不同中西藥物對急性軟組織損傷的治療作用研究

黃景慧，袁海龍，王夢真

空軍特色醫學中心藥學部，北京 100142

急性軟組織損傷是臨床骨科一種常見病、多發病。損傷造成局部組織紅腫、疼痛、毛細血管破裂，使患者行動能力受限，嚴重影響生活質量[1]。中重度疼痛的急性軟組織損傷，經醫師批準可使用阿片受體激動劑。雖然阿片受體激動劑具有快速鎮痛作用，但不能緩解損傷造成的水腫、炎癥、外周組織出血，也不能縮短創傷恢復時間[2]。因此，尋找針對急性軟組織損傷具有快速治療作用的藥物具有重要意義。本研究在大鼠急性軟組織損傷模型上評價一系列中西藥物的抗炎鎮痛作用，旨在篩選發現對急性損傷癥狀具有快速抗炎鎮痛作用的潛在藥物組合，為針對急性軟組織損傷具有良好治療作用藥物的研發及臨床應用提供了藥理學參考。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

1.1.1 藥物、試劑 阿司匹林腸溶片(Bayer HealthCare Manufacturing S.r.l.國藥準字J20171021批號BJ45966)雙氯芬酸鈉緩釋片(北京諾華制藥有限公司國藥準字H10980297批號X0747)塞來昔布膠囊(輝瑞制藥有限公司，國藥準字J20140072，批號x43537)氨酚羥考酮片(SpecGx LLC USA，國藥準字J20171086，批號0512B02730)云南白藥貼(云南白藥集團股份有限公司，國藥準字Z53020756，批號ZEB1932)活血止痛貼(安徽安科余良卿藥業有限公司，國藥準字Z34020905，批號20190660)奇正消痛貼(西藏奇正藏藥股份有限公司，國藥準字Z54020113，批號1905071)

1.1.2 動物 雄性SD大鼠，體重(180±25)g，由解放軍302醫院實驗動物中心提供。

1.1.3 儀器 自制動物挫傷模型臺、熱板實驗臺、測量尺、游標、卡尺、顯微鏡等由解放軍302醫院實驗動物中心提供。

1.2 試驗方法

1.2.1 大鼠急性軟組織損傷模型的建立 將大鼠于實驗前脫去右后小腿部毛，將大鼠固定于軟組織打擊器上，選擇小腿中部外側軟組織做好標記，0.2kg砝碼自20cm的高度自由落下，直接打擊大白鼠右下肢脫毛部位，連續同上操作5次，大鼠經打擊后傷肢迅速出現腫脹、皮膚淤斑及皮下出血現象，表明急性損傷模型造模成功[3,4]。

1.2.2 藥物對大鼠急性軟組織損傷模型鎮痛療效研究 西藥組隨機分為5組，每組10只大鼠。根據臨床人用劑量換算給藥劑量分別為：塞來昔布組(Cel)21mg/kg，氨酚羥考酮組(Oxy)138mg/kg，雙氯芬酸組(Dic)7.8mg/kg，阿司匹林組(Asp)6.25mg/kg，溶媒組(Veh)給予2mL生理鹽水。在造模后每天灌胃給藥一次。中藥貼劑組隨機分為4組，分別為云南白藥貼組(Yunnan)，活血止痛貼組(Huoxue)及奇正消痛貼(Qizheng)組，貼劑均為2.5cm×2.5cm，溶媒組(Veh)給予同等面積膠布，每組10只大鼠，在造模后每天更換貼劑一次。

每日觀察損傷處的紅腫、瘀血情況，根據軟組織損傷的評分標準(損傷癥侯指數)進行評分。具體評分標準為：①有輕微紅腫，但無瘀斑及行為障礙，0～1分；②有輕微紅腫和瘀斑，但無行為障礙，1.1～2分；③有輕微紅腫和瘀斑，以及輕微的行為障礙(能行走，不影響行動)，2.1～3分；④有明顯紅腫和瘀斑，行為障礙，3.1～4分；⑤嚴重的紅腫和瘀斑，完全不能自發行走，4.1～5分[4,5]。

1.1.3 藥物對大鼠急性軟組織損傷模型鎮痛作用研究 將急性軟組織損傷模型大鼠置于溫度為(52±0.2)℃的熱板上，環境溫度23℃～25℃，開始計時，直至出現疼痛反應(跳躍，舔后足)為止，累計時間即為痛閾值。給藥前測定動物基礎痛閾，選擇基礎痛閾在5～20s范圍內的大鼠用于實驗。每日在灌胃后每30min測定痛閾，比較前后大鼠痛閾值的改變。測時如大鼠60s無反應，應立即將其足離開熱板避免燙傷，其痛閾以60s計算。按下列公式計算給藥后最大鎮痛百分率(maximum possible effect,MPE%)。在實驗過程中為防止動物組織損傷，60s不出現疼痛反應則中止測定，記為鎮痛100%。MPE%=(給藥后痛閾值-給藥前痛閾值)/(60 s-給藥前痛閾值)×100%[6]。

2 結果

2.1 藥物對大鼠急性軟組織損傷恢復的影響Veh組大鼠24h內損傷癥侯指數達到最高，之后逐漸降低至第7d恢復正常。Cel、Oxy及Dic組與Veh組比較損傷評分均顯著降低(P＜0.001)，而Asp組與Veh組無顯著性差異(P＞0.05)；Cel組組織損傷恢復最快，與Oxy、Dic、Asp組均有顯著差異(P＜0.001)(圖1)。

圖1 西藥組不同時間點損傷癥狀指數的變化。

圖2 中藥組不同時間點損傷癥狀指數的變化。

圖3 西藥組不同時間點MPE%的變化。

中藥貼劑Yunnan組只在第2、3天與Veh組有顯著差異(P＜0.05)，Qizheng組從造模后第1～6天均與Veh組相比，可明顯改善損傷組織紅腫狀態，降低損傷評分(P＜0.001)(圖2)。從絕對值上看，Qizheng組急性損傷組織恢復速度最快。

西藥Cel組與中藥貼劑Qizheng組比較，治療第1～5天，Cel組的損傷評分顯著低于Qizheng組(P＜0.05)，從第6天起兩組無顯著性差異(P＞0.05)。

2.2 藥物對大鼠急性軟組織損傷所致疼痛的影響Veh組小鼠痛閾值在給藥后30～300min無顯著性改變，Oxy組大鼠在給藥30min后痛閾值顯著升高(P＜0.001)，在150min藥效達峰值，之后藥效逐漸下降；Cel及Asp組給藥后60min痛閾值均明顯升高，Cel組給藥后150min藥效下降，Asp組給藥后240min藥效下降，Dic組大鼠在給藥后90min痛閾值明顯升高，180min后藥效下降(P＜0.001)(圖3)。

3 討論

急性軟組織損傷的機制為毛細血管破裂、出血，引發炎性反應，組織胺、5-羥色胺等炎性因子使微血管先收縮，后擴張充血，通透性增加，血管內的水、蛋白等物質從血管內滲入組織間隙，臨床表現為局部疼痛、壓痛、腫脹、青紫瘀斑、肢體活動功能障礙等[2]。本文研究的四種非甾體抗炎藥物中，阿司匹林、雙氯芬酸均為非選擇性環氧酶(cyclooxygenase,COX)抑制劑，通過抑制下丘腦和外周前列腺素的合成和釋放，起到抗炎、鎮痛的作用[7,8]。塞來昔布能特異性抑制COX-2，阻止炎性前列腺素類物質的產生，達到抗炎、鎮痛及解熱的作用[9]。在大鼠急性軟組織損傷模型灌胃給予塞來昔布、氨酚羥考酮、雙氯芬酸均能促進軟組織損傷恢復，其中塞來昔布療效最佳，阿司匹林無顯著作用，表明COX-2在急性軟組織損傷發病機制中可能起到關鍵作用，選擇性COX-2抑制劑產生較好促進損傷恢復的效果。

氨酚羥考酮是對乙酰氨基酚和鹽酸羥考酮組成的復方制劑(每片含對乙酰氨基酚325mg，鹽酸羥考酮5mg)。該藥在乙酰氨基酚的外周抗炎鎮痛基礎上加入鹽酸羥考酮激動中樞阿片受體加強鎮痛作用[10]。本實驗表明西藥組均對大鼠急性軟組織損傷模型表現出時間依賴性鎮痛作用，其中氨酚羥考酮的急性鎮痛起效時間短，作用最強，阿司匹林和塞來昔布起效晚于氨酚羥考酮，也表現出一定程度的鎮痛作用，雙氯芬酸起效時間最晚，鎮痛作用最弱。雖然氨酚羥考酮的鎮痛作用較強，但根據國家藥監局、公安部、國家衛生健康委員會《關于將含羥考酮復方制劑等品種列入精神藥品管理的公告》規定，口服固體制劑每劑量單位含羥考酮堿不超過5mg的復方制劑自2019年9月1日起列入第二類精神藥品加強管理，該藥物的臨床應用受限。因此，尋找鎮痛活性強且無中樞依賴的替代藥物或研發新型的復方制劑組合具有重要意義。

云南白藥貼為國家保密方，在靜脈炎、乳腺炎等疾病的外敷治療方面具有良好效果[11,12]，本研究在急性軟組織損傷模型上發現該藥物僅在個別時間點有效。活血止痛貼含有干姜、獨活、牡丹皮等成分，文獻報道對臨床急慢性扭挫傷具有一定鎮痛抗炎作用[13,14]，但對本研究模型不能促進軟組織損傷恢復的作用。奇正消痛貼成分為獨一味、棘豆、姜黃等，本實驗顯示可顯著促進損傷恢復，與文獻報道一致[15,16]。推測奇正消痛貼中某些活性成分可能對急性軟組織損傷模型鎮痛抗炎療效更為顯著，具體機制尚待研究。

綜上所述，在大鼠急型軟組織損傷模型上，一系列的中西藥均表現出不同程度的治療作用。塞來昔布、奇正消痛貼的促軟組織損傷恢復效果最好；氨酚羥考酮鎮痛作用起效最快，效能最強。本研究結果可為制定急性軟組織損傷的救治方案或研制鎮痛抗炎復方制劑提供實驗證據。