農村豬場豬圓環病毒病的血清學調查

劉麗云

通過分析云南省永勝縣2016-2018年5個規模養豬場及部分農村散養農戶豬圓環病毒血清流行病學調查數據，結果發現，抗體陽性率分別為19.84%、15.76%、25.54%，表明在當地規模養豬場和散養農戶中豬圓環病毒感染已普遍存在。

豬圓環病毒病是由豬圓環病毒2型（PVC-2）引起的豬的一種多系統功能障礙性傳染病（施德蘭等，2009）。PVC-2主要侵害哺乳仔豬和育肥豬，除引起PMWS（仔豬多系統衰竭綜合征）之外還與許多疾病的發生相關，主要有PDNS（豬皮炎與腎病綜合征）、PRDC（豬呼吸道疾病綜合征）、CT（仔豬先天性震顫）、PVC-2相關性繁殖障礙、PVC-2相關性腸炎等疾病（游一等，2009）。由于該病沒有藥物治療，也沒有可靠的商品疫苗進行免疫預防，目前該病已成為影響養豬生產的重要疾病。為查清永勝縣豬圓環病毒病的感染情況，2016年-2018年，選擇了縣境內5個規模養豬場及部分農村散養戶采集血清樣品，進行了PCV-2血清流行病學調查，為全縣制定綜合防治措施提供依據。

一、材料與方法

1、主要試劑、儀器及血清樣本：豬圓環病毒2型ELISA抗體檢測試劑盒均購自武漢科前動物生物制品有限公司。試劑盒內含有預包被板、血清稀釋板、陰、陽性對照血清、酶結合物、洗滌液、樣品稀釋液、底物、終止液。多道和單道可調移液器、酶標儀等。

待檢血清：無菌采集豬場及部分散養農戶種豬（種公、母豬及后備種豬）、商品豬血清樣本，分離血清，置于冰箱保存待檢。

2、檢測方法? ELISA檢測方法

（1）樣本稀釋：在血清稀釋板中按1：40的體積稀釋待檢血清樣本（195微升樣品稀釋液加5微升待檢血清樣本）。在血清稀釋板中按1：4分別稀釋陽性和陰性血清對照（180微升樣品稀釋液中加60微升對照血清）。

（2）加樣反應：取抗原包被板，每孔加入稀釋好的洗滌液200ul，靜置3分鐘倒掉液體，并在吸水紙上拍干，共計洗滌2次。再分別將稀釋好的待檢血清和對照各取100ul加入到抗原包被板孔中，待檢樣品做一孔。陰性和陽性對照各設2孔。輕輕振勻孔中樣品（勿溢出），置37℃溫育30分鐘。甩掉板孔中的溶液，每孔加入稀釋好的洗滌液200ul，靜置3秒鐘倒掉，再在吸水紙上拍干，共計洗滌5次。

（3）加酶反應：每孔加入酶結合物100ul，置37℃溫育30分鐘。洗滌5次。切記每次在干凈吸水紙上拍干。

（4）顯色反應：每孔先加入底物A一滴，再加底物B一滴混勻，室溫避光顯色10分鐘。每孔加終止液一滴，10分鐘內測定結果。

（5）結果判定：在酶標儀上測各孔OD值。試驗成立的的條件是陽性對照孔平均OD630nm值≥0.7，陰性對照孔平均OD630nm值必須≤0.3。樣品OD630nm值>0.42，判為陽性;樣品OD630nm值介于0.38到0.42之間，判為可疑;樣品OD630nm值<0.38，判為陰性。

二、檢測結果

2016年-2018年，應用ELISA方法共檢測豬血清樣品1570份，其中2016年檢測495份，總陽性感染率21.21%;2017年檢測536份，陽性感染率為16.6%;2018年檢測539份，陽性總感染率為19.67%。（見檢測結果表）

檢測結果表：

三、討論與分析：

1、從總陽性率來看，三年檢測的結果2017年最低，總感染率為16.6%， 2016年最高總感染率達21.21%。與施德蘭等（2009）應用ELISA方法對云南省玉溪市15個規模豬場豬圓環病毒2型（PVC-2）檢測總陽性37.47%和與郎洪武等（2000）對全國七省市不同豬群的調查豬圓環病毒2型（PVC-2）總感染率42.9%相比，陽性檢出率均較低。說明永勝縣豬圓環病毒2型（PVC-2）感染率低于屬于同省的玉溪市，比全國部分省市更低。

2、從不同年度來看，2016年總陽性率為21.21%，2017年為16.60%，2018年為19.67%。2018年的總陽性率比2016年下降1.54個百分點，但2018年比2017年上升3.07個百分點，說明永勝縣豬圓環病毒2型（PVC-2）感染呈波動勢逐年上升的趨勢。

3、從規模場與農村散養戶感染情況來看：2016年規模場陽性總感染率為30.76%，農村散養戶感染率為14.29%;2017年規模場陽性總感染率為21.48%，農村散養戶感染率為12.6%。2018年規模場陽性總感染率為23.34%，農村散養戶感染率為15.48%。從三年檢測的結果看，規模養殖場總陽性感染率均高于農村散養戶，這可能與生豬養殖密度有關。

4、雖然豬群感染單一的（PVC-2）不能引起豬的發病和死亡，但其能夠破壞豬的免疫系統，從而繼發感染細菌、病毒和寄生蟲，并影響其它疫苗免疫應答（劉健等），導致高致病性豬藍耳病、豬瘟、豬口蹄疫等重大疫病發生的風險加大。同時由于（PVC-2）與其他致病因子的協同作用，加重了其它傳染病臨床表現和病理過程（楊漢春），導致出現較高的死亡率。永勝縣某養豬場2011年曾發生了一起由豬圓環病毒2型（PVC-2）與豬傳染性胸膜肺炎混合感染引起豬高死亡率的疫情，對養豬業造成重大經濟損失。

5、永勝縣豬圓環病毒病血清學檢測結果呈現逐年上升趨勢，應引起高度重視。建議：一是加強引種檢疫，杜絕外來疫源侵入。在今后的工作中要加大《種畜禽管理條例》的宣傳和執行力度，規范引種行為，杜絕外來疫源的引入。二是改變傳統的養殖方式，推行早期隔離斷奶、多場式生產技術和全進全出管理方式，從養殖方式的轉變上提高防病能力。三是嚴格按生豬計劃免疫程序，提高其它疫病的免疫保護率，減少混合或繼發感染。重點加強豬瘟、高致病性豬藍耳病的免疫，同時加強豬偽狂犬病、豬細小病毒病的免疫工作，提高豬抵抗力，減少與豬圓環病毒病的協同作用，從而降低生豬疫病的發生。四是加強飼養管理，提高生豬抵抗力。改善環境衛生，冬季注意豬舍通風，降低氨氣等不良氣體的濃度，減少環境應激因素。加強消毒工作，實施嚴格的生物安全措施，避免鼠、飛鳥及其他易感動物接近豬場。五是加強血清學和種公豬精液監測，發現陽性種豬應及時檢查、隔離、淘汰、清除帶毒豬并凈化豬場盡可能控制此病的橫向傳播。

（作者單位：674200云南省麗江市永勝縣動物疫病預防控制中心）