香砂六君子湯對慢性萎縮性胃炎大鼠胃組織PI3K信號通路相關因子表達的影響

段永強　鞏子漢　王麗園　成映霞　王強　楊曉軼　李蘭珍　段云燕

摘要：目的??觀察香砂六君子湯對慢性萎縮性胃炎（CAG）大鼠胃組織血管內皮生長因子（VEGF）、磷酸酶張力蛋白同源物基因（PTEN）、磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）、蛋白激酶B（AKT）的影響，探討該復方防治CAG的作用機制。方法??將120只Wistar大鼠分為空白組和模型組，采用綜合法制作CAG動物模型，將成模大鼠分為模型組、維酶素組和香砂六君子湯高、中、低劑量組，空白組和模型組大鼠給予10?mL/（kg·d）蒸餾水灌胃，香砂六君子湯高、中、低劑量組分別給予24、12、6?g/（kg·d）香砂六君子湯灌胃，維酶素組給予0.30?g/（kg·d）維酶素灌胃，連續120?d。ELISA檢測大鼠胃組織VEGF含量，RT-PCR和Western?blot分別檢測大鼠胃組織PTEN、PI3K、AKT基因和蛋白的表達。結果??與空白組比較，模型組大鼠一般狀況較差，胃黏膜變薄，上皮細胞及腺體排列紊亂、稀疏，腺體數目明顯減少，黏膜肌層增厚向固有層延伸，可見大量炎性細胞浸潤，胃組織PTEN基因及蛋白表達顯著降低（P<0.01），VEGF含量和AKT、PI3K基因及蛋白表達顯著升高（P<0.01）;與模型組比較，香砂六君子湯高劑量組大鼠胃組織PTEN基因表達顯著升高（P<0.01），VEGF含量和AKT、PI3K基因及蛋白表達顯著降低（P<0.01）。結論??香砂六君子湯通過改善模型大鼠生存狀況及胃黏膜病理狀態，上調胃組織PTEN表達，下調VEGF、AKT、PI3K表達，發揮治療CAG的作用。

關鍵詞：慢性萎縮性胃炎;血管內皮生長因子;磷酸酶張力蛋白同源物基因;磷脂酰肌醇3-激酶;蛋白激酶B;香砂六君子湯;大鼠

中圖分類號：R285.5????文獻標識碼：A????文章編號：1005-5304（2020）03-0033-06

DOI：10.3969/j.issn.1005-5304.201907062

Effects?of?Xiangsha?Liujunzi?Decoction?on?PI3K?Signaling?Pathway?Correlation?Factor?Expression?in?Gastric?Tissue?of?Rats?with?Chronic?Atrophic?Gastritis

DUAN?Yongqiang1，2，3，4，?GONG?Zihan1，3，?WANG?Liyuan1，5，?CHENG?Yingxia1，?WANG?Qiang1，?YANG?Xiaoyi1，?LI?Lanzhen1，?DUAN?Yunyan1

1.?Gansu?University?of?Chinese?Medicine，?Lanzhou?730000，?China;?2.?Gansu?Key?Laboratory?of?Pharmacology?and?Toxicology?of?Traditional?Chinese?Medicine，?Lanzhou?730000，?China;?3.?Key?Laboratory?of?Traditional?Chinese?Herbs?and?Prescription?Innovation?and?Transformation?of?Gansu?Province，?Lanzhou?730000，?China;?4.?Key?Laboratory?of?Dunhuang?Medicine?and?Transformation?of?Ministry?of?Education，?Lanzhou?730000，?China;?5.?Cangxi?County?Traditional?Chinese?Medicine?Hospital，?Cangxi?628400，?China

Abstract：?Objective?To?observe?the?effects?of?Xiangsha?Liujunzi?Decoction?on?vascular?endothelial?growth?factor?（VEGF），?phosphatase?tensin?protein?homologue?（PTEN），?phosphatidylinositol?3-kinase?（PI3K）?and?protein?kinase?B?（AKT）?in?gastric?tissue?of?rats?with?chronic?atrophic?gastritis?（CAG）;?To?discuss?the?mechanism?of?this

compound?for?prevention?and?treatment?of?CAG.?Methods?Totally?120?SPF?Wistar?rats?were?randomly?divided?into?blank?group?and?model?group.?CAG?animal?models?were?reproduced?by?comprehensive?method.?The?model?rats?were?randomly?divided?into?model?group，?vitacoenzyme?tablets?group?and?Xiangsha?Liujunzi?Decoction?high-，?medium-?and?low-dosage?groups.?The?blank?group?and?model?group?were?given?10?mL/（kg·d）?distilled?water?for?gavage，?and?Xiangsha?Liujunzi?Decoction?high-，?medium-?and?low-dosage?groups?were?given?24?g/（kg?d），?12?g/（kg?d），?and?6?g/（kg·d）?Xiangsha?Liujunzi?Decoction，?respectively，?for?gavage.?Vitacoenzyme?tablets?group?was?given?0.30?g?/?（kg·d）?vitacoenzyme?tablets，?for?consecutive?120?d.?The?content?of?VEGF?in?gastric?tissue?was?detected?by?ELISA，?and?the?gene?and?protein?expressions?of?PI3K，?PTEN?and?AKT?were?detected?by?RT-PCR?and?Western?blot，?respectively.?Results?Compared?with?the?blank?group，?the?general?survival?condition?of?the?model?group?was?worse;?the?gastric?mucosa?of?the?model?group?was?thinner，?the?arrangement?of?epithelial?cells?and?glands?was?disordered?and?sparse，?the?number?of?glands?was?significantly?reduced，?the?muscular?layer?of?the?mucosa?was?thicker?and?extended?to?the?lamina?propria，?a?large?number?of?inflammatory?infiltration?could?be?seen，?PTEN?gene?and?protein?expression?in?gastric?tissue?were?significantly?reduced?（P<0.01），?and?the?content?of?VEGF?and?the?gene?and?protein?expressions?of?AKT?and?PI3K?in?gastric?tissues?significantly?increased?（P<0.01）.?Compared?with?model?group，?the?gene?expression?PTEN?in?gastric?tissue?of?rats?in?Xiangsha?Liujunzi?Decoction?high-dosage?group?was?significantly?higher?（P<0.01），?and?the?content?of?VEGF?and?gene?and?protein?expressions?of?AKT?and?PI3K?in?gastric?tissues?significantly?decreased?（P<0.01）.?Conclusion?Xiangsha?Liujunzi?Decoction?can?exert?the?therapeutic?effect?on?CAG?by?improving?the?general?survival?of?the?model?rats?and?the?pathological?state?of?gastric?mucosa，?up-regulating?the?expression?of?PTEN?in?gastric?tissue，?down-regulating?the?expression?of?VEGF，?AKT?and?PI3K.

Keywords：?chronic?atrophic?gastritis;?vascular?endothelial?growth?factor;?PTEN;?PI3K;?AKT;?Xiangsha?Liujunzi?Decoction;?rats

慢性萎縮性胃炎（chronic?atrophic?gastritis，CAG）多因素體脾胃虛弱、飲食不節、情志失調、感受外邪導致中焦氣機不利、升降失司而引發，常表現出胃脘痞滿、疼痛、納呆、噯氣、大便不調、消瘦等癥狀。諸多醫家經長期臨床觀察總結認為，CAG病位在脾胃，其病機關鍵是脾胃虛弱。脾主升清，胃主通降，脾胃為一身氣機升降之樞紐，若脾胃受損，脾失健運，胃失和降，則中焦氣機紊亂，氣血生化乏源，臟腑失養而致胃痞[1-3]。正如《素問病機氣宜保命集》所云：“脾不能行氣于肺胃，結而不散則為痞。”臨床應用香砂六君子湯治療CAG療效顯著[4]，且本課題組前期研究表明，香砂六君子湯可調控CAG大鼠NF-κB通路進而抑制炎癥因子白細胞介素（IL）-12、腫瘤壞死因子-α、IL-1β和IL-8的高表達，改善CAG大鼠胃排空功能、促進胃蛋白酶活性、下調缺氧環境缺氧誘導因子（HIF）-1α基因和蛋白表達，調控IL-6、IL-10及熱休克蛋白70基因及蛋白表達，對CAG大鼠胃竇黏模具有保護作用[5-7]。有研究表明，血管內皮生長因子（VEGF）參與腫瘤的進展、浸潤和轉移，其高表達與腫瘤進展有關[8]。PI3K/AKT信號通路是細胞內重要的信號轉導通路，參與調節細胞的凋亡、增生、遷移、分化和代謝[9]。PI3K/AKT信號通路與胃上皮細胞的增殖和凋亡關系密切，胃上皮細胞增殖過度而凋亡不足時，則可能導致胃癌的發生[10]。本研究旨在通過動物實驗觀察以健脾理氣和胃法為指導的香砂六君子湯對CAG大鼠生存狀況、胃組織VEGF、磷酸酶張力蛋白同源物基因（PTEN）、磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）、蛋白激酶B（AKT）表達的影響，探討該復方防治CAG的作用機制。

1??材料與方法

1.1??動物

SPF級健康Wistar大鼠120只，雌雄各半，2月齡，體質量（200±20）g，甘肅中醫藥大學醫學實驗中心提供，動物許可證號SCXK（甘）2015-0002。飼養于甘肅中醫藥大學SPF級實驗室，相對濕度45%～55%，室溫（23±2）℃，自由攝食飲水。

1.2??藥物

香砂六君子湯（生曬參、茯苓、麩炒白術、姜半夏、木香、砂仁、陳皮、甘草、生姜），飲片均購自蘭州復興厚藥材有限責任公司。生曬參、麩炒白術、茯苓、陳皮、姜半夏、砂仁、木香、生姜、甘草按6∶12∶12∶5∶6∶5∶4∶12∶4比例配制[11]。加10倍蒸餾水浸泡2?h后常規煎煮1?h，濾出藥渣，保存藥液，藥渣再加8倍蒸餾水煎煮45?min，混合2次藥液，常壓下濃縮至1?mL藥液含原藥材2?g。置于4?℃冰箱保存，使用時稀釋至所需濃度。維酶素片，新鄉恒久遠藥業有限公司，批號20160518;MNNG，梯希愛化成工業發展有限公司，批號75F7I-TF;雷尼替丁，廣東華南藥業集團有限公司，批號151101。

1.3??主要試劑與儀器

VEGF酶聯免疫試劑盒，上海將來實業股份有限公司，批號201811;總RNA抽提試劑Trizol，美國Life?Technologies公司，批號152104;PCR反轉錄試劑盒，美國Promega公司，批號00435083;實時熒光定量PCR擴增試劑盒，美國Promega公司，批號0000227638;彩虹Marker，北京索萊寶生物科技有限公司，批號00580081;GAPDH，美國Gene?Tex公司，批號130201;Ant-PTEN?Antibody，美國Abcam公司，批號GR62840-23;Ant-pan-AKT?Antibody，美國Abcam公司，批號GR3192605-11;Ant-PI3K?antibody，美國Abcam公司，批號GR3192684-9;IgG（H+L），美國Immunoway公司，批號B0201。VELOCITY?18R高速臺式低溫離心機（澳大利亞Dynamically公司），XYJ80-2離心機（廣東塘廈駿越機電設備廠），BIOMATE?3S核酸蛋白測定儀（美國BIO-RAD），S1000TM反轉錄儀（美國Bio-Rad），CFX96TM?Optics?Module?PCR儀（美國Bio-Rad），HH-4數顯恒溫水浴箱（江蘇省金壇市友聯儀器研究所），JY-SPAT電泳槽（美國Bio-Rad），Chemi?DOC?XRS+凝膠成像分析系統（美國Bio-Rad），電子計時器（Gene?Tex）。

1.4??造模

大鼠給予常規飼料及雙蒸水適應性飼養7?d，按隨機數字表法將120只大鼠分為空白組（20只）和造模組（100只）。每日8：00空白組大鼠給予1?mL/100?g生理鹽水灌胃，每日9：00給予定量維持飼料，給予雙蒸水供大鼠每日自由飲用。造模組大鼠參照文獻[12]方法，采用綜合法造模。①使用DMSO作為溶劑，將MNNG固體溶解，配制成20%MNNG溶液，置于4?℃冰箱避光保存;②將配制好MNNG溶液與水按1∶2000比例配制，給予大鼠自由飲用，大鼠飲水瓶采用錫箔紙包裹避光;③將雷尼替丁溶解于85%NaCl溶液當中，按0.03?g/kg大鼠體質量灌胃;④采用饑飽失常喂養法：2?d足量喂養，1?d禁食不禁水。連續造模16周。待大鼠CAG造模8周后，2周為1個周期，隨機抽取大鼠，取大鼠胃組織做病理檢查，評價CAG模型復建是否成功。

1.5??分組及給藥

造模16周后病理切片顯示CAG大鼠模型成功，按隨機數字表法將成模大鼠分為模型組、維酶素組和香砂六君子湯高、中、低劑量組，每組16只。模型組和空白組每日按10?mL/kg蒸餾水灌胃，維酶素組每日按0.30?g/kg維酶素灌胃（相當于60?kg成人每日劑量的6倍），香砂六君子湯高、中、低劑量組每日按24、12、6?g原藥材/kg灌胃（相當于60?kg成人每日劑量的12、6、3倍）。等效劑量按人與動物體型系數折算，給藥體積2?mL/100?g，每日1次，連續120?d。

1.6??標本采集與檢測

大鼠于末次灌胃后禁食不禁水24?h，10%水合氯醛麻醉脫臼處死大鼠，解剖，取出胃組織，沿胃大彎剪開，生理鹽水漂洗去除胃內容物。部分組織存放于4%多聚甲醛以備后續HE染色行病理組織學評估;另一部分置凍存管中，立即放入-80?℃超低溫冷凍冰箱備用，以備后續采用RT-PCR和Western?blot分別檢測大鼠胃組織PTEN、PI3K、AKT基因及蛋白表達。

1.7??ELISA檢測大鼠胃組織血管內皮生長因子含量

將試劑盒和待測血清平衡至室溫，稀釋準備對照品和洗滌液，按要求加樣、溫育、洗滌、溫育、洗滌、顯色、終止，酶標儀測定450?nm波長處各孔吸光度，并繪制標準曲線，計算樣品濃度。嚴格按ELISA試劑盒說明書進行操作。

1.8??RT-PCR檢測大鼠胃組織磷酸酶張力蛋白同源物基因、磷脂酰肌醇3-激酶、蛋白激酶B基因表達

采用Trizol法提取總RNA，測定其OD260/OD280均在1.8～2.0，反轉錄為cDNA，PCR擴增PTEN、PI3K、AKT基因片段。引物設計：從NCBI基因庫中查詢目標基因ID及序列，引物由TAKARA公司寶生物工程大連有限公司設計和合成。β-Actin引物序列：上游5'-GGAGATTACTGCCCTGGCTCCTA-3'，下游5'-GACTCATCGTACTCCTGCTTGCTG-3'，擴增片段長度150?bp;PTEN引物序列：上游5'-CCAATGGCTA?AGTGAAGACGACAA-3'，下游5'-CATAGCGCCT?CTGACTGGGAATA-3'，擴增片段長度197?bp;PI3K引物序列：上游5'-CTGGAGAGCTTGGAGG?ACGA-3'，下游5'-TCGCAAGAACCAGAATAAGAAGTG-3'，擴增片段長度159?bp;AKT引物序列：上游5'-ATGGACTTCCGGTCAGGTTCA-3'，下游5'-GCCC?TTGCCCAGTAGCTTCA-3'，擴增片段長度126?bp。本實驗選擇β-actin作為內參基因，同一種基因在模板進行6次平行實驗，每次平行試驗設置3個復孔，記錄目的基因和β-actin的Ct值。運用ΔΔCt法分析數據，計算相對表達量，檢測β-Actin及目的基因Ct值。ΔCt1=測試組目的基因Ct值-測試組β-actin?Ct值，ΔCt2=對照組目的基因Ct值-對照組β-actin?Ct值，ΔΔCt=ΔCt1-ΔCt2，相對表達量為2-ΔΔCt。

1.9??Western?blot檢測大鼠胃組織磷酸酶張力蛋白同源物基因、磷脂酰肌醇3-激酶、蛋白激酶B蛋白表達

使用RIPA法提取胃組織蛋白，BCA法進行蛋白定量，SDS-PAGE電泳，轉膜，封閉。GAPDH?Antibody溶液配制（1∶1000）：GAPDH?Antibody?10?μL，封閉液10?mL;AKT?Antibody溶液配制（1∶500）：AKT?Antibody?20?μL，封閉液10?mL;PTEN?Antibody溶液配制（1∶1000）：PTEN?Antibody?10?μL，封閉液10?mL;PI3K?Antibody溶液配制（1∶1000）：PI3K?Antibody?10?μL，封閉液10?mL。37?℃搖床4?h，1×TBST洗滌3次×10?min，加入HRP標記羊抗兔二抗。HRP*Goat?AntiRabbit?IgG（H+L）溶液配制（1∶1000）：HRP*Goat?AntiRabbit?IgG（H+L）10?μL，封閉液10?mL;37?℃搖床2?h，1×TBST洗滌3次×10?min，采用化學發光底物化學發光，暗室曝光顯影后用Quantityone圖像分析軟件進行掃描分析。

1.10??統計學方法

采用SPSS22.0統計軟件進行分析。實驗數據以x（—）±s表示，組間均數比較用方差分析，方差齊用S-L-D法比較，方差不齊用Tamhane's?T2法比較。P<0.05表示差異有統計學意義。

2??結果

2.1??一般狀況

實驗過程中空白組大鼠精神狀態好，反應靈敏，被毛順滑有光澤，大便以棕褐色質軟顆粒為主;造模第6周后，造模組大鼠開始出現精神萎靡，攝食量減少，倦怠扎堆，反應遲鈍，被毛雜亂無光澤易脫落等，隨著造模的延續，大多數大鼠表現為弓背彎曲、瞇眼蜷縮、消瘦昏睡、厭食怠動、反應遲鈍、被毛稀疏枯槁無光澤、大便量少質干或便溏，總體生存狀態較差。藥物治療階段，空白組大鼠一般狀況良好，體型逐漸增大;模型組大鼠精神萎靡、厭食倦怠、反應遲鈍、消瘦嗜睡、皮毛枯槁無光澤;香砂六君子湯高劑量組上述表現逐漸減輕，治療10周后香砂六君子湯高劑量組大鼠精神狀態基本恢復正常，活動及攝食量正常，反應較為靈敏，被毛疏散但有光澤;香砂六君子湯中劑量組及維酶素組大鼠上述表現均有不同程度改善，但恢復相對緩慢;而香砂六君子湯低劑量組大鼠無明顯好轉，僅少量較模型組大鼠癥狀有所緩解。

2.2??胃組織病理形態學觀察結果

空白組大鼠胃黏膜各層結構完整，上皮細胞及腺體排列規整，大小及形狀較一致，黏膜固有層炎性細胞少見;模型組大鼠胃黏膜變薄，上皮細胞及腺體排列紊亂、稀疏，腺體數目明顯減少，黏膜肌層增厚向固有層延伸，可見大量炎性細胞浸潤;維酶素組大鼠胃黏膜較薄，腺體排列欠整齊，腺體數目減少，可見較多炎性細胞浸潤，較模型組有所好轉;香砂六君子湯高劑量組大鼠胃黏膜各層結構基本正常，腺體排列比較規整，間質有少許炎性細胞;香砂六君子湯中劑量組大鼠胃黏膜腺體排列比較規整，各層結構較為正常，可見少量腺體變形萎縮及炎性細胞;香砂六君子湯低劑量組大鼠胃黏膜較薄，腺體數目減少，排列紊亂，可見大量炎性細胞浸潤。結果見圖1。

圖1??各組大鼠胃組織形態（HE染色）

2.3??香砂六君子湯對模型大鼠胃組織血管內皮生長因子含量的影響

與空白組比較，模型組大鼠胃組織VEGF含量顯著升高，差異有統計學意義（P<0.01）;與模型組比較，各給藥組大鼠胃組織VEGF含量均有降低趨勢，其中，香砂六君子湯高、中劑量組大鼠胃組織VEGF含量顯著降低，差異有統計學意義（P<0.01）。結果見表1。

表1??各組大鼠胃組織VEGF含量比較（x（—）±s）

注：與空白組比較，**P<0.01;與模型組比較，△△P<0.01

2.4??香砂六君子湯對模型大鼠胃組織磷酸酶張力蛋白同源物基因、磷脂酰肌醇3-激酶、蛋白激酶B?mRNA及蛋白表達的影響

與空白組比較，模型組大鼠胃組織PTEN?mRNA及蛋白相對表達顯著降低，PI3K、AKT?mRNA相對表達水平顯著升高，差異有統計學意義（P<0.01）;與模型組比較，各給藥組大鼠胃組織PTEN?mRNA及蛋白表達均有升高趨勢，PI3K、AKT?mRNA及蛋白表達有降低趨勢，其中香砂六君子湯高、中劑量組大鼠胃組織PTEN?mRNA及蛋白表達均顯著升高，高劑量組大鼠胃組織PI3K、AKT?mRNA及蛋白表達均顯著降低，差異有統計學意（P<0.01）。結果見表2、圖2。

表2??各組大鼠胃組織PTEN、PI3K、AKT基因及蛋白表達比較（x（—）±s）

注：與空白組比較，**P<0.01;與模型組比較，△△P<0.01

注：K.空白組;M.模型組;W.維酶素組;G.香砂六君子湯高劑量組;Z.香砂六君子湯中劑量組;D.香砂六君子湯低劑量組

圖2??各組大鼠胃組織PTEN、PI3K、AKT蛋白免疫印跡圖

3??討論

香砂六君子湯作為治療脾胃虛弱，濕濁內生，氣機不通經典方藥，遵循“健脾理氣和胃”治療原則。香砂六君子湯出自《古今名醫方論》[13]，由六君子湯加木香、砂仁而成，用于治療脾胃氣虛、痰阻氣滯證。方中以大補元氣、補脾益氣之人參為君;臣以白術健脾燥濕、助脾運化;佐以茯苓滲濕健脾，配白術健運脾氣，使人參、白術補而不滯，濕無所聚，痰無所生;半夏燥濕化痰、和胃止嘔，配以陳皮理氣健脾，二藥合用，共奏理氣健脾、燥濕化痰、消痞散結之效;砂仁行氣調中，和胃醒脾;木香行氣止痛、醒脾和胃，能升降諸氣;甘草和中益氣，擅長發揮調和諸藥藥性的作用。諸藥合用，共奏健脾和胃、理氣暢中之效。

VEGF可促進血管生成，在腫瘤生長和轉移中發揮重要作用。有研究表明，VEGF在胃癌前病變（PLGC）階段即存在較高表達，在胃癌發生早期階段可能起一定作用[14]。藺煥萍[15]通過免疫組化檢測小鼠PLGC組織中VEGF、信號轉導及轉錄激活因子（STAT3）和HIF-1α的表達，發現中藥參佛胃康可下調HIF-1α、STAT3和VEGF的表達，逆轉PLGC病變，其逆轉PLGC的機制與降低VEGF-STAT3-HIF-1α信號轉導蛋白的表達，抑制異型增生，促進修復有關。有研究表明，黃芪多糖可下調PLGC模型大鼠p53、p65、VEGF蛋白表達，降低細胞凋亡指數，從而控制PLGC進展[16]。

PI3K/AKT信號通路是細胞內重要的信號轉導通路，參與調節細胞的凋亡、增生、遷移、分化和代謝。作為PI3K/AKT信號通路重要的負調控因子，PTEN通過使磷脂酰肌醇（3，4，5）-三磷酸（PIP3）脫磷酸生成PIP2以保持PIP3的低水平，從而抑制PI3K/AKT通路的活化以達到抑制腫瘤細胞增殖、促進腫瘤細胞凋亡的目的[17-18]。Yang等[19]研究發現，正常胃黏膜及腸化生組織中PTEN蛋白表達明顯高于不典型增生及胃癌，且呈遞減趨勢，表明在正常胃黏膜發展到胃癌過程中，PTEN蛋白表達下降，其抑制腫瘤細胞增殖分化能力減弱，促進腫瘤發展，說明PTEN在胃癌發生發展過程中起抑制作用。

PI3K是一種胞內磷脂酰肌醇激酶，由調節亞基p85和催化亞基p110所組成，且PI3K本身具有絲氨酸/蘇氨酸（Ser/Thr）激酶的活性。一旦PI3K被激活，p110可以使PIP2磷酸化轉化為PIP3，進而與AKT的N端PH結構域結合，促使AKT活化。而活化的AKT則能通過磷酸化作用于下游促凋亡蛋白BAD而發揮作用。韋維等[20]采用MNNG復制CAG大鼠模型，并運用安胃湯進行干預，結果顯示，與空白組比較，模型組大鼠胃黏膜PI3K、AKT基因及蛋白表達升高，PTEN基因及蛋白表達下降;經中藥治療后大鼠PI3K、AKT基因及蛋白表達下降，PTEN基因及蛋白表達升高，說明PI3K/AKT信號傳導通路參與CAG大鼠胃黏膜病變，且通過下調胃黏膜細胞PI3K、AKT基因及蛋白的表達，上調胃黏膜細胞PTEN基因及蛋白的表達，達到治療CAG的作用。王彥剛等[21]采用隨機單盲對照臨床試驗設計，將80例CAG患者隨機分為2組，治療組予化濁解毒方治療，對照組予阿拉坦五味丸治療，結果表明化濁解毒方能顯著降低血清及胃黏膜組織AKT、受體酪氨酸激酶（c-Met）的表達，說明調控AKT、c-Met的表達水平能對慢性胃炎產生作用。江明禮等[22]構建幽門螺桿菌（Hp）感染慢性胃炎動物模型，給予苗藥頭花蓼治療后，采用Western?blot和RT-PCR技術檢測大鼠胃黏膜組織，結果顯示苗藥頭花蓼可能通過上調PTEN表達、抑制AKT表達，從而改善Hp引起的胃黏膜炎癥。

本研究結果顯示：與空白組比較，模型組大鼠胃組織PTEN基因及蛋白表達顯著降低，提示CAG發病與大鼠胃組織PTEN基因及蛋白表達降低有關;與模型組比較，香砂六君子湯高劑量組大鼠胃組織PTEN基因及蛋白表達顯著升高，提示香砂六君子湯通過上調CAG大鼠胃組織PTEN基因及蛋白表達而治療CAG。與空白組比較，模型組大鼠胃組織VEGF含量及AKT、PI3K基因及蛋白表達顯著升高，提示CAG發病與胃組織VEGF含量及AKT、PI3K基因及蛋白表達升高有關;與模型組比較，香砂六君子湯高劑量組大鼠胃組織VEGF含量及AKT、PI3K基因及蛋白表達顯著降低，提示香砂六君子通過下調CAG大鼠胃組織VEGF含量及AKT、PI3K基因和蛋白表達，調節增殖和凋亡平衡機制，從而改善CAG病變。

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（收稿日期：2019-07-05）

（修回日期：2019-07-20;編輯：華強）