一種閩產青紅酒粗多糖和總黃酮的測定

周美蘭 許 景 闞永軍 趙 立 胡 娟,3*

1.福建省中醫藥研究院，福建 福州 350003；2. 福建省宏盛閩侯酒業有限公司，福建 福州 350108；3. 福建中醫藥大學附屬第二人民醫院，福建 福州 350003

青紅酒，是以福建獨有的古田紅曲做為糖化發酵劑，選用上好的糯米，配以秘制藥白曲，精釀而成，色呈琥珀，口感柔順綿長。青紅酒，被譽為閩派黃酒的正宗，含有豐富的葡萄糖、糊精、氨基酸、維生素和多種酯類物組成；酒精度為13%左右，刺激性小，適量常飲，有促進食欲、舒筋活絡、生津補血、調養身體、解除疲乏的功效，是一種老少皆宜的飲用酒。

立足于福建紅曲和道地藥材綜合利用，以中華老字號企業的百年釀造經驗，采用閉合式生產模式。以黃精等藥食同源中藥為原料，選用道地多花黃精，有機圓糯米及古田紅曲、秘制藥白曲，由國家級高級釀酒師、中醫藥專家組成的團隊精心配方研制。在保留傳統釀造工藝基礎上，優化本產品工藝，萃取原料之精華發酵而成。酒色橙黃清亮，酒味醇厚，香氣雅致，口感柔和甘甜，酒與黃精完美融合，有補氣養陰、健脾、潤肺，益腎之功效。產品上市獲得消費者贊譽。青紅酒樣品圖片見圖1。

糖類是黃精化學組成中含量最多的重要活性部分，黃精多糖含量最大，約占11.74%；黃酮具有較高的藥用價值，并且為黃精屬植物的活性成分之一[1]。多糖是一類非特異性免疫增強劑，而且有降血糖、降血脂、降血清過氧化脂質和降低膽固醇濃度、抗血凝等作用[2-4]；黃酮具有消除疲勞、降血脂、降血糖、保護血管、防動脈粥樣硬化、擴張毛細血管、抗衰老和抗菌作用、活化大腦細胞和其他臟器細胞的功能等多種功效[5]。

本文采用醇沉提取酒中多糖、以D-葡萄糖為對照品，苯酚一硫酸顯色，490 nm波長處測定黃精青紅酒中粗多糖含量[6]；采用聚酰胺層析法提取酒中黃酮[7]，以蘆丁為對照品，360nm波長下測定吸光度，計算總黃酮含量。為產品配方及工藝的質量控制奠定基礎。

1 儀器與材料

1.1 儀器 紫外分光光度計(上海美譜達儀器有限公司，型號：UV-3200)；水浴鍋(上海精宏實驗設備有限公司，型號：DK420S)；離心機(湖南液儀實驗室YI儀器開發有限公司，型號：L-530低速離心機)；電子天平(梅特勒-特利多，型號：AE240S)

1.2 材料與試劑 無水乙醇(西隴化工有限公司，批號16010902)；苯酚(國藥，20150716)；D-無水葡萄糖(成都曼思特生物科技有限公司，MUST-11020603)。聚酰胺粉(國藥集團化學試劑有限公司，批號20150924，規格：100-200目500 g)；蘆丁(成都曼思特生物科技有限公司,規格：對照品 A0103-20 mg)；乙醇(西隴化工有限公司，批號16010902，規格：AR500 mL)；甲醇(國藥集團化學試劑有限公司，批號20150824，規格：AR5 L)；苯(西隴化工有限公司，批號1601131，規格：AR500 mL)。

供試品：1號黃精青紅酒，將黃精浸泡于青紅酒中；2號黃精青紅酒，將黃精與紅曲米一起投料發酵。同一工藝，同一批次取3個樣品。

2 方法與結果

2.1 供試品中粗多糖測定

2.1.1 試劑 配制取無水葡萄糖對照品2.57 mg于25 mL量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，得濃度為0.103 mg/mL的對照品溶液。取苯酚2.50 g加50 ml純水溶解即得5%的苯酚溶液。

2.1.2 吸收曲線的繪制 對濃度10 μg/mL葡萄糖對照品溶液，在200-800 nm波長范圍進行全波長掃描。以波長為橫坐標，以吸光度為縱坐標作圖，繪制出曲線，此曲線即為葡萄糖的吸收光譜曲線。葡萄糖最大吸收波長為490 nm，如圖2所示。

2.1.3 標準曲線的繪制 精密量取對照品溶液0.3 mL、0.4 mL、0.6 mL、0.8 mL、1.0 mL，分別置15 mL具塞試管中，各加水補至2.0 mL，精密加入5%苯酚溶液l.0 mL，搖勻，再精密加濃硫酸5.0 mL，搖勻，置沸水浴中加熱2 min，取出，流水冷卻到室溫，以相應試劑為空白，采用紫外-可見分光光度法，在490 nm的波長處測定吸光度，結果見表1。以吸光度為縱坐標，濃度為橫坐標，繪制標準曲線，回歸方程為y=53.32x-0.021，r=0.9984。

表1 無水葡萄糖標準溶液濃度和吸光度的關系

2.1.4 黃精青紅酒中粗多糖測定 取10 mL受試樣品加無水乙醇35 ml，置于4℃冰箱中靜置4 h，離心(4000r/ 10min)，倒去上清液，收集沉淀，加純水5 mL溶解，加無水乙醇20 mL，反復溶解沉淀3次。收集沉淀，將沉淀用水溶于200 mL容量瓶中，搖勻，即得供試溶液。

精密量取黃精青紅酒供試溶液0.5 mL，加水補至2 mL，置于具塞試管中，按標準曲線的制備項下的方法，自“2.1.1項下，精密加入5%苯酚試液1.0 mL”起，依照測定吸光度，以葡萄糖標準曲線計算試樣中總多糖的含量。結果見表2。

表2 黃精青紅酒中粗多糖測定結果

2.2 供試品中總黃酮測定

2.2.1 對照品溶液配制 稱取2.52 mg蘆丁，加甲醇溶解并定容至50 mL，即得50.4 μg/mL的蘆丁標準溶液。

2.2.2 吸收曲線的繪制 對濃度10 μg/mL蘆丁對照品溶液，在200～800 nm波長范圍進行全波長掃描。以波長為橫坐標，吸光度為縱坐標作圖，繪制出曲線，此曲線即為蘆丁的吸收光譜曲線。蘆丁在紫外光區最大吸收波長為360 nm，如圖3所示。

2.2.3 標準曲線的繪制 吸取0、1.5、2.0、3.0、4.0、4.5 mL蘆丁標準溶液于10 mL容量瓶中，加甲醇定容至刻度，于360 nm測定吸光度值,見表3。以濃度為橫坐標，以吸光度為縱坐標繪制標準曲線，回歸方程為：y= 0.0328x+ 0.0171，r=0.9983。

2.2.4 黃精青紅酒中總黃酮測定量取試樣50 mL各3份，置于蒸發皿中70℃濃縮至約10 mL，轉移至25 mL容量瓶，加無水乙醇定容至刻度，搖勻后，超聲提取20 min，離心(4000 r/min,10 min)，吸取上清液2.0 mL，于蒸發皿中，加1 g聚酰胺粉吸附，于水浴上揮去乙醇，然后轉入層析柱(1 cm×25 cm)。先用20 mL苯洗，棄去苯液，然后用甲醇洗脫黃酮，定容至25 mL。取上述溶液離心，于波長360 nm測定吸光度值。依照測定吸光度，以蘆丁標準曲線計算試樣中總黃酮的含量。結果見表4。

表3 蘆丁標準溶液濃度和吸光度的關系

表4 黃精青紅酒中總黃酮測定結果

3 討論

由表3可以看出，兩種不同工藝制備的黃精青紅酒，1號供試品浸泡黃精酒每100 mL粗多糖平均含量為14.89 mg，2號供試品發酵黃精酒每100 mL粗多糖平均含量為76.28 mg，是1號樣品的5.1倍；由表4可以看出，1號供試品浸泡黃精酒每100 mL總黃酮平均含量為16.28 mg，2號供試品發酵黃精酒每100 mL總黃酮平均含量為72.16 mg，是1號樣品的4.4倍。

發酵黃精酒中的多糖和黃酮均高于浸泡黃精酒，同時發酵黃精酒的口感和色澤均優于浸泡黃精酒。因此無論是從功效成分，還是從外觀和味道，發酵黃精酒工藝均優于浸泡黃精酒工藝。

4 結論

本文采用醇沉法提取多糖簡單易行，聚酰胺柱層析法已廣泛用于黃酮類成分分離純化，以提高提取物黃酮成分的含量；兩種提取分離方法的應用，可避免酒干擾色對測定的影響。通過測定青紅酒中粗多糖和總黃酮等功效成分含量，有利于對產品配方及工藝進行質量控制。