急性蕁麻疹患者食物組過敏原特異性IgE定量檢測(cè)分析

張鳳杰 范夢(mèng)嬌 劉文博 孫艷茹 王振華

1濰坊醫(yī)學(xué)院臨床學(xué)院，山東濰坊，261053；2濰坊市人民醫(yī)院皮膚科，山東濰坊，261041

蕁麻疹是一種過敏性皮膚病，有15%～25%的人在其一生中可發(fā)作1次或1次以上[1]，蕁麻疹的病因復(fù)雜，因此盡早明確過敏原是臨床大夫和病人的共同期望，但是過敏原檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性不高是經(jīng)常遇到的問題。研究采用sIgE定量檢測(cè)和OFC聯(lián)合分析，以期判斷sIgE定量檢測(cè)的準(zhǔn)確性，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 一般資料 416例均為2018 年6月至2019年10月期間于濰坊市人民醫(yī)院就診的急性蕁麻疹(acute urticaria, AU)患者，其中男186例，女230例；年齡1歲～81 歲，平均年齡為(27.0±21.5)歲，中位數(shù)為24(6，46)歲。所有患者均診斷明確，病程少于6周，且排除壓力、寒冷、日光等物理因素和感染、藥物因素引起的蕁麻疹；排除有其他全身性系統(tǒng)性疾病(如甲狀腺疾病、系統(tǒng)性紅斑狼瘡及惡性腫瘤等)者；排除妊娠及哺乳期婦女；所有患者在測(cè)試前2周內(nèi)未使用抗組胺藥、糖皮質(zhì)激素或免疫抑制劑。行OFC的排除標(biāo)準(zhǔn)：①患者1年內(nèi)發(fā)生過嚴(yán)重過敏反應(yīng)；②伴有病情不穩(wěn)定哮喘；③曾有過敏性休克。所有受試者均獲得知情同意。

1.2 檢測(cè)試劑 采用江蘇浩歐博(HOB)公司過敏原sIgE 抗體檢測(cè)試劑盒(ELISA酶聯(lián)免疫捕獲法)定量檢測(cè)sIgE，包括10項(xiàng)過敏原：花生、牛奶、雞蛋、鱈魚、大豆、小麥面粉、蝦、螃蟹、牛肉、羊肉。

1.3 檢測(cè)方法

1.3.1 血清sIgE抗體檢測(cè) 以分離膠促凝管采取患者外周血 5 mL，3 000 r/min離心15 min后留取上層血清備用。實(shí)驗(yàn)步驟: 吸取50 μL血清標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品及質(zhì)控置于相應(yīng)微孔中，室溫孵育60 min(25℃)，用洗板機(jī)清洗3次，每次300 μL清洗液。在患者血清樣本及質(zhì)控中加入100 μL相應(yīng)過敏原-生物素，在標(biāo)準(zhǔn)品中加入100 μL抗IgE抗體-生物素。封板，室溫孵育30 min，用洗板機(jī)清洗3次，每次300 μL清洗液。每孔加入100 μL辣根過氧化物酶-鏈霉親和素結(jié)合液，封板、室溫孵育30 min，用洗板機(jī)清洗3次后，每孔加入100 μL TMB底物液，封板、避光、室溫孵育30 min后加入100 μL終止液，5 min后用酶標(biāo)儀在450 nm波長(zhǎng)處讀數(shù)。

1.3.2 食物經(jīng)口負(fù)荷實(shí)驗(yàn)[2]在部分sIgE檢測(cè)陽性且知情同意的患者中進(jìn)行，患者病情處于穩(wěn)定狀態(tài)，即停藥2周，治療期間避免食用雞蛋、牛奶。要求受試者均為空腹?fàn)顟B(tài)，由醫(yī)生為受試者統(tǒng)一提供水煮雞蛋和純牛奶，攝入劑量見表1。每次攝入時(shí)間不超過5 min，每次攝入完成后觀察30 min[3]。出現(xiàn)臨床癥狀或最后一次攝入完成后，觀察3 h，以明確實(shí)驗(yàn)成敗。研究表明，sIgE陽性閾值在食物種類、患者年齡等因素下發(fā)生改變，具體參考數(shù)值見表2[4]。為避免發(fā)生嚴(yán)重過敏，我們僅對(duì)sIgE濃度為0.35～2.0 IU/mL的患者行OFC[5]，且所有受試者均在醫(yī)院由專業(yè)醫(yī)生指導(dǎo)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)室備急救藥物及設(shè)施(腎上腺素、沙丁胺醇、抗組胺藥、吸氧設(shè)備等)。

表1 OFC雞蛋及牛奶攝入劑量

表2 sIgE陽性閾值在不同食物種類及不同年齡的參考數(shù)值

1.4 結(jié)果判讀 通過專用過敏原掃描分析軟件(HOB提供)進(jìn)行分析，sIgE濃度判定依據(jù)REAST分級(jí)：0級(jí)，檢測(cè)不到(<0.35 IU/mL)；1級(jí)，低(0.35≤讀數(shù)<0.70 IU/mL)；2級(jí)，中(0.70≤讀數(shù)<3.50 IU/mL)；3級(jí)，高(3.50≤讀數(shù)<17.50 IU/mL)；4級(jí)，非常高(17.50≤讀數(shù)<50 IU/mL)；5級(jí)，很高(50≤讀數(shù)<100 IU/mL)，6級(jí)，極高(≥100 IU/mL)。其中大于1級(jí)包括1級(jí)為陽性。OFC結(jié)果：服用后引起風(fēng)團(tuán)的為陽性，無反應(yīng)的為陰性。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 數(shù)據(jù)分析采用Excel及IBM SPSS Statistics 24.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，數(shù)據(jù)采用頻數(shù)/百分比進(jìn)行統(tǒng)計(jì)描述，組間比較采用Pearson卡方檢驗(yàn)，理論頻數(shù)小于1(或超過20%的格子理論頻數(shù)小于5)組間比較采用Fisher確切概率法，檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。P<0.05為存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

2 結(jié)果

2.1 食入性過敏原總體檢測(cè)結(jié)果 在416例AU患者中，食物性過敏原中陽性檢出率最高為雞蛋56例(13.5%)，其中牛肉、羊肉和鱈魚均未檢測(cè)出有過敏者。其中對(duì)1種過敏原呈陽性反應(yīng)者39例(9.3%)，同時(shí)對(duì)2種及以上過敏原呈陽性反應(yīng)者76例(18.3%)。見表3。

表3 416例患者食入性sIgE檢測(cè)結(jié)果 n(%)

2.2 食入性過敏原的性別分布 在416例患者中，男性患者186例，sIgE陽性者79例(19.0%)，女性230例，陽性者83例(20.0%)，男女間各食入性過敏原分布差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。見表4。

表4 416例患者食入性sIgE檢測(cè)性別比較分析 n(%)

注：*Pearson卡方檢驗(yàn)

2.3 食入性過敏原的年齡分布 將416例急性蕁麻疹患者按照年齡分組進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，1～6歲人群sIgE陽性的檢出率最高26.4%(110/416)；雞蛋和牛奶在不同年齡段人群的陽性檢出率存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)。見表5。

表5 416例患者食入性sIgE檢測(cè)各年齡組比較分析 n(%)

注：*Pearson卡方檢驗(yàn)，* *Fisher確切概率法

2.4 OFC實(shí)驗(yàn)結(jié)果 雞蛋sIgE陽性患者56例，濃度在0.35～0.70 IU/mL之間且同意行OFC的共36例，僅1例出現(xiàn)風(fēng)團(tuán)；濃度在0.70～2.0 IU/mL之間且同意行OFC的共11例，6例出現(xiàn)風(fēng)團(tuán)。牛奶sIgE陽性患者29例，濃度在0.35～0.70 IU/mL之間且同意行OFC的共16例，無人出現(xiàn)風(fēng)團(tuán)；濃度在0.70～2.0 IU/mL之間且同意行OFC的共8例，3例出現(xiàn)風(fēng)團(tuán)。

3 討論

AU的發(fā)病機(jī)制包括IgE介導(dǎo)的和非IgE介導(dǎo)的機(jī)制，主要是IgE介導(dǎo)的肥大細(xì)胞活化和嗜堿粒細(xì)胞的激活[6]。有研究基于未成年AU人群得出，AU最常見的病因是感染(48.4%)，其次是食物(23.5%)，特發(fā)性病因(13.2%)，藥物(11.5%)，吸入劑(1.7%)，蚊蟲叮咬(1.5%)和接觸材料(0.2%)[7]。與本試驗(yàn)結(jié)果27.6%食物過敏原陽性基本一致。詳細(xì)的病史詢問和體格檢查有時(shí)難以確定其病因，此時(shí)過敏原檢測(cè)就顯得尤為重要。

血清sIgE檢測(cè)是國(guó)內(nèi)外公認(rèn)的過敏原檢測(cè)手段之一[8]，我們采用的是新一代全定量檢測(cè)試劑，采用酶聯(lián)免疫捕獲法對(duì)樣本進(jìn)行全自動(dòng)分析，此法可去除IgE抗體干擾并完全捕獲血清中的sIgE，靈敏度達(dá)到0.008 IU/mL,并且試劑盒與其他免疫球蛋白的交叉反應(yīng)率均小于0.04%,準(zhǔn)確性好、精密度高。開放式OFC是由試驗(yàn)者提供天然食品，食品不進(jìn)行遮蔽，也不會(huì)提供安慰劑的一種食物激發(fā)試驗(yàn)[9]，適用于臨床工作，被認(rèn)為是在已經(jīng)確定需要OFC的情況下，評(píng)估食物過敏的首選方法。

目前國(guó)內(nèi)尚無基于AU患者此類研究數(shù)據(jù)，本研究結(jié)果顯示，共71例患者同意行OFC，10例(14.1%)為陽性，故85.9%的sIgE檢測(cè)陽性患者無需行OFC。Fleischer等[10]對(duì)食物過敏的兒童人群(并非全是AU)進(jìn)行OFC驗(yàn)證得出11%結(jié)果為陽性，即89%的sIgE檢測(cè)陽性患者行OFC結(jié)果為陰性。本研究結(jié)果與此結(jié)果基本一致。分析sIgE檢測(cè)結(jié)果與臨床癥狀不符可能與sIgE檢測(cè)存在假陽性有關(guān)，其原因主要有四個(gè)方面：(1)食物過敏原蛋白組分的復(fù)雜性，一種食物往往含有多種可易導(dǎo)致過敏的蛋白質(zhì)[11]，而目前國(guó)內(nèi)還沒有將食物蛋白組分過敏原檢測(cè)應(yīng)用于臨床，有可能導(dǎo)致IgE檢測(cè)陽性的蛋白組分在食物的加工烹調(diào)過程中失去了它的抗原性，或者檢測(cè)到的不是引起過敏反應(yīng)的主要抗原[12]；(2)IgE抗體耗竭，本來血清中IgE抗體濃度就很低，而急性發(fā)作后短期中和了大量抗原導(dǎo)致血清中抗體含量微乎其微[13]，不足以激發(fā)變態(tài)反應(yīng)；(3)存在交叉反應(yīng)性糖類抗原決定簇，其僅能產(chǎn)生與過敏原結(jié)構(gòu)類似的sIgE抗體，不能使肥大細(xì)胞活化，故僅能測(cè)出sIgE陽性而無臨床癥狀[11]；(4)AU發(fā)病機(jī)制的復(fù)雜性，雖然檢測(cè)到了特異性IgE抗體，只能表示機(jī)體處于一種敏感狀態(tài)，不一定發(fā)病，或者是非免疫機(jī)制的發(fā)病[10]。

本研究有一些局限性。首先，并不是對(duì)所有可疑食物行OFC驗(yàn)證。其次，本研究采用開放式OFC，而不是診斷食物過敏“金標(biāo)準(zhǔn)”的雙盲安慰劑食物激發(fā)試驗(yàn)。目前國(guó)內(nèi)單一過敏原檢測(cè)手段并不完美，之前研究發(fā)現(xiàn)，皮膚點(diǎn)刺試驗(yàn)檢測(cè)食物過敏的敏感性高，特異性低，而sIgE敏感性低，特異性高[14]，今后可開展二者聯(lián)合診斷AU患者食物過敏的研究。且今后的研究重點(diǎn)在行大樣本量臨床實(shí)驗(yàn)以期得出適合我國(guó)人群的食物sIgE陽性預(yù)測(cè)值上。