昆蟲病原線蟲對蠐螬致病力的測定

康俊英

摘要 選用2種昆蟲病原線蟲的4個品系[斯氏線蟲Steinernema krussei（0657L，0622L），S.affine（0664YM）;異小桿線蟲Heterorhabditis megidis（0627M）]測定蠐螬老熟幼蟲的致病力。結果表明：線蟲的侵染劑量為60條/頭時，0627M品系對蠐螬的致死率為34.4%，與0664YM品系差異顯著（P<0.05）;0657L品系對蠐螬的侵染能力最差，侵染96 h后，致病力僅為5.7%。從總體看，0627M品系對蠐螬的致死率高于0664YM品系，而且致死作用持續(xù)時間長。說明0627M品系對蠐螬的致死作用優(yōu)于其他三個品系。

關鍵詞 昆蟲病原線蟲;蠐螬老熟幼蟲;致病力;生物防治

中圖分類號：Q959.17 文獻標識碼：A 文章編號：2095–3305（2020）08–0–02

Abstract Four strains of two entomopathogenic nematodes [Steinernema krussei （0657L， 0622L）， S.affine （0664YM） and Heterorhabditis megidis （0627M）] were used to determine the pathogenicity of mature grubs. The results showed that the fatality rate of 0627M strain against white grub was 34.4% when the nematode infection dose was 60 strains/head， which was significantly different from that of 0664YM strain （P<0.05）. The strain 0657L had the worst infection ability against white grubs， and the pathogenicity was only 5.7% after 96 h of infection. In general， the fatality rate of 0627M strain to white grubs was higher than that of 0664YM strain， and the lethal effect lasted for a long time. The results indicated that 0627M strain had better lethal effect on white grubs than the other three strains.

Key words Entomopathogenic nematodes; Old grub larvae; Pathogenicity; Biological control

DOI：10.19383/j.cnki.nyzhyj.2020.08.007

研究了甘肅省4個優(yōu)良品系線蟲對蠐螬的致病力，篩選出對蠐螬侵染效果佳、致病力較高的線蟲品系，以期為后期田間實際應用提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 供試蟲

蠐螬老熟幼蟲，5月中下旬在縣內(nèi)直接挖取，用于室內(nèi)防效生測。

線蟲擴繁寄主昆蟲：大蠟螟幼蟲由農(nóng)技中心植保實驗室提供。

供試線蟲：斯氏線蟲（0657 L，0622 L），（0664 YM）;異小桿線蟲（0627 M）品系由農(nóng)技中心植保實驗室提供。

1.2 試驗線蟲的制備與計量

用大蠟螟活體繁殖線蟲，得到線蟲稀釋液，用移液槍取1 ul滴于載玻片上，鏡檢解剖鏡視野內(nèi)線蟲數(shù)，計算線蟲數(shù)量。

1.3 試驗所用儀器設備

智能冰箱、解剖鏡、微量移液槍、電熱恒溫培養(yǎng)箱、直徑90 mm培養(yǎng)皿、濾紙、小噴壺等。

1.4 數(shù)據(jù)分析

所有數(shù)據(jù)均采用SPSS軟件分析。

1.5 昆蟲病原線蟲不同品系對蠐螬致病力的測定

1.5.1 生測適宜線蟲數(shù)量的篩選 為了濾紙保持濕潤，在培養(yǎng)皿中墊兩層濾紙，加入適量的無菌水。將蠐螬老熟幼蟲放在培養(yǎng)皿中，每皿1頭。4個品系線蟲為4個不同的處理。每個處理設3組重復，每組10頭幼蟲，以不加線蟲的無菌水為對照。線蟲數(shù)量分為5個梯度，即5條/頭、10條/頭、20條/頭、40條/頭、60條/頭，將不同品系線蟲用移液槍滴加到蠐螬體上，放在25℃、相對濕度為80%的人工氣候箱中培養(yǎng)，經(jīng)常用小噴壺噴水使濾紙保持濕潤，每隔24 h檢查、記錄線蟲的寄生情況、害蟲的發(fā)病及死亡時間，并觀察死蟲形態(tài)、色澤或其他變化特征，統(tǒng)計害蟲死亡率等[1-4]。

1.5.2 不同線蟲品系對蠐螬的致病力 在溫度達到25℃、相對濕度在80%的人工氣候箱內(nèi)進行。培養(yǎng)皿中墊兩層濾紙，加入適量的無菌水，使濾紙保持濕潤。將蠐螬老熟幼蟲放培養(yǎng)皿中，每皿1頭，按生測實驗篩選的數(shù)量，將4個不同品系的線蟲用微量移液槍滴加到蠐螬體上。4個品系線蟲為4個不同的處理，同時以滴加等量無菌水作為對照，每組10頭幼蟲，重復3次。每隔24 h檢查蠐螬的死亡情況，并做記錄，比較各個品系線蟲對蠐螬的侵染效果。

2 結果與分析

2.1 線蟲的侵染過程及蠐螬的死亡癥狀

接種線蟲后，蟲體表面有線蟲不停地蠕動，特別是口腔、尾部、節(jié)間膜及身體凹陷處聚集較多，而且活動劇烈。過段時間鏡檢，這些部位的線蟲數(shù)量明顯減少[5-6]。線蟲從寄主的口腔、節(jié)間膜、肛門等部位以身體前段垂直于寄主體表、尾部不停左右擺動慢慢進入蟲體。對死亡的蠐螬老熟幼蟲進行解剖后，發(fā)現(xiàn)有大量活躍的小線蟲在蟲體內(nèi)（圖1）。

蠐螬被侵染后早期活動較活躍，侵染中期活動緩慢，后期爬行無力，蟲體慢慢變軟，48 h后相繼死亡。體色發(fā)生變化，由乳白色變?yōu)辄S褐色，最后呈現(xiàn)黑褐色（圖2），蟲體失水后萎縮干癟。死亡3 d后，通過解剖鏡觀察，發(fā)現(xiàn)蟲體內(nèi)線蟲清晰可見，有大量的線蟲從寄主的口腔、氣門、肛門、節(jié)間膜等部位爬出。

2.2 生測侵染線蟲的數(shù)量

線蟲對蠐螬室內(nèi)生測適宜濃度的篩選，主要采用一對一的方法，即用1條線蟲侵染1頭昆蟲，這能最真實地反映昆蟲病原線蟲對供試害蟲的致病力，但昆蟲病原線蟲進入寄主的血腔后，會遇到昆蟲防御系統(tǒng)的抵抗，因此，1條線蟲對供試害蟲幾乎不產(chǎn)生致病力，故需測定最適濃度，使蠐螬的死亡率達到最高，同時昆蟲病原線蟲劑量達到最小值。

結果表明：劑量為1頭侵染60條時，4個不同品系線蟲侵染供試害蟲的死亡率分別為50%、10%、20%、30%，與另外4個濃度對照差異顯著。當侵染劑量為60條/頭時，4個品系線蟲對蠐螬老熟幼蟲均表現(xiàn)出一定的致病力，因此60條/頭為線蟲室內(nèi)生測最佳劑量。

2.3 昆蟲病原線蟲對蠐螬致病力的測定

試驗結果表明：侵染劑量為60條/頭時，4個品系線蟲對蠐螬均有不同程度的侵染力，但效果差異顯著，致死速度也不同。0664YM品系則在96 h后不再死亡;而0627M品系致死時間一直持續(xù)到120 h，比前者致死時間延長24 h。由死亡高峰看，2個品系線蟲基本相同，0627M、0664YM品系在侵染48 h后蠐螬就出現(xiàn)死亡，0627M品系對蠐螬的致死率為34.4%，與0664YM品系差異顯著（P<0.05）。0657L品系對蠐螬的侵染能力最差，侵染96 h后，致病力僅為5.7%。從總體看，0627M品系對蠐螬的致死率高于0664YM品系，而且致死作用持續(xù)時間長。說明0627M品系對蠐螬的致死作用優(yōu)于其他3個品系[7-8]。

3 小結

研究表明，4種不同品系線蟲對蠐螬均有不同程度的侵染力，但效果差異顯著，致死速度也不同。其中，異小桿線蟲0627M和斯氏線蟲0664YM致病力較高，感染48 h后蠐螬死亡率分別為34.4%和15.6%，且平均死亡率顯著高于其他品系。說明0627M和0664YM是蠐螬的敏感品系。而0664YM品系線蟲在96 h后不再死亡;品系線蟲0627M死亡一直持續(xù)到120 h，即前者致死時間延長了24 h。以死亡高峰看，2種線蟲品系基本相同，0627M、0664YM在侵染48 h后蠐螬老熟幼蟲就出現(xiàn)死亡，0627M對蠐螬的致死率達到34.4%，與0664YM差異達顯著水平（P<0.05）。從總體看，0627M品系對線蟲致死率高于0664 YM，而且死亡持續(xù)期長，在蠐螬體內(nèi)發(fā)育快，致病力強。

研究表明，4種不同品系昆蟲病原線蟲對蠐螬致病力有所不同，可能是由于不同線蟲的生物學特性不同，其找尋寄主的能力、侵入速度存在差異，同一種寄主對不同線蟲的敏感性也不同。病原線蟲不同種或品系對同一種害蟲的侵染力、致病力存在很大差異，同一種或同一品系病原線蟲對不同寄主的侵染力、致病力存在顯著差異，所以篩選出致病力強的病原線蟲是能否用病原線蟲有效控制害蟲的關鍵。本試驗在培養(yǎng)皿中進行，線蟲和蠐螬很接近，所以線蟲搜尋寄主的能力對線蟲致病力影響可能不大。

參考文獻

[1] 李俊秀，孫春梅，康宇靜，等.昆蟲病原線蟲對花生田蠐螬的防治效果[J].農(nóng)藥，2007（1）：62–63.

[2] 謝欽銘，張選輝.昆蟲病原線蟲在害蟲防治中應用的研究進展[J].江西科學，2012，20（4）：227–229.

[3] 高志華，楊小龍，劉敬澤，等.昆蟲病原線蟲斯氏線蟲和異小桿線蟲對長角血蜱雌蜱的致病力[J].昆蟲學報，2004，47（1）：20–24.

[4] 賈春生.昆蟲病原線蟲及其在害蟲防治中的應用[J].北華大學學報（自然科學版），2001，2（5）：424–426.

[5] 李曉巍，梅樹林，武鴻燕，等.昆蟲病原線蟲防治甜菜地蠐螬的初步研究[J].植物保護，1995，21（4）：14–16.

[6] 錢秀娟，劉長仲，阮艷娥.昆蟲病原線蟲對甘肅省草地蠐螬的致病力研究[J].草地學報，2015（2）：196–203.

[7] 劉樹森.昆蟲病原線蟲的篩選鑒定及其對蠐螬的致病性研究[D].北京：中國農(nóng)業(yè)科學院，2009.

[8] 李而濤，李克斌，張帥，等.有效防治蠐螬的昆蟲病原線蟲鑒定及其生物學特性[J].植物保護學報，2020（5）：162–175.

責任編輯：黃艷飛