胃癌患者血清miR-378和miR-21表達變化及其診斷效能研究

江強

【摘要】 目的：研究胃癌患者血清微小核糖核酸-378（miR-378）和微小核糖核酸-21（miR-21）表達變化及其診斷效能。方法：選擇2015年3月-2017年12月本院收治的74例胃癌患者為胃癌組，同期收集62例胃良性病變患者為胃良性病變組，另選擇本院門診健康體檢者69例為對照組。比較各組血清miR-378和miR-21表達情況，分析胃癌患者血清miR-378和miR-21和臨床病理特征的關系，不同預后組血清miR-378和miR-21表達情況，并分析以上指標對胃癌的診斷效能。結果：三組血清miR-378和miR-21比較，差異均有統計學意義（P<0.05）;對照組血清miR-378均高于胃良性病變組和胃癌組，且胃良性病變組高于胃癌組（P<0.05）;對照組血清miR-21均低于胃良性病變組和胃癌組，且胃良性病變組低于胃癌組（P<0.05）。胃癌患者血清miR-378和miR-21的表達與年齡、性別均無關（P>0.05），而與腫瘤直徑、組織分化程度、TNM分期、腫瘤浸潤深度、淋巴結轉移均有關（P<0.05）。預后不良組血清miR-378水平低于預后良好組，miR-21水平高于預后良好組，差異均有統計學意義（P<0.05）。制作miR-378、miR-21、miR-378+miR-21對胃癌診斷的ROC曲線，其曲線下面積分別為0.802、0.774、0.882，靈敏度分別為0.812、0.779、0.841，特異度分別為0.703、0.770、0.824。結論：血清miR-378在胃癌患者中表達下降，miR-21表達明顯上調，miR-378聯合miR-21在胃癌診斷中有較高的診斷效能，可作為胃癌診斷的參考依據。

【關鍵詞】 胃癌 微小核糖核酸-378 微小核糖核酸-21 診斷效能

[Abstract] Objective： To study the expression of microRNA-378 （miR-378） and microRNA-21 （miR-21） in serum of patients with gastric cancer and their diagnostic efficacy. Method： A total of 74 patients with gastric cancer admitted to our hospital from March 2015 to December 2017 were selected as gastric cancer group， at the same time， 62 patients with gastric benign lesions were collected as gastric benign lesions group， in addition， 69 outpatients were selected as the control group. The expression of miR-378 and miR-21 were compared， the relationship between serum miR-378 and miR-21 and clinicopathological characteristics of gastric cancer patients， the expressions of serum miR-378 and miR-21 in different prognosis groups were analyzed， and the diagnostic efficacy of the above indicators for gastric cancer was analyzed. Result： The serum miR-378 and miR-21 of the three groups were compared， the difference was statistically significant （P<0.05）. The serum miR-378 of the control group were higher than those of the gastric benign lesion group and the gastric cancer group， the benign lesion group was higher than the gastric cancer group （P<0.05）. The serum miR-21 of the control group were lower than those of the gastric benign lesion group and the gastric cancer group， and the benign lesion group was lower than the gastric cancer group （P<0.05）. The expression levels of serum miR-378 and miR-21 in gastric cancer patients were not correlated with age and gender （P>0.05）， but they were correlated with tumor diameter， tissue differentiation， TNM stage， tumor invasion depth and lymph node metastasis （P<0.05）. The level of miR-378 in the poor prognosis group was lower than that in the good prognosis group， and the level of miR-21 was higher than that in the good prognosis group （P<0.05）. The ROC curves of miR-378， miR-21 and miR-378 + miR-21 in the diagnosis of gastric cancer were made， the area under the curve were 0.802， 0.774 and 0.882， the sensitivity were 0.812， 0.779 and 0.841， and the specificity were 0.703， 0.770 and 0.824. Conclusion： The expression of miR-378 in serum decreased and miR-21 was up-regulated in patients with gastric cancer. The combination of miR-378 and miR-21 has a high diagnostic efficiency in the diagnosis of gastric cancer， which can be used as a reference for the diagnosis of gastric cancer.[Key words] Gastric Cancer MicroRNA-378 MicroRNA-21 Diagnostic efficiencyFirst-authors address： Taian Cancer Prevention and Treatment Hospital， Taian 271000， China

胃癌為臨床最常見的惡性腫瘤之一，具有進展快、預后差等特點，嚴重危及患者生命安全。臨床研究報道，早期進行根治術治療是延長胃癌患者生存率的最佳手段[1]，但早期胃癌缺乏特異性癥狀，大部分患者就診時已進展至中晚期，錯過了最佳治療時機。影像學檢查存在一定局限性，靶組織活檢作為一種侵入性檢查，確診率高，但存在一定的取樣誤差，影響對疾病的評價[2]。目前臨床上缺乏較為靈敏的胃癌診斷標志物，癌胚抗原和糖類抗原的特異性和靈敏度較低。微小核糖核酸（miRNA）具有高度保守性、時序性、穩定性和組織特異性，可耐RNA酶降解，在腫瘤發生發展中有重要作用，是目前腫瘤分子生物學研究的重點[3]。其中miR-21在多種腫瘤組織和細胞中過表達，能夠參與腫瘤的生長、侵襲、轉移及耐藥等反應，黃新造等[4]研究發現，miR-21高表達和腫瘤患者不良預后有關。miR-378為重要的相關基因調控位點，最新研究發現其異常表達和宮頸癌、卵巢癌等相關，但在胃癌中的生物功能報道較少[5]。盡管組織miR能夠為腫瘤提供精確診斷，但其過程復雜、且創傷明顯，容易傷及胃黏膜，從而限制其在腫瘤診斷篩查中的應用。血液樣本具有獲取方便、穩定性高等特點，相關研究發現，血清miRNA可作為多種惡性腫瘤診斷和預后的分子標記物。本研究主要分析胃癌患者血清miR-378和miR-21表達變化及其診斷效能，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2015年3月-2017年12月本院收治的74例胃癌患者，納入標準：（1）臨床明確診斷為胃癌;（2）預計生存期超過3個月;（3）未接受放化療;（4）心肝腎等無明顯異常，且外周血常規、心電圖基本正常[6]。排除標準：（1）其他部位原發腫瘤;（2）急性感染或機體嚴重創傷;（3）妊娠或哺乳期婦女;（4）胃癌復發。將74例胃癌患者作為胃癌組，同期收集62例胃良性病變患者作為胃良性病變組，另選擇本院門診健康體檢者69例作為對照組。患者均知情同意本研究，研究經本院倫理委員會批準。

1.2 方法

1.2.1 病史采集 記錄胃癌患者性別、年齡、腫瘤直徑、組織分化程度、TIM分期、腫瘤浸潤深度及淋巴結轉移等情況。

1.2.2 樣本檢測 采集各組受試者空腹外周靜脈血4 mL，放置于不含乙二胺四乙酸試管，在室溫下放置1 h，常規離心后放置于-80 ℃低溫箱中保存待檢。采用實時熒光定量PCR反應檢測miR-378和miR-21表達情況，以2-ΔΔCt表示miRNA的相對表達量。

1.2.3 隨訪 胃癌患者均以電話、門診等方式進行1年隨訪，入組日期即為隨訪起始日期，至隨訪結束、失訪或者死亡為截止日期。

1.3 觀察指標及判定標準 （1）比較三組血清miR-378和miR-21表達情況;（2）分析胃癌患者血清miR-378和miR-21的表達和各項臨床指標的關系;（3）比較胃癌患者不同預后組血清miR-378和miR-21的表達，無遠處轉移、復發和死亡者判定為預后良好，有遠處轉移或復發或死亡者判定為預后不良;（4）分析血清miR-378和miR-21對胃癌的診斷效能。

1.4 統計學處理 采用SPSS 18.0軟件對所得數據進行統計分析，計量資料用（x±s）表示，兩組間選用獨立樣本t檢驗，多組間采用方差分析;計數資料以率（%）表示，比較采用字2檢驗。繪制受試者工作特征曲線（ROC曲線）分析指標對胃癌的診斷效能，以P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 三組一般資料比較 胃癌組74例，男40例，女34例;年齡41～68歲，平均（58.14±5.82）歲。胃良性病變組62例，男36例，女26例;年齡38～67歲，平均（56.95±6.27）歲。腸上皮化生28例，胃竇炎性息肉20例，胃竇潰瘍14例。對照組69例，男38例，女31例;年齡36～69歲，平均（57.48±4.84）歲。三組性別、年齡比較，差異均無統計學意義（P>0.05），具有可比性。

2.2 三組血清miR-378和miR-21比較 三組血清miR-378和miR-21比較，差異均有統計學意義（P<0.05）;對照組血清miR-378均高于胃良性病變組和胃癌組，且胃良性病變組高于胃癌組（P<0.05）;對照組血清miR-21均低于胃良性病變組和胃癌組，且胃良性病變組低于胃癌組（P<0.05），見表1。

2.3 胃癌患者不同預后組血清miR-378和miR-21的表達比較 預后不良組血清miR-378水平低于預后良好組，miR-21水平高于預后良好組，差異均有統計學意義（P<0.05），見表2。

2.4 胃癌患者血清miR-378和miR-21的表達和各項臨床指標的關系分析 胃癌患者血清miR-378和miR-21的表達與年齡、性別均無關（P>0.05），而與腫瘤直徑、組織分化程度、TNM分期、腫瘤浸潤深度、淋巴結轉移均有關（P<0.05），見表3。

2.5 血清miR-378和miR-21對胃癌的診斷效能分析 制作miR-378、miR-21、miR-378+miR-21對胃癌診斷的ROC曲線，其曲線下面積分別為0.802、0.774、0.882，靈敏度分別為0.812、0.779、0.841，特異度分別為0.703、0.770、0.824，見表4和圖1。

3 討論

胃癌是源自于胃黏膜上皮的惡性腫瘤，全腫瘤流行病統計數據發現，目前胃癌的發生率呈上升趨勢，是導致惡性腫瘤患者死亡的主要疾病之一[7]。臨床研究已表明，早期胃癌經正規治療的5年生存率在85%以上[8]。因此盡早診治是提高胃癌療效和改善預后的最有效方式，但我國胃癌早期診斷較為困難，發現時多已經處于中晚期。胃癌的發生是復雜的生物學過程，近年來隨著對惡性腫瘤異質性研究的深入和分子生物學的進展，多個研究表明，腫瘤發生發展中miRNA可起到類似癌基因和抑癌基因的作用，從而調節腫瘤細胞的增殖及凋亡等反應，影響腫瘤生物學行為[9-10]。miRNA為小分子調控RNA，疾病狀態下表達譜出現異常改變，從而引起癌變的系列反應。血液中miRNAs具有穩定性高、檢測損傷小等特點，目前研究已證實多種miRNAs和腫瘤發生有良好相關性[11]。

miR-378能夠作用于絲裂原活化蛋白激酶1，抑制胃癌細胞的增殖、遷移及侵襲，影響其細胞周期，誘導細胞凋亡[12]。黃聲凱等[13]研究報道，miR-378在胃癌組織中的表達明顯下調，起到抑癌基因作用，通過增強胃癌細胞miR-378的表達，可促進胃癌增殖、侵襲和凋亡等胃癌生物學作用。Treece等[14]通過研究發現，miR-378低表達可能影響化療藥物的敏感性，導致化療藥物耐藥，影響化療療效。又有研究發現，肺癌中miR-378高表達者生存期相對較長[15]。以上研究表明miR-378可能對腫瘤的發生發展可能起到負調控作用。本研究結果顯示，三組血清miR-378比較，差異有統計學意義（P<0.05）;對照組血清miR-378均高于胃良性病變組和胃癌組，且胃良性病變組高于胃癌組（P<0.05），提示miR-378可能作為抑癌基因參與胃癌發病。另有研究發現，miR-378表達和惡性腫瘤生物學行為有一定相關性[16]。本研究也顯示，miR-378表達和不同腫瘤直徑、組織分化程度、TNM分期、腫瘤浸潤深度和淋巴結轉移有差異。進一步分析發現，預后良好組miR-378水平較預后不良組高，預后不良組血清miR-378水平低于預后良好組，差異均有統計學意義（P<0.05），說明miR-378表達能夠反映胃癌患者預后。但目前有關胃癌患者中miR-378的診斷效能缺乏客觀依據，本研究中ROC曲線分析顯示，胃癌患者血清中miR-378曲線下面積為0.802，且有較高靈敏性和特異性，表明miR-378在胃癌診斷上有較高的準確性，此為miR-378作為癌癥診斷的潛在標志提高了理論基礎。

miR-21作為一種癌基因，可參與細胞增殖、分化、凋亡等反應，與腫瘤生長、侵襲和轉移相關，在多種惡性腫瘤中的表達上調，可能成為腫瘤早期診斷的標志物[17]。缺氧條件下，miR-21可抑制細胞增殖，影響DNA在損傷修復中的能力，利于血管再生，從而在腫瘤發生發展中起到重要作用[18]。已有研究報道，miR-21在腎癌等惡性腫瘤中的表達上調，導致腫瘤的發展和轉移[19]。且有研究發現，對奧沙利鉑耐藥的胃癌患者miR-21表達顯著上調，下調miR-21表達能夠增加化療藥物敏感性[20]。本研究顯示，胃癌患者血清miR-21呈高表達，和胃癌患者多種腫瘤生物學行為相關，說明其可參與胃癌形成，促進癌基因作用，為胃癌診斷提供一定參考依據。胃癌miR-21低表達者的療效優于高表達者，且miR-21低表達者的3年存活率顯著高于高表達者，提示其和患者不良預后有一定相關性[18]。Sekar等[21]通過研究發現，miR-21高表達可作為胃癌患者預后的獨立危險因素。本研究顯示，預后良好組血清miR-21水平較低，證實其和胃癌患者預后的關系。且本研究發現，miR-21對胃癌診斷的ROC曲線為0.774，表明miR-21有著較高的診斷價值，能夠有效鑒別胃部良惡性病變。將miR-378和miR-21二者并聯試驗發現，曲線下面積較miR-378和miR-21單獨檢測大，說明聯合檢測可提高胃癌的診斷效能。

綜上所述，血清miR-378在胃癌患者中表達下降，miR-21表達明顯上調，miR-378聯合miR-21在胃癌診斷中有較高的診斷效能，可作為胃癌診斷的參考依據。

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（收稿日期：2019-09-18） （本文編輯：姬思雨）