方法

HBV-DNA載量應(yīng)用實(shí)時(shí)定量熒光PCR的方法(羅氏 COBAS Taqman HBV試劑),檢測(cè)HBV 的下限是 20IU/mL。25(OH)D3的檢測(cè)采用雅培25羥基維生素D測(cè)定試劑盒(化學(xué)發(fā)光微粒子免疫檢測(cè)法)進(jìn)行測(cè)定。乙肝五項(xiàng)采用全自動(dòng)發(fā)光免疫分析儀(ARCHITECK-i2000SR)和發(fā)光免疫試劑盒(美國(guó)雅培公司),按照試劑盒操作指南進(jìn)行,檢測(cè)HBsAg,乙型肝炎表面抗體(hepatitis B surface antibody,HBsAb),HBeAg,乙型肝炎e抗體(hepatitis B surface antibody,HBeAb),乙型肝炎核心抗體(hepatitis B core antibody,HBcAb)。常規(guī)檢測(cè)生化指標(biāo)：ALT,谷草轉(zhuǎn)氨酶(Aspartate transferase,AST),總膽紅素(Total Bilirubine,TBiL),血小板計(jì)數(shù)(platelet,PLT)等,應(yīng)用全自動(dòng)生化儀進(jìn)行檢測(cè)。

1.3 結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)

25(OH)D3的循環(huán)水平大于30 ng/mL被認(rèn)為足量(sufficiency),在21-29 ng/mL之間被認(rèn)為不足(insufficiency),低于20 ng/mL,被認(rèn)為缺乏(dificiency)[2]。因此,我們將各組分為三個(gè)等級(jí)：充足,不足和缺乏。我們根據(jù)檢測(cè)的HBV-DNA載量分為：高載量組(>2000 IU/ml)和低載量組(<2000 IU/ml)兩種。

1.4 統(tǒng)計(jì)方法

2 結(jié)果

2.1 乙型肝炎患者與健康對(duì)照基本情況

表1中介紹了健康對(duì)照和慢性乙型肝炎患者的情況。健康對(duì)照組有95例,慢性乙型肝炎的患者有82例,基本情況包括性別、年齡、生化指標(biāo)(ALT、AST、TBiL、PLT等)。結(jié)果顯示兩組人群在性別、年齡方面沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,在生化指標(biāo)中PLT和TBiL方面沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,在ALT和AST方面具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

表1 乙型肝炎患者與健康對(duì)照基本情況表

2.2 慢性乙型肝炎患者與正常健康對(duì)照外周血25(OH)D3的變化情況

從本試驗(yàn)的結(jié)果可以看到(見(jiàn)表2),CHB的患者體內(nèi)的25(OH)D3含量明顯低于HCs,為28.6±8.62 ng/ml,而HCs是39.2±15.36 ng/ml,兩者比較P<0.01,具有顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。具體來(lái)看,慢性乙型病毒性肝炎患者組(n=82例)25(OH)D3足量、不足、缺乏的比例分別為 52.44%、30.49%、17.07%,而HCs(n=95)分別為68.48%、25.00%、6.52%,二者在25(OH)D3三種構(gòu)成比上具有顯著性差異(P<0.05)；并且在25(OH)D3體內(nèi)水平上也具有差異,其中在缺乏和足量?jī)山M中具有顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,而不足組中兩者水平差異不明顯。

表2 慢性乙型肝炎患者與健康對(duì)照外周血25(OH)D3 變化

2.3 慢性乙型肝炎患者不同分組外周血25(OH)D3變化與病毒載量之間的關(guān)系

從表3可以看出,慢性乙型肝炎患者以HbeAg陽(yáng)性及陰性分組的話,HBV-DNA載量具有顯著性差異,而25(OH)D3在體內(nèi)的水平不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。以HBV-DNA載量的高低進(jìn)行分組的話,高載量組的25(OH)D3的水平為25.68±6.93 ng/ml,而低載量組的為32.16±9.22 ng/ml,二者具有明顯的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)；具體而言,高載量組中25(OH)D3缺乏組和不足組的人數(shù)分別為10和20人,明顯高于為低載量組相應(yīng)的人群數(shù)(分別為4和5人),而足量組的人群數(shù)呈相反的狀態(tài),統(tǒng)計(jì)分析的結(jié)果顯示高載量組和低載量組25(OH)D3水平的三種構(gòu)成具有顯著性差異；高載量組的載量與25(OH)D3水平呈反比例關(guān)系,即載量越高,25(OH)D3水平越低,而對(duì)于低載量組、足量組的載量明顯低于缺乏和不足組,缺乏和不足兩組沒(méi)有顯著性差異。按照25(OH)D3不同水平劃分的三組中,與載量的關(guān)系可以看出,二者呈反比例關(guān)系,同高載量組中的載量與25(OH)D3水平的關(guān)系相似。

表3 慢性乙型肝炎患者不同分組外周血25(OH)D3 變化情況

2.4 慢性乙型肝炎患者25(OH)D3水平與生化指標(biāo)及HBV-DNA載量的相關(guān)性

如圖1所示,慢性乙型肝炎患者25(OH)D3水平與TBiL不具相關(guān)性(r=0.145,P>0.05),與AST呈負(fù)相關(guān),具有顯著性差異(r=-0.219,P<0.05),與ALT不相關(guān)(r=-0.111,P>0.05),與PLT呈正相關(guān),具有顯著性差異(r=0.245,P<0.05)。如圖2所示,慢性乙型肝炎患者25(OH)D3水平與HBV-DNA載量具有負(fù)相關(guān)性(r=-0.305,P<0.05)。

3 討論

HBV感染作為世界流行性疾病之一,其治療問(wèn)題日益受到重視。我國(guó)作為乙型肝炎高流行區(qū),2016年流行病學(xué)調(diào)查結(jié)果顯示在60歲以下人群乙型肝炎表面抗原的攜帶率為7.18%[3],隨著核苷(酸)類似物等新型藥物的應(yīng)用,生存質(zhì)量及預(yù)期壽命得到了很大的提高,但藥物的耐藥等問(wèn)題仍然困擾著肝炎患者的治療。非活化的Vit D主要來(lái)自食物和皮膚,在肝臟中經(jīng)羥化轉(zhuǎn)化為25-羥基維生素D3,在腎臟中再次羥化成為具有活性的1,25(OH)2D。25(OH)D3在體內(nèi)穩(wěn)定且半衰期較長(zhǎng),用于檢測(cè)人體內(nèi)Vit D的狀態(tài)及水平。Vit D作為一種體內(nèi)存在的類固醇衍生物,正如前言中所述,具有多種生物學(xué)效應(yīng)[4-9]。因此,Vit D在慢性乙型肝炎疾病過(guò)程中所起的作用需要進(jìn)一步的闡明。

在本文中,我們以健康人群作為對(duì)照組,慢性乙型肝炎患者作為實(shí)驗(yàn)組,應(yīng)用化學(xué)發(fā)光法對(duì)血清25(OH)D3在體內(nèi)含量進(jìn)行檢測(cè)分析。我們發(fā)現(xiàn)：健康對(duì)照組的平均水平為39.2±15.36 ng/ml,慢性乙型肝炎患者的平均水平為28.6±8.62 ng/ml,與健康對(duì)照相比具有顯著性差異；分層分析發(fā)現(xiàn)：在95例健康組中,25(OH)D3缺乏者6例,不足者25例,足量者45例,而在82例慢性乙型肝炎患者中,這些數(shù)字分別為14例,25例和43例,在構(gòu)成比上,二者具有顯著性的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

圖1 慢性乙型肝炎患者25(OH)D3水平與生化指標(biāo)的相關(guān)性

圖2 慢性乙型肝炎患者25(OH)D3水平與HBV-DNA載量的相關(guān)性

我們又對(duì)HBV患者進(jìn)行深入分析,發(fā)現(xiàn)：以HBeAg的陰陽(yáng)性分組,發(fā)現(xiàn)患者的25(OH)D3水平不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；以HBV-DNA 載量(以2 000 IU/ml)的高低標(biāo)準(zhǔn)分組,高載量組25(OH)D3平均水平25.68±6.93 ng/ml,明顯低于低載量組的32.16±9.22 ng/ml,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。對(duì)高載量組和低載量組又做了25(OH)D3含量的構(gòu)成比分析,發(fā)現(xiàn)高載量組以25(OH)D3缺乏和不足為主,而低載量組以25(OH)D3充足為主,兩者的構(gòu)成比具有顯著性的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。另外,我們還做了HBC患者25(OH)D3水平與HBV-DNA載量之間關(guān)系的比較,發(fā)現(xiàn)載量越高,25(OH)D3水平越低,相關(guān)性分析進(jìn)一步證實(shí)了這一點(diǎn),即：HBC患者25(OH)D3水平與HBV-DNA載量具有高度負(fù)相關(guān)關(guān)系。此外,相關(guān)性分析還發(fā)現(xiàn)25(OH)D3水平與AST具有負(fù)相關(guān)關(guān)系,與PLT呈正相關(guān)關(guān)系,而與ALT等指標(biāo)不相關(guān)。盡管我們的檢測(cè)方法與他人的方法不同,但研究結(jié)果與鞏燦燦等人[10-13]的研究結(jié)果相似,均顯示了慢性乙型肝炎患者的25(OH)D3水平較健康者降低,部分研究也與我們一樣進(jìn)一步證明了25(OH)D3水平與HBV-DNA載量之間呈負(fù)相關(guān)關(guān)系,但是不同點(diǎn)是我們的研究對(duì)CHB患者25(OH)D3水平進(jìn)行了細(xì)化,分析了CHB不同分層的情況。另外,我們的研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)CHB患者25(OH)D3水平的高低與HbeAg是否陽(yáng)性沒(méi)有關(guān)系,這一結(jié)果與Farnik H等人[14]的結(jié)果不一致,可能與入組人群的種族和患病狀態(tài)等不一致有關(guān),需要進(jìn)一步擴(kuò)大樣本進(jìn)行研究。

總之,Vit D缺乏不僅在正常健康人群存在,在患有各種疾病的患者中也廣泛存在著。例如,在ICU患者中,Vit D缺乏者的比例為26%-74%[15]。 一個(gè)針對(duì)外科ICU的研究顯示25(OH)D3缺乏(<12 ng/mL)與高死亡率具有相關(guān)性。我們及其他相關(guān)的研究已證實(shí)了Vit D缺乏在肝臟疾病中(慢性乙型及丙型肝炎、肝硬化及肝癌等)廣泛存在。另外,有研究證實(shí)Vit D缺乏可能導(dǎo)致肝損傷的增加及加速肝纖維化的形成[16]。我們的研究結(jié)果也證實(shí)了低載量的CHB患者的Vit D水平較高,因此,給予Vit D缺乏的患者適量補(bǔ)充維生素D,可能有利于CHB患者病毒載量的控制,有利于慢性肝炎患者的治療。