環氧化酶2及癌胚抗原在結腸癌分子病理研究中的作用探討

李銀珍 杜日昌 丁宇 徐彤 廖羅飛

【摘要】 目的：探究COX-2及CEA在結腸癌分子病理研究中的作用。方法：以筆者所在醫院于2016年2月-2018年2月收治的60例因患結腸癌而接受手術的患者的組織標本作為研究對象，取患者的新鮮結腸癌組織，包括近、遠端癌旁1、2、3 cm的腸壁組織及距腫瘤8 cm處的正常腸壁組織，使用RT-PCR技術檢測CEA、COX-2在以上組織中的表達情況，探討COX-2及CEA在結腸癌分子病理中的作用。結果：腫瘤組織、不同距離腫瘤切緣組織CEA mRNA、COX-2 mRNA 的陽性率隨著遠離腫瘤而降低。近、遠端3 cm的腸壁組織CEA mRNA、COX-2的陽性率與正常腸壁組織差異無統計學意義（P>0.05）。結論：COX-2、CEA可能參與了結腸癌的發生、發展及浸潤過程，臨床應在術后進行COX-2、CEA檢測，這有助于醫生通過腫瘤的生物學特征做出正確的臨床判斷。

【關鍵詞】 癌胚抗原 環氧化酶2 結腸癌 病理

doi：10.14033/j.cnki.cfmr.2020.03.029 文獻標識碼 B 文章編號 1674-6805（2020）03-00-03

[Abstract] Objective： To investigate the role of cyclooxygenase-2 （COX-2） and carcinoembryonic antigen （CEA） in the molecular pathology of colon cancer. Method： The tissue specimens of 60 patients with radical resection of colon cancer treated in our hospital from February 2016 to February 2018 were collected. Fresh colon cancer tissues， distal and proximal adjacent 1， 2 cm and 3 cm intestinal wall tissues and 8 cm normal intestinal wall tissues were collected. The expression of CEA and COX-2 in the above tissues was detected by RT-PCR， and COX-2 was discussed. The role of CEA in molecular pathology of colon cancer. Result： The positive rates of CEA and COX-2 in tumor tissues， incision margin tissues and distant intestinal wall tissues decreased with the distance from the tumor. There was no significant difference between the positive rates of CEA and COX-2 in proximal and distal intestinal wall tissues and that in normal intestinal wall tissues （P<0.05）. Conclusion： COX-2 and CEA may be involved in the occurrence， development and infiltration of colon cancer. Detection of COX-2 and CEA should be performed in clinic after operation， which is helpful for clinicians to make correct judgement on the biological characteristics of colon cancer.

[Key words] Carcinoembryonic antigen Cyclooxygenase 2 Colon cancer Pathology

First-authors address： Yuebei Peoples Hospital， Shaoguan 512025， China

近幾年，結腸癌的發病率逐年升高，已經對人們的健康造成重大的威脅[1]。對于結腸癌，臨床的常規治療方式是手術切除，但手術切除創傷面較大，且術后的復發率較高，因此臨床效果并不理想。目前臨床對該疾病的病因尚未明確，有觀點認為是由慢性潰瘍引起的癌變[2]。目前，臨床將組織病理學視為判斷惡性腫瘤的金標準，但存在陽性表達率較低問題，隨著分子生物技術的快速發展，臨床迫切需要對腫瘤浸潤通過分子的角度進行分析和研究，但迄今為止，針對結腸癌分子邊緣的相關研究尚無定論[3-4]。本研究對腫瘤組織、不同距離腫瘤切緣組織環氧化酶2（COX-2）及癌胚抗原（CEA）進行檢測，報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

本次研究所選取的研究對象為筆者所在醫院于2016年2月-2018年2月所收治的60例因結腸癌至筆者所在醫院治療行的根治術患者的組織標本，納入標準：（1）資料齊全者;（2）無其他臟器系統病變者;（3）經病理學和手術檢查確診為結腸癌。排除標準：（1）術前經過其他輔助治療者;（2）患者轉院、退出研究、不愿參與本次研究或依從性不佳者。入選患者中男37例，女23例;年齡47～58歲，平均（52.34±5.36）歲，組織病理學：高分化22例，中分化23例，低分化15例，TNM分期：Ⅰ期13例，Ⅱ期17例，Ⅲ期22例，Ⅳ期8例。

1.2 方法

1.2.1 標本制備 結腸癌手術標本，腸管切開，中性福爾馬林充分固定24 h，分別取腫瘤組織、近端1、2、3 cm處的組織以及遠端1、2、3 cm處的組織，以及距腫瘤8 cm處的正常腸壁組織，共8處作為標本，經常規脫水、包埋，制成石蠟組織保存。

1.2.2 組織總RNA提取 使用QIAGEM公司FFPE RNA提取試劑盒提取RNA，紫外分光光度計檢測RNA的濃度和純度。

1.2.3 cDNA逆轉錄 使用Promega公司逆轉錄酶進行逆轉錄：取2 μl RNA樣品在70 ℃保溫10 min，隨后加入25 mmol/L MgCl2，4 μl;10X逆轉錄酶2 μl;10 mmol/L dNTP 2 μl，RNA酶抑制劑0.5 μl，Oligo（dT）2 μl;AMV逆轉錄酶15 U，補加DEPC水至總體積20 μl;42 ℃保溫15 min，逆轉錄反應，合成cDNA第一鏈。反應后，99 ℃ 5 min滅活逆轉錄酶。

1.2.4 實時熒光定量PCR 相對定量的內參基因是管家基因（β-actin），各基因的引物和探針序列如下：β-actin：上游5-TGAGCGCGGCTACAGCTT-3，下游5-TCCTTAATGTCACGCACGATTT-3，探針5-ACC ACCACGGCCGAGCGG-3;CEA：上游5-GAAAGAGCAGGCAGCAGAGA-3，下游5-TAGTGAGCTTGGCAGTGGTG-3，探針5-CACAGAGAATGCATCC-3;COX-2：上游5-GTTCCACCCGCAGTACAGAA-3，下游5-AGGGCTTCAGCATAAAGCGT-3，探針5-TTCCATTGACCAGAGCA-3。

1.3 統計學處理

將實時熒光定量PCR所得數據用2-△△CT法處理，△△CT=試驗組（CT目標基因-CT內參基因）-對照組（CT目標基因-CT內參基因），對照組為正常腸壁組織，目標基因為CEA、COX2，內參基因為β-actin，得出不同部位組織中CEA、COX2相對于β-actin的表達量，以1為界，大于1的為高表達，小于1的為低表達，再進行統計學分析。

采用SPSS 20.0統計軟件對研究數據進行分析，計量資料以（x±s）表示，采用t檢驗，計數資料以率（%）表示，采用字2檢驗，P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

腫瘤組織、正常腸組織、不同距離腫瘤切緣組織CEA mRNA、COX-2 mRNA的表達情況如表1所示。隨著離腫瘤距離的增加，CEA mRNA、COX-2 mRNA高表達的陽性率下降，表達水平均值降低。近端切緣1、2cm、遠端切緣1、2cm處CEA mRNA、COX-2 mRNA的表達水平與腫瘤組織相比，差異無統計學意義（P>0.05）。近端切緣3 cm、遠端切緣3 cm處CEA mRNA、COX-2 mRNA的表達水平與腫瘤組織相比，差異有統計學意義（P<0.05），近端切緣3 cm、遠端3 cm的腸壁組織CEA mRNA、COX-2的陽性率與正常腸壁組織差異無統計學意義P>0.05。表明近端切緣3 cm、遠端切緣3 cm處的CEA mRNA、COX-2 mRNA的表達水平明顯低于腫瘤組織，與正常腸壁組織接近。

3 討論

結腸對人有重要的作用，如果罹患結腸癌，會影響患者的消化系統，對正常的學習和工作造成極大的影響，因此應盡早治療。根據相關文獻顯示，結腸癌是一種較為復雜、發病部位位于結腸黏膜上的消化道疾病，結腸癌會隨著病情的發展，出現多種的并發癥，而手術治療是目前應用最廣泛、療效最為可靠的治療方式[5-7]。

自1999年國內學者通過檢測食管癌手術切緣組織而提出“分子切緣”概念后，臨床長期從分子水平進行手術切緣的研究，而國內外關于CEA和COX-2與結腸癌分子邊緣的關系的研究較少[8-10]。研究發現，CEA在結腸癌中的陽性表達率達到90%以上，而COX-2在結腸癌組織中的表達率也高于80%[11-12]。本研究中，CEA高表達陽性率達95.00%，COX-2高表達陽性率為71.67%，這與研究結果存在偏差，可能與研究例數較少有關。正常結腸組織中兩指標的陽性率分別為16.67%（10/60）和21.67%（13/60），本研究發現，距離腫瘤近、遠端3 cm的腸壁組織CEA mRNA、COX-2的陽性率與正常腸壁組織無顯著差異（P<0.05），分別為13.33%、13.33%、20.00%、23.33%，提示遠、近端距腫瘤3 cm處可能為正常腸壁組織。在遠、近端1、2 cm癌旁組織及結腸癌組織中的CEA mRNA和COX-2 mRNA表達顯著較高，這與在其他上皮性腫瘤中觀察到的，CEA和C0X-2表達從正常組織到癌前病變到癌呈進行性升高相一致。而這一結果也提示，距離越近表達越接近腫瘤組織，提示CEA和COX-2可能參與了結腸癌的發生、發展及浸潤過程，這與在其他上皮性腫瘤中觀察到的CEA和COX-2表達變化相一致。

綜上所述，COX-2、CEA可能參與了結腸癌的發生、發展及浸潤過程，可作為結腸癌分子邊緣研究的分子標志物。

參考文獻

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（收稿日期：2019-10-10） （本文編輯：張亮亮）