疏肝苦蕎茶的制備工藝及其含量測定的研究

孫芮芮，李明杰，李慧峰，裴妙榮

（山西中醫(yī)藥大學，山西 晉中030619）

疏肝苦蕎茶是由香櫞、佛手、苦蕎3 味藥食同源的藥材組成。香櫞是蕓香科植物枸櫞Citrus medicaL.的干燥成熟果實，含有甲基阿酸等16 種揮發(fā)油活性物質(zhì)［1］，具有疏肝理氣、寬中化痰的功效，用于肝胃氣滯，胸脅脹痛等［2］。佛手是蕓香科植物佛手Citrus medicaL.var.sarcodactylis Swingle的干燥果實，含有多糖、黃酮、香豆素、氨基酸和無機元素等豐富的化學成分，具有抗動脈硬化、抗菌、抗腫瘤等藥理作用［3-4］?？嗍w為雙子葉蓼科植物，別稱苦蕎麥Fagopyrum tataricum（L.）Gaertn，具有降血糖、降血脂及抗氧化的作用［5］。

香櫞、佛手、苦蕎三者組成的疏肝苦蕎茶是具有疏肝理氣作用的保健品，具有方便攜帶服用、便于保存的優(yōu)點。此茶劑為新品，尚未建立質(zhì)量標準，因此本實驗以提取工藝、成型工藝、含量測定3 個部分對疏肝苦蕎茶進行研究，以便對疏肝苦蕎茶的進一步開發(fā)與生產(chǎn)提供依據(jù)。

1 儀器與試藥

Waters 2695 高效液相色譜儀，Waters 2998 檢測器，Empower 色譜工作站（美國沃特世公司）；SB-5200 DTDN 超聲波清洗器（寧波新藝生物科技股份有限公司）；AB135- S 電子天平（十萬分之一，瑞士METTLER 公司）；HANGPING FA2104 型（萬分之一天平，上海精科）；GZX-9076 MBE 型電熱恒溫鼓風干燥箱（上海博訊實業(yè)有限公司醫(yī)療設備廠）。

蘆丁對照品（批號：5981，上海詩丹德標準技術服務有限公司）；香櫞（批號：20171011）、佛手（批號：20171114）均購自太原萬民大藥房，苦蕎（批號：20170516）購自山西省忻州市；甲醇（色譜純，歐普森天津市彪仕奇科技發(fā)展有限公司）；冰乙酸（色譜純，天津市光復科技發(fā)展有限公司）。甲醇（分析純，天津市進豐化工有限公司）。

2 方法與結(jié)果

2.1 提取工藝研究

2.1.1 單因素考察 本實驗采用水煎煮法提取香櫞、佛手飲片，分別考察以1∶6、1∶8、1∶10、1∶12 為實驗因素的料液比，0.5 h、1.0 h、1.5 h、2.0 h 為實驗因素的提取時間及1、2、3、4 次為實驗因素的提取次數(shù)對干膏得率的影響。隨著料液比的增高，香櫞和佛手出膏率先升高后基本不變，隨著提取時間的延長，香櫞和佛手出膏率先升高后降低，而隨著提取次數(shù)增多，藥材出膏率逐漸降低。結(jié)果見圖1、圖2、圖3。

圖1 料液比考察

圖2 提取時間考察

圖3 提取次數(shù)考察

2.1.2 正交實驗設計優(yōu)選最佳提取工藝 以單因素實驗考察結(jié)果為基礎、干膏得率為考察指標，選擇料液比（A）、提取時間（B，h）、提取次數(shù)（D，次）3 個對水提工藝影響較大的因素，每個因素設定3個水平。從單因素考察結(jié)果看，料液比1∶12 提取所得出膏率與料液比1∶10 相比變化不大，故正交實驗中選取料液比分別為1∶6、1∶8、1∶10 3 個水平，提取時間為2 h 提取所得出膏率降低，所以正交實驗中選取提取時間分別為0.5 h、1.0 h、1.5 h 3個水平。對于提取次數(shù)的單因素考察，由于隨著提取次數(shù)的增多，出膏率逐漸降低，故正交試驗中選取提取次數(shù)分別為1、2、3 次3 個水平。采用L9（34）正交表安排正交實驗，正交因素水平表見表1，正交試驗結(jié)果見表2、表3。實驗所得最佳提取水平組合為A2B1D3，從數(shù)據(jù)分析得到的最佳提取水平組合為A2B3D3。因此對實驗結(jié)果的影響因素次序為D>A>B，其中D 因素對出膏率有顯著影響，所以提取次數(shù)是影響干膏得率的主要因素。

表1 正交試驗因素水平表

2.1.3 驗證實驗 對2.1.2 項下所得實驗最佳提取水平組合A2B1D3及實驗數(shù)據(jù)分析所得最佳提取水平組合A2B3D3進行進一步驗證試驗，結(jié)果見表4。最佳提取工藝為A2B3D3，即料液比為1∶8，提取時間為1.5 h，提取次數(shù)3 次為最佳水提工藝。此工藝穩(wěn)定可靠，合理可行。

2.2 成型工藝研究

取藥材（香櫞50 g 和佛手50 g），以2.1.3 項下最優(yōu)提取工藝進行提取，過濾，得濾液，加熱濃縮至80 mL。將苦蕎進行膨化，取80 g 平均分為4份，每份20 g，按照1∶0.5，1∶1，1∶1.5，1∶2 與濃縮好的藥液混合，放入烘箱中60 ℃烘干。根據(jù)其色澤、口感判斷其最佳吸附比。結(jié)果見表5，不同吸附比所得樣品圖如圖4。

表2 正交實驗設計與結(jié)果

表3 方差分析

表4 驗證實驗結(jié)果

表5 不同吸附比的苦蕎茶性狀

2.3 含量測定研究

2.3.1 色譜條件 色譜柱：Diamonsil C18（4.6 mm ×200 mm，5 μm）；流動相：甲醇-0.5%冰乙酸（34∶66）；檢測波長：256 nm；柱溫為30 ℃；流速：1.0 mL/min；進樣量：10 μL［5-7］。

圖4 不同吸附比所得苦蕎茶

2.3.2 溶液的制備

2.3.2.1 對照品溶液的制備 將精密稱定的0.001 g蘆丁標準品置于10 mL 容量瓶中，加甲醇溶解后，定容至刻度，搖勻即得。所得蘆丁對照品的濃度為0.000 106 g/mL。

2.3.2.2 供試品溶液的制備 取苦蕎茶成品粉末1 g，精密稱取，置于錐形瓶中，加甲醇25 mL，超聲30 min，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.3.2.3 陰性對照溶液的制備 苦蕎陰性對照。將香櫞和佛手（1∶1）藥材制得的干膏研成粉末，精密稱取1 g 于錐形瓶中，制備方法如供試品溶液的制備。香櫞陰性對照。將佛手煎煮一定時間，取其濾液，制成干膏研成粉末，與膨化的苦蕎粉末按1∶1 混合，精密稱取1 g 于錐形瓶中，制備方法如供試品溶液的制備，所得香櫞陰性對照品的濃度為0.039 9 g/mL。佛手陰性對照，將香櫞煎煮一定時間，取其濾液，制成干膏研成粉末，與膨化的苦蕎粉末按1∶1 混合，精密稱取1 g 于錐形瓶中，制備方法如供試品溶液的制備，所得佛手陰性對照品的濃度為0.042 8 g/mL。

2.3.3 系統(tǒng)適應性試驗 將對照品溶液與供試品溶液分別精密吸取各10 μL，注入液相色譜儀，測定蘆丁含量。在256 nm 波長下檢測得到的各溶液色譜圖見圖5～圖8。

2.3.4 方法學考察

圖8 苦蕎陰性色譜圖

2.3.4.1 線性關系考察 取“2.3.2 項下”的蘆丁對照品溶液，分別精密吸取1.0 mL、2.0 mL、3.0 mL、4.0 mL、5.0 mL 至5 mL 容量瓶中加甲醇稀釋且定容到容量瓶刻度，橫坐標為對照品的進樣量（ng），縱坐標為峰面積的積分值，以峰面積Y對進樣量X（ng）進行線性回歸，回歸方程為Y=3709X-86 274，r=0.999 934。

2.3.4.2 精密度考察 取“2.3.2 項下”的蘆丁對照品溶液精密吸取10 μL，連續(xù)進樣6 次，照建立的色譜條件檢測，測定峰面積積分值，計算RSD值。蘆丁峰面積的RSD=1.07%，說明該儀器的精密度良好。

2.3.4.3 穩(wěn)定性試驗 取“2.3.2 項下”的供試品溶液，將同一供試品溶液精密吸取10 μL，分別于0 h、2 h、4 h、6 h、8 h、10 h 進樣，照建立的色譜條件檢測，記錄峰面積積分值，計算RSD值，蘆丁峰面積的RSD為1.16%，說明該供試品溶液在10 h 以內(nèi)穩(wěn)定。

2.3.4.4 重復性試驗 照“2.3.2 項下”的供試品溶液制備方法，取同一批供試品溶液6 份，每份分別進樣10 μL，照建立的色譜條件檢測，測定峰面積積分值并計算含量，計算RSD值。蘆丁的RSD=1.61%，說明重復性良好。

2.3.5 樣品的測定 照“2.3.2 項下”的供試品溶液制備方法，取兩批疏肝苦蕎茶，制備供試品溶液，照建立的色譜條件檢測，兩批樣品的含量測定結(jié)果見表6。

表6 樣品含量測定結(jié)果

3 討 論

由于疏肝苦蕎茶為茶劑，因此本實驗以水煎煮法提取，并且以單因素考察為基礎，對香櫞和佛手的提取工藝進行正交實驗，優(yōu)選出的工藝得到最大的出膏率，干膏得率為58.83%。同時本實驗考察了膨化苦蕎對香櫞和佛手藥液的吸附性，優(yōu)選的吸附工藝為苦蕎與提取液的比例為1∶0.5，在此條件下制得的茶劑成品，苦蕎與提取液吸附完全，混合均勻，藥料松散，色澤明顯，茶味清香，口感怡人。此成型工藝穩(wěn)定可行。 以蘆丁為檢測指標，建立的疏肝苦蕎茶的含量測定方法，簡單、準確、靈敏、重復性好。