MicroRNA-34a通過上調Cdc42和Rac1促進人晶狀體上皮細胞衰老和凋亡

蘭 文，陳志鈞，周 璐

目的：觀察MicroRNA-34a對人晶狀體上皮細胞系SRA01/04衰老和凋亡的影響及作用機制。

方法：qRT-PCR檢測年齡相關性白內障(ARC)晶狀體和透明晶狀體上皮細胞中MicroRNA-34a表達水平，采用脂質體轉染試劑盒將MicroRNA-34a mimics(過表達組)、MicroRNA-34a inhibitors(抑制組)和空脂質體(對照組)轉染至SRA01/04細胞，qRT-PCR檢測MicroRNA-34a的表達量；采用β-半乳糖苷酸(SA-β-gal)染色檢測轉染后細胞的衰老情況。Annexin V-FITC/PI雙染色流式細胞儀檢測MicroRNA-34a對人晶狀體細胞系SRA01/04細胞凋亡的影響；蛋白免疫印跡檢測Cdc42、Rac1蛋白的表達。

結果：透明晶狀體前囊膜組織中MicroRNA-34a的表達量顯著低于ARC晶狀體前囊膜組織(P<0.05)；MicroRNA-34a過表達組、對照組、MicroRNA-34a抑制組SA-β-gal陽性率分別為(87.56±2.34)%、(12.22±2.74)%、(3.45±0.45)%。MicroRNA-34a過表達組明顯高于對照組，而MicroRNA-34a抑制組SA-β-gal陽性率明顯低于對照組(P<0.05)；MicroRNA-34a抑制組、對照組和MicroRNA-34a過表達組的細胞凋亡率分別為(5.87±1.22)%、(12.26±2.14)%、(29.45±3.12)%，MicroRNA-34a抑制組細胞凋亡率明顯低于對照組，而MicroRNA-34a過表達組細胞凋亡率明顯高于對照組(P<0.05)；MicroRNA-34a過表達組中Cdc42和Rac1的表達明顯高于對照組(P<0.05)，MicroRNA-34a抑制組中Cdc42和Rac1的表達明顯低于對照組(P<0.05)。

結論：MicroRNA-34a可能通過上調Cdc42和Rac1促進人晶狀體上皮細胞衰老和凋亡。

0 引言

據統計，全球致盲性眼病中，因白內障致盲的患者占比約為50%。隨著世界人口增加，老齡化加劇，年齡相關性白內障(age-related cataract，ARC)發病人數逐年上升[1]。目前研究表明，細胞氧化應激是白內障產生的首要因素，病理學研究稱為晶狀體上皮細胞衰老凋亡[2-3]。微小RNA(MicroRNA)存在于真核生物中，是一類長約18～25個核苷酸的內源性單鏈非編碼RNA，能在轉錄水平與特定的靶基因3’非翻譯區完全或不完全互補配對，促使靶基因在mRNA水平發生降解?，F階段研究表明，MicroRNA作為重要的調節因子，參與多種人類疾病的發展[4]，在疾病的診斷和治療中發揮積極作用[5]。近年來MicroRNA在眼科疾病的研究已經開展，MicroRNA在哺乳動物眼部表達豐富且分布廣泛，高表達于角膜上皮細胞、睫狀體、晶狀體及視網膜色素上皮細胞。其中ARC中表達最多的是MicroRNA-34a。文獻報道稱Rho蛋白家族(Cdc42、Rac1等)作為Ras超家族……