不同殺菌劑對除蟲菊根腐病菌的室內毒力測定

曹妍 王雙金

摘要? ? 為篩選出防治除蟲菊根腐病菌的有效藥劑，采用菌絲生長速率法測定了10種殺菌劑對除蟲菊根腐病菌的主要致病菌——鐮刀菌GF4的室內抑菌效果。結果表明，供試的10種殺菌劑對鐮刀菌GF4均有一定的抑制作用。其中，微生物殺菌劑100億CFU/g枯草芽孢桿菌可濕性粉劑（美國拜沃）對鐮刀菌GF4的室內毒力最強，EC50值為1.40×10-6 mg/L;其次是100萬孢子/g寡雄腐霉菌可濕性粉劑，EC50值為0.003 9 mg/L;化學農藥80%多菌靈可濕性粉劑也表現出較強的室內抑制效果，EC50值為51.634 6 mg/L。該研究篩選出了能有效抑制鐮刀菌GF4菌絲生長的生物農藥，用量少且毒性低，為除蟲菊根腐病的田間防治提供了基礎研究。

關鍵詞? ? 除蟲菊;根腐病;鐮刀菌;室內毒力測定

中圖分類號? ? S482.2? ? ? ? 文獻標識碼? ? A

文章編號? ?1007-5739（2020）08-0096-02? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?開放科學（資源服務）標識碼（OSID）

除蟲菊（Chrysanthemum cinerariaefolium）為菊科菊蒿屬植物，是迄今為止世界上少數幾種能夠集約化種植的殺蟲植物[1]，從中提取的除蟲菊素（酯）被公認為安全有效的植物源殺蟲劑。20世紀末，除蟲菊被引種到云南省玉溪、曲靖、紅河等地種植。經過近20年的發展，云南省已成為繼東非和澳大利亞之后的第三大除蟲菊產區。隨著規模化種植和面積的不斷擴增，除蟲菊病害日益突出，但目前國內在病蟲害研究和藥劑防治方面幾乎處于空白狀態。關于除蟲菊病原菌的研究，國內目前只見除蟲菊莖腐病原菌為4種鐮孢菌的報道[2]。

除蟲菊根腐病是除蟲菊規模化育苗和種植中出現的主要病害之一，該病使植株根部變褐、腐爛，植株萎蔫，嚴重的導致整株死亡。本次試驗從云南峨山甸中除蟲菊育苗基地采集除蟲菊根腐病菌幼苗，帶回實驗室進行病原菌分離、培養鑒定，獲得一株鐮刀菌，命名為GF4，且經過科赫法則回接確定為除蟲菊根腐病的主要致病菌之一。鐮刀菌通常為根腐病的致病菌，郝向陽等就從福建非洲菊產區分離到非洲菊根腐病原菌主要為尖孢鐮刀菌、隱地疫霉[3]，鐮刀菌還是引起黃瓜、番茄、枸杞、太子參等植物根腐病的病原菌[4-7]。

1? ? 材料與方法

1.1? ? 試驗材料

供試菌株為實驗室保存的鐮刀菌GF4。該菌株從除蟲菊幼苗根腐病根上分離，根據分生孢子類型初步鑒定為鐮刀菌，由云南南寶生物科技有限公司微生物實驗室保存備用。

供試藥劑有①化學殺菌劑：70%嘧霉胺水分散粒劑（山東一覽科技有限公司）、20%腐霉利懸浮劑（江西禾益化工股份有限公司）、80%多菌靈可濕性粉劑（江蘇倉泰農化有限公司）;②植物源殺菌劑：10%硫酸小檗堿水劑（云南南寶生物科技有限公司）、1%蛇床子素微乳劑（云南南寶生物科技有限公司）;③微生物殺菌劑：2億活孢子/g木霉菌可濕性粉劑（山東泰諾藥業有限公司）、100億CFU/g枯草芽孢桿菌可濕性粉劑（美國拜沃股份有限公司）、100億CFU/g枯草芽孢桿菌可濕性粉劑（德強生物股份有限公司）、1 000億CFU/g枯草芽孢桿菌可濕性粉劑（河北中保綠農股份有限公司）、100萬孢子/g寡雄腐霉菌可濕性粉劑（捷克生物制劑有限公司）。以上藥劑均為市購。

1.2? ? ?試驗方法

采用菌絲生長速率法[8]測定。在預試驗的基礎上，將1.1中的10種供試藥劑制成一定濃度的母液，然后按照一定濃度和比例加入到滅菌的50～60 ℃ PDA培養基中，制成一定梯度的含藥PDA平板培養基。用5 mm打孔器在預培養好的病原菌邊沿打取菌餅，接種到含藥培養基平板中央，將有菌絲面貼于培養基上，每個濃度設4個重復，以不含藥劑加等量無菌水的培養基為對照（CK）。在25 ℃恒溫培養箱中培養6 d，采用十字交叉法測量菌落直徑并記錄。根據以下公式計算抑制率：

將生長抑制率換算成抑制幾率值作為因變量（y），將藥劑濃度的對數值作為自變量（x），利用DPS 7.05軟件求出各藥劑的毒力回歸方程、相關系數r和有效抑制中濃度EC50值及EC90值。根據EC50值和EC90值，比較各藥劑對該菌生長的影響，篩選出用量低且抑制率高的農藥制劑。

2? ? 結果與分析

2.1? ? 不同殺菌劑對鐮刀菌GF4菌絲生長的影響

由表1可以看出，供試藥劑對除蟲菊根腐病菌GF4均有一定的抑制作用，但不同殺菌劑之間抑菌效果相差較大。各藥劑在設置濃度范圍內，隨著藥劑濃度的降低，藥劑對鐮刀菌GF4的抑制率也逐漸降低。在選取的化學殺菌劑中，80%多菌靈可濕性粉劑表現出相對較好的抑菌效果，在高劑量1 000 mg/L情況下抑制率為100%;而20%腐霉利懸浮劑和70%嘧霉胺水分散粒劑對鐮刀菌GF4的抑制率較差，在高劑量1 000 mg/L情況下，抑制率分別僅為56.38%、69.15%。選取的2種植物源農藥對鐮刀菌GF4抑制效果均較差，在高劑量2 500 mg/L情況下，10%硫酸小檗堿水劑和1%蛇床子素微乳劑對鐮刀菌GF4的抑制率分別為48.94%、61.70%。微生物殺菌劑中，3個廠家的枯草芽孢桿菌和寡雄腐霉菌可濕性粉劑的抑制效果均較強，即使在低劑量0.1 mg/L的情況下，抑制率仍在60%以上，只有2億活孢子/g木霉菌可濕性粉劑表現的殺菌效果相對較差，高劑量1 000 mg/L情況下，抑制率為72.34%。綜上所述，10種殺菌劑中，對鐮刀菌GF4殺菌效果較好的藥劑有枯草芽孢桿菌可濕性粉劑、寡雄腐霉菌可濕性粉劑，其次是化學藥劑80%多菌靈可濕性粉劑，而其他幾種藥劑抑制效果相對較差。

2.2? ? 不同殺菌劑對鐮刀菌GF4的室內毒力測定

由表2可以看出，供試的10種農藥對鐮刀菌GF4均有一定的毒力，但毒力差異較大。從各藥劑的EC50值和EC90值可以看出，枯草芽孢桿菌可濕性粉劑和寡雄腐霉可濕性粉劑表現出對鐮刀菌GF4較強的室內毒力。美國拜沃公司的100億CFU/g枯草芽孢桿菌可濕性粉劑對鐮刀菌GF4的室內毒力最強，EC50值和EC90值均最小，分別為1.40×10-6 mg/L和2.217 0 mg/L;其次是德強生物公司的100億CFU/g枯草芽孢桿菌和捷克生物公司的100萬孢子/g寡雄腐霉可濕性粉劑，其EC50值分別為0.000 2、0.003 9 mg/L，EC90值分別為6.063 8、26.521 3 mg/L;中保綠農公司的1 000億CFU/g枯草芽孢桿菌可濕性粉劑的EC50值為0.001 5 mg/L，但EC90值高達137.146 6 mg/L，EC90值較其他2種枯草芽孢桿菌可濕性粉劑要高;80%多菌靈可濕性粉劑的EC50和EC90值分別為51.634 6、147.784 3 mg/L;2億活孢子/g木霉菌可濕性粉劑和其他2種化學藥劑及2種植物源農藥的EC50值和EC90值均較大，表明對鐮刀菌GF4毒力作用不明顯。總之，3個廠家的枯草芽孢桿菌可濕性粉劑和捷克生物公司100萬孢子/g寡雄腐霉可濕性粉劑對鐮刀菌GF4的室內毒力較強，80%多菌靈可濕性粉劑次之，70%嘧霉胺水分散粒劑和木霉菌可濕性粉劑防效一般，腐霉利、硫酸小檗堿和蛇床子素防效差。

3? ? 結論與討論

試驗采用菌絲生長速率法對常用殺菌劑多菌靈、枯草芽孢桿菌、蛇床子素等10種藥劑對除蟲菊根腐病菌主要病原菌（鐮刀菌GF4）進行了室內毒力測定，結果表明，枯草芽孢桿菌可濕性粉劑、寡雄腐霉可濕性粉劑對鐮刀菌GF4有非常高的抑制率，而且隨著藥劑濃度的降低，抑制率降幅小，在低劑量0.1 mg/L的情況下，抑制率仍在60%以上，這與滕 朕等研究的生物農藥對人參立枯病菌的結果一致[9]。

試驗還發現，低于1 000 mg/L劑量時，選取的微生物殺菌劑枯草芽孢桿菌、寡雄腐霉對致病鐮刀菌GF4的抑制率高于化學藥劑多菌靈、嘧霉胺和腐霉利。越來越多的研究表明，枯草芽孢桿菌菌劑的殺菌效果優于某些化學農藥[10-11]。長期以來，植物病害的防治以化學農藥為主，但由于長期不合理使用化學農藥產生了農藥殘留、抗性等問題。近年來，隨著人們對食品安全意識的提高，生物農藥的開發越來越受重視。枯草芽孢桿菌具有繁殖速度快、抗菌譜廣、抗逆性強等優點，是微生物農藥中登記和應用最多的一類微生物殺菌劑，已被成功用于多種病害的生物防治[10，12-13]。

本試驗篩選出了對鐮刀菌GF4的室內抑菌效果較好的 微生物農藥枯草芽孢桿菌可濕性粉劑和寡雄腐霉菌可濕性粉劑，為進一步開展田間藥效試驗提供了基礎研究。此2種微生物藥劑對除蟲菊根腐病菌的田間防效是否穩定，仍需下一步大田試驗驗證。

4? ? 參考文獻

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