水質(zhì)糞大腸菌群多管發(fā)酵法樣品保存條件研究

摘要? ? 不同保存條件對水質(zhì)糞大腸菌群的檢測結(jié)果有直接的影響。本文通過多管發(fā)酵法研究不同樣品在不同保存溫度和保存時(shí)間的水質(zhì)糞大腸菌群數(shù)變化情況。結(jié)果表明，合適的水質(zhì)樣品保存條件為10 ℃冷藏條件下保存6 h。

關(guān)鍵詞? ? 多管發(fā)酵法;樣品保存條件;不同濃度;不同溫度

中圖分類號? ? X832? ? ? ? 文獻(xiàn)標(biāo)識碼? ? A

文章編號? ?1007-5739（2020）08-0185-01? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?開放科學(xué)（資源服務(wù)）標(biāo)識碼（OSID）

糞大腸菌群是在44.5 ℃條件下能發(fā)酵乳糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣的需氧及兼性厭氧的革蘭氏陰性無芽胞桿菌[1]，是當(dāng)前國內(nèi)外環(huán)境監(jiān)測部門評價(jià)水體污染程度的公認(rèn)指標(biāo)和主要監(jiān)測項(xiàng)目之一，具有廣泛的衛(wèi)生學(xué)意義[2]。水質(zhì)樣品的有效保存是保證糞大腸菌群檢測精確、可靠的必要條件，對于水質(zhì)糞大腸菌群的監(jiān)測具有重要意義[3-4]。

1? ? 材料與方法

1.1? ? 水樣的采集

距水面約10～15 cm處采樣，采集樣品盛裝于滅菌的采樣瓶中。

1.2? ? 試劑

單倍乳糖蛋白胨培養(yǎng)液、三倍乳糖蛋白胨培養(yǎng)液、EC培養(yǎng)液。

1.3? ? 試驗(yàn)方法

根據(jù)水樣污染程度，確定水樣接種量。將水樣接種到乳糖蛋白胨試管中，在37 ℃±0.5 ℃下培養(yǎng)24 h±2 h進(jìn)行初發(fā)酵。輕微振蕩在初發(fā)酵試驗(yàn)中產(chǎn)酸產(chǎn)氣或只產(chǎn)酸未產(chǎn)氣的試管，用火焰灼燒滅菌冷卻后的接種環(huán)將培養(yǎng)物分別轉(zhuǎn)接到裝有EC培養(yǎng)基的試管中，在44.5 ℃±0.5 ℃下培養(yǎng)24 h±2 h。培養(yǎng)后立即觀察，倒管中產(chǎn)氣證實(shí)為糞大腸菌群陽性。最后根據(jù)陽性管數(shù)查MPN表換算樣品中糞大腸菌群數(shù)。

2? ? 結(jié)果與分析

采集高濃度、中濃度和低濃度樣品，各自混勻后分裝于一系列樣品瓶內(nèi)，分別于4 ℃和10 ℃下保存24 h，每小時(shí)從冰箱內(nèi)取出水樣檢測，測定結(jié)果見表1。低濃度條件下，4 ℃保存溫度下，在1～6 h和8～13 h 2個(gè)時(shí)間段糞大腸菌群數(shù)差異最大;10 ℃保存溫度下，在1～6 h和9～14 h 2個(gè)時(shí)間段糞大腸菌群數(shù)差異最大。中濃度條件下，4 ℃保存溫度下，1～6 h和10～15 h 2個(gè)時(shí)間段糞大腸菌群數(shù)差異最大;10 ℃保存溫度下，在1～6 h和10～15 h 2個(gè)時(shí)間段糞大腸菌群數(shù)差異最大。高濃度條件下，4 ℃保存溫度下，在1～6 h和11～16 h 2個(gè)時(shí)間段糞大腸菌群數(shù)差異最大;10 ℃保存溫度下，在1～6 h和13～18 h 2個(gè)時(shí)間段糞大腸菌群數(shù)差異最大。

在4 ℃和10 ℃保存條件下，選取低、中、高3個(gè)濃度糞大腸菌群數(shù)結(jié)果差異最大的不同時(shí)間段的數(shù)值經(jīng)對數(shù)處理后進(jìn)行配對t檢驗(yàn)，結(jié)果見表2、3。

由表2可知，4 ℃條件下，低濃度樣品保存1～6 h的測定結(jié)果和8～13 h的測定結(jié)果在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義上有顯著性差異（P=0.001）;中濃度樣品保存1～6 h的測定結(jié)果和10～15 h的測定結(jié)果在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義上無顯著性差異（P=0.418）;高濃度樣品保存1～6 h的測定結(jié)果和11～16 h的測定結(jié)果在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義上有顯著性差異（P=0.005）。

由表3可知，10 ℃條件下，低濃度樣品保存1～6 h的測定結(jié)果和9～14 h的測定結(jié)果在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義上有顯著性差異（下轉(zhuǎn)第188頁）

（P=0.002）;中濃度樣品保存1～6 h的測定結(jié)果和10～15 h的測定結(jié)果在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義上有顯著性差異（P=0.042）;高濃度樣品保存1～6 h的測定結(jié)果和13～18 h的測定結(jié)果在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義上有顯著性差異（P=0.001）。

分別對低濃度、中濃度、高濃度樣品4 ℃和10 ℃保存1～6 h內(nèi)測定結(jié)果進(jìn)行配對t檢驗(yàn)，結(jié)果見表4。6 h內(nèi)低、中、高3個(gè)濃度樣品在4 ℃和10 ℃保存條件下糞大腸菌群數(shù)均無顯著性差異（P值分別為0.993、0.579、0.211），所以在保存6 h的前提下，可將保存溫度提高到10 ℃[5-6]。

3? ? 結(jié)論

低、中、高3種不同濃度的不同樣品在6 h內(nèi)測定值沒有顯著變化，但在6 h后不同濃度及保存溫度的情況下有著不同的變化;而在4 ℃和10 ℃的保存試驗(yàn)中，在6 h內(nèi)沒有明顯區(qū)別，所以水質(zhì)樣品的保存條件確定為在10 ℃冷藏條件下樣品可以保存6 h。

4? ? 參考文獻(xiàn)

[1] 張少峰，劉國強(qiáng).糞大腸菌群檢測方法及研究進(jìn)展[J].海洋通報(bào)，2008，27（3）：102-106.

[2] 史建.糞大腸菌群檢測方法研究進(jìn)展[J].河北化工，2012，35（7）：32-35.

[3] 生態(tài)環(huán)境部.水質(zhì)糞大腸菌群的測定 多管發(fā)酵法：HJ 347.2-2018[S].北京：中國環(huán)境出版社，2019.

[4] 黎堯，張紹斌.多管發(fā)酵法測定水質(zhì)糞大腸菌群的探討[J].環(huán)境與發(fā)展，2019，31（5）：116.

[5] 高瑞坤.糞大腸菌群檢測實(shí)驗(yàn)中濾膜法和固定底物酶底物法的差異性研究[C]//2014中國環(huán)境科學(xué)學(xué)會學(xué)術(shù)年會（第四章）.成都：中國環(huán)境科學(xué)學(xué)會，2014.

[6] 王朝霞.水中糞大腸菌群的多管發(fā)酵法檢測研究進(jìn)展[J].現(xiàn)代農(nóng)業(yè)科技，2016（7）：205.