蒙醫(yī)溫針對(duì)疲勞模型大鼠海馬及下丘腦細(xì)胞因子含量的影響

斯 琴 水 玲 陳英松

內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010110

慢性疲勞綜合征(chronic fatigue syndrome CFS)是現(xiàn)代新近認(rèn)識(shí)的一種疾病，是亞健康狀態(tài)的最典型的表現(xiàn)。以長(zhǎng)期嚴(yán)重的疲勞感為突出的臨床表現(xiàn)，并伴有失眠、記憶力下降、骨骼肌疼痛及多種精神神經(jīng)癥狀，但無(wú)其他器質(zhì)性及精神性疾病為特征的一組復(fù)雜的功能紊亂癥候群[1-2]。隨著經(jīng)濟(jì)的飛速發(fā)展，快速的生活節(jié)奏及日益激烈的生存競(jìng)爭(zhēng)可導(dǎo)致人們壓力越來(lái)越大、生活不規(guī)律、情緒不穩(wěn)定等，這使慢性疲勞綜合征的發(fā)病率逐年增加，以至于此病被認(rèn)為是二十一世紀(jì)“健康的隱形殺手”。慢性疲勞綜合征的發(fā)病機(jī)制尚未完全闡明，目前許多專家認(rèn)為慢性疲勞綜合征可能與病毒感染、免疫系統(tǒng)問(wèn)題、神經(jīng)系統(tǒng)問(wèn)題、精神疾病等多重因素有關(guān)聯(lián)。西醫(yī)對(duì)慢性疲勞綜合征的病因及發(fā)病機(jī)制尚未確切定論，對(duì)慢性疲勞綜合征的治療僅限于對(duì)癥及支持治療[3]。

慢性疲勞綜合征在蒙醫(yī)學(xué)中無(wú)特定病名。根據(jù)其主要臨床癥狀和特征歸屬于“巴達(dá)干、赫依性”疾病范疇。認(rèn)為人體三根(赫依、希拉、巴達(dá)干)中的巴達(dá)干偏盛與赫依相搏，致使三根失調(diào)而引起持續(xù)或反復(fù)發(fā)作的疲勞為核心癥狀的一系列癥候[4]。蒙醫(yī)溫針療法是針刺與溫灸相結(jié)合的一種外治療法。它具有針刺與溫灸的雙重作用，并有溫通經(jīng)脈、調(diào)和氣血、調(diào)理體素、增強(qiáng)抵抗力以防治疾病的作用。

多年來(lái)本課題研究小組從蒙醫(yī)學(xué)角度積極的探究，得出了蒙醫(yī)溫針療法可以較好的改善CFS患者的臨床癥狀[5]。鑒此，本實(shí)驗(yàn)通過(guò)采用強(qiáng)制性運(yùn)動(dòng)建立反復(fù)力竭運(yùn)動(dòng)模型，并觀察運(yùn)動(dòng)疲勞后海馬、下丘腦細(xì)胞因子的表達(dá)變化，揭示海馬、下丘腦的免疫炎癥反應(yīng)及進(jìn)一步證實(shí)蒙醫(yī)溫針的治療機(jī)制的可能性。

1.材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)器材 MLY-1型蒙醫(yī)溫針療術(shù)溫針儀(內(nèi)蒙古元陽(yáng)中蒙醫(yī)科技開(kāi)發(fā)有限公司)。曠場(chǎng)儀：型號(hào)為UGO Basile S.R.L。懸尾箱子：高60 cm，寬40 cm，深50 cm，按照相關(guān)文獻(xiàn)制定[6]。Morris水迷宮：北京眾實(shí)迪創(chuàng)科技發(fā)展有限公司。水桶：深80 cm，直徑50 cm。秒表，電子秤，溫度計(jì)等。

1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及分組 清潔級(jí)SD雄性大鼠，體重160～180 g，32只。由維通利華動(dòng)物實(shí)驗(yàn)有限公司提供。將SD大鼠在相同條件下，分籠飼養(yǎng)于溫度22～26℃，濕度60%～80%，定時(shí)通風(fēng)換氣的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室中，適應(yīng)性喂養(yǎng)3 d后隨機(jī)分為正常組、溫針組、模型組及模型+溫針組，每組8只制備。

1.3 造模方法 適應(yīng)性平行飼養(yǎng)3 d后，將模型組及模型+溫針組大鼠放入預(yù)備好的溫度為30±2℃的水桶中，每日1次，每次20 min，每桶單次放入2只大鼠，適應(yīng)性游泳3 d。3 d適應(yīng)性游泳后開(kāi)始正式負(fù)重游泳實(shí)驗(yàn)，負(fù)重量為體重的5%(目的是為了盡快達(dá)到力竭效果)[7]，并每天記錄游泳時(shí)間，每隔1 d記錄體重。如游泳期間大鼠漂浮在水面不動(dòng)，木棍驅(qū)趕其保持運(yùn)動(dòng)狀態(tài)。力竭標(biāo)準(zhǔn)為：游泳動(dòng)作明顯失調(diào)，頭部沉入水底10 s不能回到水面即視為力竭，當(dāng)即撈出，毛巾擦干后，放置籠中。正常組及溫針組不參與力竭游泳。

1.4 治療方法 正常組及模型組不參與治療。溫針組取“頂會(huì)”“心穴”[8]，用特制銀針(直徑0.5 mm，長(zhǎng)度3 cm)，從上而下的方向斜刺后，接MLY-1型蒙醫(yī)溫針療術(shù)溫針儀，電流強(qiáng)度100 mA，溫度40℃，每次刺激15 min，每隔1日兩穴位交替治療，共治療11次。模型+溫針組大鼠制備造模后與溫針組大鼠同時(shí)進(jìn)行溫針治療。

1.5 取材 末次力竭游泳24 h后，用電子天平稱量大鼠體重后快速斷頭處死，在實(shí)驗(yàn)室作臺(tái)上完整的從腦組織取出海馬及下丘腦，在專用電子天平上稱重后加入0.9%的氯化鈉溶液后用組織勻漿器低溫下制成勻漿，4℃3500 r/min離心20 min，然后取上清液，置于-20℃保存待測(cè)。

1.6 檢測(cè)指標(biāo) 采用酶聯(lián)免疫法吸附法(ELISA法)檢測(cè)大鼠海馬、下丘腦IL-1β，IL-6及TNF-a的含量，按試劑盒說(shuō)明進(jìn)行操作。

2 結(jié)果

2.1 一般情況 實(shí)驗(yàn)前后正常組及溫針組除體重明顯增加外，無(wú)其他明顯變化。模型組大鼠較實(shí)驗(yàn)前明顯表現(xiàn)出精神狀態(tài)欠佳、食量減退、毛發(fā)無(wú)光澤、嗜睡、易怒、反應(yīng)遲鈍、體重較正常組、溫針組及模型+溫針組明顯下降等一系列疲勞特征。與模型組相比，模型+溫針組表現(xiàn)為基本正常。

2.2 行為學(xué)變化 從表1可以看出在末次實(shí)驗(yàn)時(shí)測(cè)量的體重，與正常組相比，模型組大鼠體重明顯降低，有高度統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.01)。與模型組相比，模型+溫針組大鼠體重有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)。

2.3 海馬、下丘腦細(xì)胞因子含量的變化 從表2可以看出與正常組相比，模型組大鼠海馬IL-1β、IL-6、TNF-a含量明顯升高，有高度統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.01)。與模型組相比，模型+溫針組大鼠海馬IL-β、IL-6、TNF-a含量明顯減低，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)。

從表3可以看出與正常組相比，模型組大鼠下丘腦IL-1β、IL-6、TNF-a含量明顯升高，有高度統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.01)。與模型組相比，模型+溫針組大鼠下丘腦IL-1β、TNF-a含量明顯減低，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.01)。與模型組相比，模型+溫針組大鼠下丘腦IL-6含量明顯減低，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)。

表1 4組大鼠體重

注：與正常組相比，**P<0.01，與模型組相比，#P<0.05，##P<0.01。

表2 4組大鼠海馬細(xì)胞因子含量

注：與正常組相比，**P<0.01，與模型組相比，#P<0.05，##P<0.01。

表3 4組大鼠下丘腦細(xì)胞因子含量

注：與正常組相比，**P<0.01，與模型組相比，#P<0.05，##P<0.01。

3 討論

蒙醫(yī)溫針通過(guò)針刺刺激、溫?zé)岽碳ぜ把ㄎ坏南嗷プ饔茫瑢?duì)機(jī)體產(chǎn)生一些生物學(xué)效應(yīng)，以調(diào)節(jié)機(jī)體的生理和病理狀況，從而達(dá)到治療及預(yù)防疾病的目的[9]。蒙醫(yī)溫針療法治療慢性疲勞綜合征的原則為：調(diào)體素，改善巴達(dá)干、赫依功能為總則。根據(jù)慢性疲勞綜合征的臨床癥狀和特征結(jié)合蒙醫(yī)基礎(chǔ)理論和臨床治療有效穴位篩選出頂會(huì)穴和心穴。“頂會(huì)穴”(位于頂骨正中)，主治“赫依”性音啞癥、神志不清、癲狂、視力減退、頭暈、頭痛等癥。“心穴”(位于第7胸椎下凹陷正中)，主治心悸、心抖、癲狂、“巴達(dá)干、赫依”性疾病、失眠、瞻忘、納呆、神志昏迷等癥[10]。

近年來(lái)研究表明，慢性疲勞綜合征可能與慢性免疫激活、炎癥和細(xì)胞因子的改變及其他特異性抗體的出現(xiàn)相關(guān)。海馬是人體認(rèn)知和情緒調(diào)節(jié)的重要中樞,下丘腦是神經(jīng)-內(nèi)分泌-免疫(NEI)網(wǎng)絡(luò)的高級(jí)整合中樞。海馬在學(xué)習(xí)記憶的中樞調(diào)節(jié)環(huán)節(jié)中起著重要作用[11]，根據(jù)慢性疲勞綜合征患者表現(xiàn)出的健忘、注意力不集中等精神障礙，可以推測(cè)海馬中細(xì)胞因子的改變可能與慢性疲勞的發(fā)生有關(guān)。人體的免疫功能具有一定的防御、穩(wěn)定及監(jiān)視功能。這些功能一旦受到外界的刺激平衡失調(diào)，就會(huì)產(chǎn)生各種免疫性疾病。細(xì)胞因子不僅可以激活免疫系統(tǒng)，對(duì)神經(jīng)-內(nèi)分泌系統(tǒng)的調(diào)節(jié)中也有著重要作用[12]。高表達(dá)的促炎癥因子可使身體出現(xiàn)疲勞、肌肉疼痛、咽喉疼痛、淋巴結(jié)腫大等表現(xiàn)[13]。IL-1β、IL-6、TNF-a均是參與炎癥反應(yīng)的細(xì)胞因子。本研究中模型組大鼠海馬、下丘腦IL-1β、IL-6、TNF-a的含量明顯升高，提示大鼠體內(nèi)有炎癥反應(yīng)。而模型+溫針組大鼠在給與蒙醫(yī)溫針治療后IL-1β、IL-6、TNF-a含量明顯比模型組大鼠低，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05或P<0.01)。這一結(jié)果證明蒙醫(yī)溫針有利于減少炎癥反應(yīng)。與正常組比較，溫針組體重、IL-1β、IL-6、TNF-a的含量無(wú)明顯差異，差別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。這一結(jié)果提示蒙醫(yī)溫針治療不僅對(duì)人體不會(huì)造成傷害，繼而可以減少疲勞大鼠海馬和下丘腦區(qū)炎癥細(xì)胞，從而一定程度上起到緩解疲勞癥狀、改善學(xué)習(xí)記憶的作用。

綜上所述，蒙醫(yī)溫針從改善微循環(huán),調(diào)節(jié)新陳代謝,調(diào)節(jié)下丘腦-垂體-腎上腺軸功能,提高機(jī)體機(jī)能狀態(tài),改善或增強(qiáng)機(jī)體免疫機(jī)能等途徑對(duì)慢性疲勞綜合征起到治療作用，還能積極預(yù)防疾病的發(fā)展，易操作、安全性高、無(wú)副作用、療效佳、經(jīng)濟(jì)適用等優(yōu)點(diǎn)易被患者所接受。而且該療法也適用于其他常見(jiàn)病的治療，值得進(jìn)一步推廣應(yīng)用。