非酒精性脂肪性肝病患者腸道微生態(tài)差異性及其與糖脂代謝相關(guān)指標(biāo)的關(guān)系

張娟 徐少勇 趙曉宏 黃雪 張根生 周慶元

非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)是一種與酒精性肝炎病理相似但無(wú)飲酒史的綜合征[1-2]。目前臨床上對(duì)NAFLD的發(fā)病機(jī)制不明確，但大量研究認(rèn)為在多種致病原因中，腸道內(nèi)細(xì)菌過(guò)度繁殖、移位、腸道通透性變化等所致的腸道疾病，是NAFLD發(fā)生、發(fā)展的重要因素[3]。有研究表明，NAFLD的發(fā)展與機(jī)體糖脂代謝異常相關(guān)，糖脂代謝異常可增加肝臟與血管疾病的并發(fā)癥和死亡率[4]。本研究探討NAFLD患者腸道內(nèi)微生態(tài)差異性與糖脂代謝指標(biāo)的關(guān)系。

資料與方法

一、研究對(duì)象

選擇2017年6月至2019年4月經(jīng)三二〇一醫(yī)院診治的NAFLD患者121例為觀察組，并選取同時(shí)間段100例正常體檢者為對(duì)照組。對(duì)照組男51例，女49例，年齡(66.35±5.34)歲；觀察組男60例，女61例，年齡(64.23±5.16)歲；兩組一般資料比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。將觀察組根據(jù)臨床分型分為單純性脂肪肝組(n=50)，NASH組(n=40)和肝硬化組(n=31)。單純性脂肪肝組男21例，女29例，年齡(65.91±4.23)歲；NASH組男17例，女23例，年齡(66.54±5.41)歲；肝硬化組男16例，女15例，年齡(66.32±5.51)歲。三組患者一般資料無(wú)顯著差異(P>0.05)。本研究所有患者及家屬簽署知情同意書(shū)，并獲得醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。納入標(biāo)準(zhǔn)：①診斷符合《非酒精性脂肪性肝病診療指南》標(biāo)準(zhǔn)[5]；②未合并顯著血管病變；③未合并甲狀腺疾病、心腦血管疾病；④無(wú)長(zhǎng)期飲酒史或乙醇量≤139 g/周。排除標(biāo)準(zhǔn)：①病毒性、藥物性肝炎；②近期服用微生態(tài)調(diào)節(jié)劑或(和)長(zhǎng)期服用激素類藥物；③合并惡性腫瘤；④合并其他糖脂代謝紊亂病癥，如糖尿病。

二、方法

收集所有研究對(duì)象年齡、性別等資料。采集全部研究者5 mL手肘處空腹清晨靜脈血，使用BECKMAN COULTER AU5800型全自動(dòng)生化分析儀測(cè)定血糖(FBG)、總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白(HDL-C)、低密度脂蛋白(LDL-C)，采用化學(xué)發(fā)光法，通過(guò)Autobio A2000 plus儀器檢測(cè)空腹胰島素(FINS)。采集所有研究對(duì)象新鮮糞便標(biāo)本2份，分別裝于無(wú)氧瓶和無(wú)菌瓶中。稱取0.5 g糞便置入4.5 mL滅菌注射用水(甘肅莫高實(shí)業(yè)發(fā)展股份有限公司，國(guó)藥準(zhǔn)字H62021265)中作為腸道菌群檢測(cè)。分別置于10-1、-3、-5、-7、-950 μL稀釋液于培養(yǎng)基上，選取腸桿、球菌、雙歧、乳酸桿菌，酵母樣真菌為腸道微生物培養(yǎng)代表。分別選擇相應(yīng)的培養(yǎng)基進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，包括蘭瓊脂平板、養(yǎng)血平板、沙氏培養(yǎng)基、血瓊脂平板、營(yíng)養(yǎng)瓊脂。酵母樣真菌放入25 ℃ SPM型孵箱(寧波江南儀器廠)中培養(yǎng)2～3 d，采用抽氣換氣法培養(yǎng)厭氧菌2 d，采用35 ℃孵箱培養(yǎng)需氧菌1 d。最后采用DW-M80型微生物鑒定系統(tǒng)(杭州大微生物技術(shù)有限公司)進(jìn)行細(xì)菌鑒別與細(xì)菌個(gè)數(shù)計(jì)量。上述實(shí)驗(yàn)耗材均購(gòu)于上海晶安生物科技有限公司，且全部實(shí)驗(yàn)嚴(yán)格按說(shuō)明書(shū)執(zhí)行。

三、統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

應(yīng)用SPSS 22.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件分析。使用t檢驗(yàn)對(duì)比組間計(jì)量資料，多組間資料使用單因素方差分析，兩兩指標(biāo)對(duì)比使用Snk-q檢驗(yàn)；使用卡方(χ2)檢驗(yàn)對(duì)比計(jì)數(shù)資料；分析腸道微生物與糖脂代謝相關(guān)指標(biāo)相關(guān)性采用Pearson相關(guān)系數(shù)。P<0.05示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié) 果

一、對(duì)照組與觀察組腸道菌群對(duì)比

觀察組乳酸、雙歧桿菌、酵母樣真菌個(gè)數(shù)低于對(duì)照組，且腸球菌、腸桿菌菌群個(gè)數(shù)高于對(duì)照組(P<0.05)，見(jiàn)表1。

二、對(duì)照組與觀察組糖脂代謝指標(biāo)對(duì)比

觀察組患者HDL-C水平低于對(duì)照組，且FBG、FINS、TC、TG、LDL-C水平高于對(duì)照組(P<0.05)。見(jiàn)表2。

三、NASH組、肝硬化組、單純脂肪肝組患者腸道微生物比較

NASH組、單純性脂肪肝組酵母樣真菌、腸球菌、腸桿菌個(gè)數(shù)低于肝硬化組，且雙歧、乳酸桿菌數(shù)量高于肝硬化組(P<0.05)；單純性脂肪肝組酵母樣真菌、腸球菌、腸桿菌個(gè)數(shù)低于NASH組，且雙歧、乳酸桿菌數(shù)量高于NASH組(P<0.05)。見(jiàn)表3。

四、NASH組、單純性脂肪肝組、肝硬化組患者糖脂代謝相關(guān)指標(biāo)比較

肝硬化組FBG、FINS、TG、LDL-C指標(biāo)高于NASH、單純性脂肪肝組，且NASH組、單純性脂肪肝組HDL-C、TC高于肝硬化組(P<0.05)；單純性脂肪肝組FBG、FINS、TG、LDL-C指標(biāo)低于NASH組，且HDL-C、TC高于NASH組(P<0.05)。見(jiàn)表4。

五、腸道微生物數(shù)量與糖脂代謝相關(guān)指標(biāo)相關(guān)性分析

糖脂代謝指標(biāo)與酵母樣真菌、腸球、桿菌呈正相關(guān)，與乳酸、雙岐桿菌呈負(fù)相關(guān)(P<0.05)。見(jiàn)表5。

表1 對(duì)照組與觀察組腸道菌群對(duì)比(個(gè)，±s)

表2 觀察組和對(duì)照組糖脂代謝相關(guān)指標(biāo)比較(±s)

表3 單純性脂肪肝組、NASH組、肝硬化組患者腸道微生物比較(個(gè)，±s)

注：與肝硬化組比較，aP<0.05；與NASH組比較，bP<0.05

表4 單純性脂肪肝組、NASH組、肝硬化組患者糖脂代謝相關(guān)指標(biāo)比較(±s)

表5 腸道微生物數(shù)量與糖脂代謝相關(guān)指標(biāo)相關(guān)性分析

討 論

有文獻(xiàn)報(bào)道，機(jī)體內(nèi)腸道微生物對(duì)脂肪具有調(diào)節(jié)平衡和沉積作用，腸道微生物在其機(jī)體內(nèi)發(fā)揮重要作用[6]。而NAFLD可通過(guò)腸-肝軸受腸道微生物影響。另有既往資料顯示，NAFLD患者多伴糖脂代謝水平改變，且患者體內(nèi)肝酶水平變化可能會(huì)影響糖脂代謝紊亂[7]。

有研究表明，正常機(jī)體可快速對(duì)葡萄糖進(jìn)行分解，但NAFLD患者對(duì)葡萄糖分解能力下降為正常機(jī)體的一半[8]。提示NAFLD可降低患者糖代謝能力，從而促進(jìn)該病發(fā)生。FBG在診斷糖代謝異常中具有重要作用。有研究指出，F(xiàn)BG水平易受肝功能、神經(jīng)因素、藥物、內(nèi)分泌激素等因素影響，對(duì)其進(jìn)行檢測(cè)結(jié)果最為可靠[9]。FINS可檢測(cè)人體血糖下降與蛋白質(zhì)、糖原、脂肪合成能力，若人體胰島組織受內(nèi)源或外源性物質(zhì)刺激時(shí)，能將分泌的蛋白質(zhì)激素置入機(jī)體血液中，發(fā)揮其作用。TG為脂質(zhì)組成成分，其主要來(lái)源于內(nèi)源或外源性物質(zhì)，正常機(jī)體血漿中TG維持著動(dòng)態(tài)平衡，當(dāng)機(jī)體TG動(dòng)態(tài)平衡遭受破壞時(shí)，易出現(xiàn)糖尿病、動(dòng)脈粥樣硬化等病癥[10]。TC為機(jī)體血液中所有脂蛋白內(nèi)含膽固醇之和，主要儲(chǔ)存和合成器官以肝臟為主，而檢測(cè)該項(xiàng)指標(biāo)主要反映血液中膽固醇含量高低。LDL-C主要是將膽固醇運(yùn)輸至肝外組織的運(yùn)載工具。當(dāng)機(jī)體轉(zhuǎn)化功能出現(xiàn)障礙及低密度脂蛋白受體出現(xiàn)降解，能使其LDL-C清除能下降，最終出現(xiàn)動(dòng)脈粥樣斑塊。研究結(jié)果提示，NAFLD患者存在嚴(yán)重的糖脂代謝紊亂，且病情越重相關(guān)指標(biāo)水平越高，與上表述結(jié)果相似。研究表明，人體內(nèi)LDL-C含量和心血管疾病相關(guān)，且呈正相關(guān)，當(dāng)LDL-C含量越高則病情越嚴(yán)重[11]。HDL-C為抵抗機(jī)體血管動(dòng)脈粥樣硬化的一種脂蛋白因子，能將肝外膽固醇輸入肝臟內(nèi)后行代謝運(yùn)動(dòng)。有研究指出，人體HDL-C高低與人體心血管發(fā)生病變相關(guān)，且體內(nèi)HDL-C量越低病情越重[12]。近年來(lái)，大量研究發(fā)現(xiàn)，腸道微生物在NAFLD的病情發(fā)展中發(fā)揮重要作用[13]。而腸道微生物由病毒、細(xì)菌、寄生蟲(chóng)、真菌等構(gòu)成。有文獻(xiàn)報(bào)道，腸道微生物構(gòu)成和種數(shù)與腸內(nèi)微環(huán)境、飲食、地理環(huán)境等因素有關(guān)，機(jī)體內(nèi)正常菌群參與機(jī)體消化吸收作用，且促進(jìn)脂肪分解[14]。本研究菌群中，腸桿菌為革蘭氏陰性菌，為條件致病菌，能對(duì)有機(jī)化合物、有機(jī)化酸、發(fā)酵糖等通過(guò)氧化反應(yīng)取得能量。腸球菌為革蘭氏陽(yáng)性菌，分布于人體消化道內(nèi)，為重要病原菌，可引起機(jī)體感染發(fā)生，出現(xiàn)一系列感染疾病，具有耐藥性，且治療困難。雙歧桿菌是革蘭氏陽(yáng)性菌，為有益微生物，儲(chǔ)存于胃腸道中，具有增強(qiáng)免疫力、改善胃腸道功能的作用。乳酸桿菌為革蘭氏陽(yáng)性菌，其被公認(rèn)為具有調(diào)節(jié)機(jī)體免疫功能與維護(hù)機(jī)體健康功能，具有降低膽固醇、增強(qiáng)機(jī)體免疫力、促進(jìn)消化作用[15]。酵母真菌為條件致病菌，易引起腸道感染。本研究結(jié)果提示，單純性脂肪肝病患者腸道微生物未顯著失去平衡，病情發(fā)展為NASH、肝硬化時(shí)，腸道內(nèi)菌群已明顯失去平衡，也說(shuō)明了NASH患者腸道微生物失衡與腸道內(nèi)致病菌過(guò)度生長(zhǎng)的情況，與上述結(jié)果一致。進(jìn)一步分析腸道微生物與糖脂代謝指標(biāo)相關(guān)性，發(fā)現(xiàn)糖脂代謝指標(biāo)與腸球菌、酵母真菌、腸桿菌相關(guān)，且呈正相關(guān)，與乳酸桿菌、雙岐桿菌呈負(fù)相關(guān)。說(shuō)明NAFLD患者與體內(nèi)腸道微生物與糖脂代謝具有一定相關(guān)性，且較高糖脂水平其病情越嚴(yán)重，而腸道微生物也可影響病情發(fā)展。