紫外分光光度法測定市售檀香中總黃酮含量

陳依春 李 捷 姚 歡 阿 多 白瑪央金 旦增次仁 洛桑桑旦 丹增色珍 孫芳云

西藏民族大學基礎醫學院生命科學基礎研究實驗室、藏藥篩選實驗室，陜西 咸陽 712082

檀香，豆科植物青龍木 Pterocarpus indicus Willd．的干燥心材。原產于印度至東南亞各地，我國云南、海南等地亦有栽培，別名：薔薇木、青龍木、赤血樹，是一種集藥用、香料、工藝雕刻材料于一身的經濟植物[1]。系藏醫常用藥材，味辛、性溫，歸脾、胃、心、肺經，具有行氣溫中、開胃止痛之功效[2]。主要用于寒凝氣滯、胸膈不舒、胸痹心痛、脘腹疼痛、嘔吐食少等病癥[3]。

多年來，國內外學者對檀香的引種栽培、主要成分及其藥理作用等方面作了大量研究，有研究顯示，黃酮類化合物是檀香的主要有效成分之一[4-6]，黃酮類化合物有抗氧化、抗炎、鎮痛、調節免疫、抗衰老、降血脂作用[7]。但目前對于檀香黃酮類化合物的藥理作用研究較少，本研究旨在為市售檀香建立一種可操作性強的總黃酮含量測定方法，為進一步研究檀香藥材的藥理作用提供依據。

1.儀器與試劑

1.1 儀器 Lambda25紫外分光光度計(美國PE)；超聲提取儀：HAD-SY-800，長春樂璞科技有限公司；搖擺式中草藥粉碎機：DFY-200，大德藥機；

1.2 試劑 蘆丁對照品：中國食品藥品檢定研究院提供(100080-201610，供含量測定用，100mg/支)；檀香對照藥材：批號121310-201302 (ID:H9WL-8HQ5)，中國食品藥品檢定研究院提供。三氯化鋁、亞硝酸鈉、氫氧化鈉、無水乙醇等均為分析純。

1.3 樣品 購自廣東、澳大利亞、馬來西亞、印度，拉薩(樣品依次為1，2，3，4，5)等地的市售檀香(批號20170625；20170717；20170728；20170812；20170815)，由西藏拉薩甘露藏藥廠鑒定為正品。

2 方法與結果

2.1 總黃酮含量測定

2.1.1 供試品及對照品溶液的制備 精密稱取市售檀香藥材粉末0.1 g, 置25 mL錐形瓶中, 加入50%乙醇15 mL，搖勻，密塞，超聲振蕩30 min，放冷，過濾，濾液收集于25 mL容量瓶中，即得。精密稱取在120℃減壓干燥至恒重的蘆丁對照品28.66 mg，置25 mL容量瓶中, 用無水乙醇定容。精密量取10.00 mL蘆丁對照品溶液于50 mL容量瓶, 用無水乙醇稀釋、定容，搖勻即得蘆丁對照品溶液(0.22928 mg/mL)。

2.1.2 測定波長的選擇 精密移取對照品溶液2.00 mL置25 mL容量瓶中,按順序依次加入5%NaNO2溶液1 mL，搖勻,放置6 min,加10% AlCl3溶液1 mL搖勻,放置6 min,再加入4% NaOH溶液10 mL,加蒸餾水稀釋至刻度,搖勻，放置15 min。精密移取蒸餾水2.00 mL，同法配制25 mL混合溶液作為空白對照,在400～700 nm范圍內進行掃描,確定蘆丁顯色液的最大吸收波長為508 nm。

2.1.3 線性試驗 精密移取蘆丁對照品溶液1.00 mL、2.00 mL、3.00 mL、 4.00 mL、5.00 mL、6.00 mL,分別置于25 mL容量瓶中，按順序依次加入5%NaNO2溶液1 mL，搖勻,放置6 min,加10% AlCl3溶液1 mL搖勻,放置6 min,再加入4% NaOH溶液10 mL,并加蒸餾水稀釋至刻度,搖勻，放置15 min。

在波長為508 nm處進行檢測，然后以吸光度為縱坐標,濃度為橫坐標繪制標準曲線，最小二乘法直線回歸，得蘆丁回歸方程為:A=11.714·C+0.0503，A 為吸光度，C為質量濃度，r=0.9995，n=5。實驗表明蘆丁在9.17～55.0 μg/mL范圍內呈良好的線性關系。結果見表1。

表1 線性試驗結果

2.1.4 方法學考察

2.1.4.1 精密度試驗 取樣品1檀香藥材粉末0.1 g，按2.1.1項下方法制備樣品溶液。精密量取2.00 mL，其余同2.1.3項下操作,測定吸光度，重復測定6次，其吸光度的平均值為0.331，RSD=0.8%，說明該方法精密度良好。

2.1.4.2 穩定性試驗 將樣品1檀香藥液樣品依2.1.3項下方法顯色，分別于顯色后的0、15、30、45、60、75、90 min時測定吸光度，RSD=1.83%，結果表明樣品顯色后在90 min內穩定。

2.1.4.3 重復性試驗 平行取樣品1檀香藥材粉末1 g各6份，按2.1.1項下方法制備樣品溶液。精密量取2.00 mL，其余同2.1.3項下操作，測得其平均含量為5.55%，RSD=1.99%，表明該方法重復性良好。

2.1.4.4 樣品含量測定 取檀香藥材粉末0.1 g制備樣品溶液。精密移取2.00 mL，其余按2.1.3項下方法測定吸光度，代入回歸方程中，樣品中總黃酮的含量測定結果見表2，結果顯示拉薩檀香中的總黃酮含量較高，可進一步開發。

表2 樣品含量測定結果 (n=5)

2.1.4.5 回收率試驗 精密吸取蘆丁溶液(濃度為0.1 mg/mL)1.0 mL、 2.0 mL、3.0 mL各2份，置25 mL容量瓶中，分別加入已知含量的檀香藥液(已測得其總黃酮含量為0.1999 mg/mL)樣品溶液3.00 mL，其余按2.1.3項下進行測定，結果見表3，回收率為98.11%，RSD=1.03%，表明該方法科學合理。

回收率試驗計算公式：

總黃酮增加量/mg=(C-0.0240mg/mL)·25mL

表3 樣品的回收率試驗

3 討論

黃酮類化合物是一類廣泛存在于蔬菜、水果和中草藥中的化合物, 是植物的次級代謝產物。根據文獻報道，黃酮的提取方法有水煎煮法、醇提取法、微波提取法、超聲波法等。本實驗采用超聲提取法，以蘆丁標準品為對照，在波長為508 nm處進行檢測，然后以吸光度為縱坐標,濃度為橫坐標繪制標準曲線，在9.17～55.0 μg/mL范圍呈良好的線性關系，得蘆丁回歸方程為:A=11.714·C+0.0503，A為吸光度，C為質量濃度，R2=0.9995，n=5。本研究采用紫外分光光度法回對市售檀香心材中總黃酮含量進行測定，經考察，該方法精密度高，重復性好，回收率也符合定量分析要求，操作簡便，可作為檀香總黃酮含量測定的一種方法，可用于檀香的日常分析及質量控制。