姚姝 張亞東 劉燕清 趙春芳 周麗慧 陳濤 趙慶勇 朱鎮 Balakrishna PILLAY 王才林, *
Wx基因背景下可溶性淀粉合成酶基因和去分支酶 基因對水稻蒸煮食味品質的影響
姚姝1張亞東1劉燕清1趙春芳1周麗慧1陳濤1趙慶勇1朱鎮1Balakrishna PILLAY2, *王才林1, *
[1江蘇省農業科學院 糧食作物研究所/江蘇省優質水稻工程技術研究中心/國家水稻改良中心 南京分中心,南京 210014;2夸祖魯-納塔爾大學(西維爾校區)農業工程科學院 生命科學系,南非 德班;*通信聯系人,E-mail: clwang@jaas.ac.cn]
【】分析在同一主效基因(Wx)背景下可溶性淀粉合成酶基因和去分支酶基因對稻米蒸煮食味品質的影響,以期為水稻品質遺傳改良提供依據。選擇在和存在多態性而其他淀粉合成酶相關基因沒有多態性的半糯品系寧0145和粳稻品種武運粳21進行雜交,獲得F2群體與F3株系。利用分子標記,選擇含有Wx基因的F2單株與F3株系,將這些F2單株與F3株系分成ⅡaPUL、ⅡaPUL、ⅡaPUL和ⅡaPUL4種基因型(和分別表示該基因來源于寧0145和武運粳21),分析不同基因型蒸煮食味品質性狀的差異,探討同一Wx基因背景下不同和等位基因對蒸煮食味品質性狀的影響。不同基因型間蒸煮食味品質性狀均存在顯著差異,來源于武運粳21的Ⅱa基因和PUL基因分別使直鏈淀粉含量增加0.29%~1.00%和0.62%~1.18%,且的效應大于,兩者間存在互作效應。Ⅱa基因和PUL基因降低膠稠度和崩解值,提高了熱漿黏度、冷膠黏度、消減值和回復值,對糊化溫度、峰值黏度和峰值時間的作用較小。明確了Wx背景下和基因對稻米蒸煮食味品質的遺傳效應,該研究結果為和基因的分子標記輔助選擇改良稻米品質提供了理論依據。
半糯基因;蒸煮食味品質;可溶性淀粉合成酶基因;極限糊精酶基因;等位基因效應
水稻是世界上食用人口最多、種植范圍最廣的農作物,也是我國的主要糧食作物之一。當前,優良的稻米品質不僅是育種工作者的重要研究方向,也是消費者關注的主要方面[1]。人們通常把稻米的品質分為外觀品質、碾磨品質、蒸煮食味品質和營養品質等方面。其中,蒸煮食味品質直接影響米飯的口感,是眾多品質指標中最為重要的一項,一般與直鏈淀粉含量、糊化溫度、膠稠度和RAV值等理化指標密切相關[2]。淀粉合成由多個淀粉合成酶控制,每個淀粉合成酶由相應的基因編碼。因此,深入研究稻米淀粉合成相關基因對稻米品質的影響及其遺傳規律具有重要意義,是進一步開展水稻品質育種的基礎。
淀粉是稻米胚乳的主要成分,約占精米質量的90%[3]。直鏈淀粉和支鏈淀粉的比例和結構對稻米蒸煮食味品質起重要作用[4-5]。適宜的直鏈淀粉含量是優質稻米的重要指標,低直鏈淀粉含量的稻米以其柔軟、富有彈性的米飯質地特點,越來越受到人們的青睞[6-8]。水稻中催化直鏈淀粉合成的顆粒結合淀粉合成酶(GBSS)由水稻蠟質基因()編碼。而控制低直鏈淀粉的基因Wx(半糯基因)是通過化學誘變劑N-甲基-N-亞硝基脲處理日本水稻品種越光而獲得的,Wx基因在育種中已經得到應用,日本育種家利用該基因的水稻資源關東194(Milky Princess),培育了“New-hikari”等水稻品種[9-10]。我們同樣以關東194為親本,育成了南粳46[11]、南粳5055[12]、南粳9108[13]、南粳3908[14]、南粳505、南粳晶谷、南粳2728、南粳5718、南粳58等食味品質優良的半糯粳稻品種,深受廣大農戶歡迎,在生產上已累計推廣種植400多萬hm2。
我們的研究表明,即使來源于同一組合、含有同一主效基因Wx的不同半糯水稻品種(系),其直鏈淀粉含量也有較大差異,變異范圍在5%~12%[15]。環境因素試驗的研究結果表明,施氮量和分期播種對半糯粳稻的直鏈淀粉含量有一定影響,但其影響程度最多只有一個百分點左右[16]。早有研究表明,直鏈淀粉的合成除了受主效基因控制外,還受其他淀粉合成相關基因的調控。因此,有必要研究在主效基因Wx背景下其他淀粉合成相關基因對蒸煮食味品質的影響。目前報道的與淀粉合成相關的基因有20多個,其中編碼淀粉合成酶的基因10個,為();編碼淀粉分支酶和去分支酶的基因6個,分別為、[17-18]。其中,淀粉合酶基因是控制稻米糊化溫度的主效基因,Umemoto等[19]將基因定位在水稻第6染色體短臂位點上。是編碼去分支酶之一的極限糊精酶(pullulanase)基因,僅在胚乳中表達,被定位在水稻第9染色體上,已經證實不僅參與水稻胚乳中淀粉的降解,而且在淀粉的合成過程中發揮重要作用[20-21]。許順菊等[22]分析了非糯水稻中單基因以及分別與和構成雙基因互作對蒸煮食味品質的影響??荡浞嫉萚23]利用秈稻與爪哇稻雜交的F2群體分析了蒸煮品質性狀的變異及其與淀粉黏滯性特征值之間的相關性,發現蒸煮品質指標和RVA譜特征值在F2群體中廣泛分離,其中變異最大的是消減值,其次為膠稠度和直鏈淀粉含量。嚴長杰等[2]研究發現在不同的等位基因背景下,和基因對稻米品質的理化特征有不同的影響,不同來源的和等位基因遺傳效應的差異可能被基因所掩蓋。
關于水稻淀粉合成酶基因的遺傳效應已有不少報道,所采用的材料大多具有不同的遺傳背景,因而導致研究結論不盡相同;而在同一主效基因背景下研究淀粉合成相關基因對蒸煮食味品質影響的報道較少。為此,本研究依據前期關于淀粉合成相關基因分子標記多態性篩選的研究結果,選擇在淀粉合酶基因和去分支酶基因存在多態性而其他淀粉合成酶相關基因沒有多態性的半糯品系寧0145與粳稻品種武運粳21雜交,對分離后代利用分子標記,在選擇含有Wx基因的基礎上進行基因型分型,分析不同基因型蒸煮食味品質性狀的差異,探討同一Wx基因背景下不同來源的和等位基因對蒸煮食味品質的影響,明確其遺傳效應,并挖掘在稻米品質改良方面可利用的基因,為水稻優質育種提供理論依據。
供試材料為來源于寧0145(含半糯基因Wx)與武運粳21(含蠟質基因)雜交后代的F2群體及其衍生的F3株系。寧0145為本團隊從“武粳15//武粳13/關東194”后代選育的半糯粳稻品系,武運粳21是江蘇(武進)水稻研究所以運9707/運9726雜交育成的中熟中粳稻品種。寧0145與武運粳21在淀粉合成酶基因和脫分支酶基因上存在多態性,而其他淀粉合成酶相關基因沒有差異[24]。
2012年通過基因型檢測獲得含粳型半糯基因Wx的優質粳稻品系寧0145和含粳型蠟質基因的武運粳21的純系種子,冬季在海南配制雜交組合。2013年正季在南京種植F1,抽穗前后根據表型性狀去除假雜種,成熟后混收獲得F2種子。2014年正季,在南京種植F2群體772株,兩個親本各種植40株。利用分子標記,在F2群體中選擇含有Wx基因的單株,然后根據和等位基因的分離重組進行基因型分型,選擇ⅡaPUL、ⅡaPUL、ⅡaPUL和ⅡaPUL4種基因型(和分別表示該基因來源于寧0145和武運粳21,下同)。為了排除不同抽穗期對蒸煮食味品質的影響,選擇抽穗期相對一致的F2單株作為分析對象。2015年種植由F2單株衍生的F3株系及其親本。試驗在江蘇省農業科學院南京試驗基地進行。試驗材料于5月10日播種,6月10日移栽。每個F3株系和親本種成一個小區,每小區種植4行,每行10株。株、行距分別為13 cm和27 cm。F3株系和親本順序排列,重復2次。田間管理同大田生產。
1.2.1 基因型檢測
移栽后30 d取新鮮幼嫩葉片,采用CTAB法[25]提取DNA,進行粳型半糯基因Wx、淀粉合成酶基因和去分支酶基因檢測。Wx基因利用四引物擴增受阻突變體系PCR技術[26]檢測。攜帶Wx基因的粳稻與攜帶Wx基因的半糯粳稻雜交后,分離世代有WxWx、WxWx和WxWx三種基因型,用四引物受阻擴增突變體系(ARMS) PCR系統可以同時檢測這三種基因型[26]。能擴增出439和292 bp特異性條帶的是WxWx基因型,能擴增出439和200 bp特異條帶是WxWx基因型,能同時擴增出439、292和200 bp三條特異性條帶的是雜合基因型。根據嚴長杰等[2]和萬映秀[27]報道的與基因的分子標記,結合武運粳21和寧0145在、基因啟動子和內含子區的插入或缺失,分別設計了STS分子標記Y12和Y38(表1)。PCR產物用1.5%的瓊脂糖凝膠和9%的聚丙烯酰胺電泳檢測。
1.2.2 直鏈淀粉含量的測定
成熟后,F2按單株收獲,F3每小區在中間行隨機收獲5個單株。分單株脫粒,曬干至含水量穩定在14.5%左右時,出糙碾精米,并用旋風式磨粉機制成100目的精米粉備用。按農業部標準《NY147? 88米質測定方法》[28]測定直鏈淀粉含量,4個參比樣品(直鏈淀粉含量分別為1.5%、10.6%、16.4%和25.6%)購自中國水稻研究所。采用分光光度計在620 nm處測定吸光值,根據標樣做出的標準曲線計算各樣本的直鏈淀粉含量,每份樣品測定3次,取平均值為性狀表型值。
1.2.3 糊化溫度的測定
糊化溫度是指RVA分析中的起漿溫度。
1.2.4 膠稠度的測定
大米膠稠度按GB/T 22294?2008[29]測定。每份樣品測定3次,取平均值為性狀表型值。

表1 試驗使用的Wxmp、SSIIa和PUL基因分子標記
1.2.5 RVA測定
米粉黏滯性變化采用RVA黏度測定儀(Perten,
瑞典)測定,參照美國谷物化學家協會AACC61-01和AACC61-02操作規程進行參數設置。儀器讀出的一級參數包括峰值黏度(peak viscosity)、熱漿黏度(hot paste viscosity)、冷膠黏度(cool paste viscosity)、起漿溫度(pasting temperature)和峰值時間(peak time);二級參數包括崩解值(breakdown viscosity)、消減值(setback viscosity)和回復值(consistency viscosity)。每個樣品測定3次,取平均值。
1.2.6 統計分析
按照莫惠棟[30]介紹的方法進行方差分析和差異顯著性測驗,多重比較采用Duncan新復極差法。
2.1.1基因型的檢測
以含Wx基因的親本品種寧0145和不含Wx基因的親本品種武運粳21作為對照,對772個F2單株的DNA進行四引物ARMS-PCR擴增,結果檢測到含有半糯親本寧0145的WxWx純合基因型的單株193個。對F2單株衍生的91個F3株系的DNA進行四引物ARMS-PCR擴增,所有F3株系均能擴增出439和292 bp的特異性條帶(圖1),表明91個F3株系都含有Wx基因。
2.1.2和基因型的檢測
利用和基因位點設計的STS分子標記Y12和Y38對攜帶WxWx純合基因型的193個F2單株和91個F3株系進行檢測。如果含有來源于半糯親本寧0145的和等位基因,就能分別檢測到90 bp和198 bp條帶,如果含有來源于非半糯親本武運粳21的和等位基因,就能分別檢測到81 bp和194 bp的條帶(圖2)。檢測表明,193個F2單株中檢測到ⅡaSSⅡa和ⅡaSSⅡa純合基因型的單株分別為104株和25株,還有64株為雜合體。檢測到PULPUL和PULPUL基因型的單株分別為74和31株,還有88株為雜合體。兩個基因4種基因型ⅡaPUL、ⅡaPUL、ⅡaPUL和ⅡaPUL的單株分別為46、17、7和5株(表1)。91個F3株系中檢測到ⅡaSSⅡa和ⅡaSSⅡa基因型的株系分別為40和51個,PULPUL和PULPUL株系分別為41和50個。兩個基因4種基因型ⅡaPUL、ⅡaPUL、ⅡaPUL和ⅡaPUL的株系分別為20、20、21和30個(表2)。
2.2.1 F2單株直鏈淀粉含量的變異
為了排除抽穗期對蒸煮食味品質的影響,從75個F2單株中選擇抽穗期相對一致的31個單株作為分析對象,其中4種基因型ⅡaPUL、ⅡaPUL、ⅡaPUL和ⅡaPUL的單株分別為10株、9株、7株和5株。對31個單株的直鏈淀粉含量進行測定。結果表明直鏈淀粉含量分布在8.3%~12.8%,平均值為10.0%,變異系數為11.02%。方差分析結果表明,單株間和基因型間的直鏈淀粉含量均存在極顯著差異,而基因型內的差異則不顯著(表3)。

M–DL 2000標記;泳道1~20:部分半糯單株;泳道21–寧0145;泳道22–武運粳21。
Fig. 1. Detection of theWxgene in semi-glutinous F3lines.

M–DL 2000標記;泳道1–武運粳21;泳道2–寧0145;泳道3~20–部分F2代。
Fig. 2. Detection of(A)and(B)genes in F2population.
2.2.2 F3株系蒸煮食味品質的變異
對91個F3株系的蒸煮食味品質性狀進行測定(表4),結果表明直鏈淀粉含量、膠稠度、糊化溫度和RVA特征值均為近似正態的連續分布(圖3)。直鏈淀粉含量為9.12%~12.69%,平均值為10.42%(表4),其中分布在9.5%~11.0%之間的有74份,占總數的81.32%,可見直鏈淀粉含量的變異幅度不大,變異系數為6.92%。但膠稠度的變異系數較大,為31.02%,主要分布在28.0~104.0 mm之間,平均值為53.6 mm,在70 mm以上的株系只有24個,占26.37%。糊化溫度的分布范圍較窄,主要分布在70.0℃~76.1℃之間,變異系數最小,只有1.58%。RVA特征值中消減值的變異范圍最大,在–1214~11之間,變異系數高達57.31%,除了1個株系為正值外,90個株系均為負值。崩解值和回復值的變異系數也較大,在15%左右,熱漿黏度、冷膠黏度和峰值黏度的變異系數為9%~12%(表4)。
方差分析表明,91個F3株系之間和4種基因型間蒸煮食味品質性狀的差異均達顯著或極顯著水平,而基因型內的差異除了峰值時間未達顯著水平以外,其余性狀均達顯著或極顯著水平(表5)。

表2 來源于寧0145/武運粳21的75個F2單株和91個F3株系SSIIa和PUL位點的基因型
表示該基因來源于親本寧0145,表示該基因來源于親本武運粳21。
indicates that the gene was contributed by Ning 0145, andindicates that the gene was contributed by Wuyunjing 21

表3 31個F2單株直鏈淀粉含量的方差分析
**<0.01。

表4 91個F3株系蒸煮食味品質性狀的統計參數
AC, Amylose content; GC, Gel consistency; GT, Gelatinization temperature; PV, Peak viscosity; HPV, Hot paste viscosity; BDV, Breakdown viscosity; CPV, Cool paste viscosity; SBV, Setback viscosity; CSV, Consistency viscosity. The same as below.

圖3 91個F3株系蒸煮食味品質性狀的分布
Fig. 3. Distribution of eating and cooking quality traits for 91 F3lines.

表5 91個F3株系蒸煮食味品質性狀的方差分析
表中各性狀欄的數據為均方值;*和**分別表示=0.05和=0.01顯著水平。
The data of each column in the table is the mean square value;*and**indicate significant difference at=0.05 and=0.01, respectively.
從表3和表5可知,F2單株和F3株系4種不同基因型的蒸煮食味品質性狀均存在顯著差異。將不同基因型F2和F3蒸煮食味品質性狀的平均值列于表6,和位點各基因型的遺傳效應列于表7。從表6和表7可知,無論是F2或F3,來源于武運粳21的和等位基因均可增加直鏈淀粉含量。在F2代,來源于武運粳21的等位基因使直鏈淀粉含量增加了1.01%,而來源于寧0145的等位基因使之增加了1.18%。同樣,在F3代,來源于武運粳21的和等位基因分別使直鏈淀粉含量增加了0.29%和0.62%。無論是F2或F3,的遺傳效應均大于,但F3代的遺傳效應小于F2代。直鏈淀粉含量最高的基因型都是ⅡaPUL,最低的都是PUL。在F3代,膠稠度最高的基因型是PUL,其次是ⅡaPUL,而崩解值最高、消減值最低的基因型都是PUL(表6)。

表6 F2和F3不同基因型的蒸煮食味品質性狀
和表示該基因分別來源于寧0145和武運粳21。
andindicate the gene originated from Ning 0145 and Wuyunjing 21, respectively.

表7 SSIIa和PUL等位基因對蒸煮食味品質性狀的影響
由表7可見,在具有基因情況下,PUL基因直鏈淀粉含量的遺傳效應,或在具有基因情況下,Ⅱa基因直鏈淀粉含量的遺傳效應分別為1.90%和1.83%。相反,在具有Ⅱa基因情況下,PUL基因直鏈淀粉含量的遺傳效應,或在具有PUL基因情況下,Ⅱa基因直鏈淀粉含量的遺傳效應分別只有0.16%和0.10%。表明兩個基因間互作效應的方向隨基因來源不同而異。當兩個基因來源于不同親本時,表現為正向互作,而當兩個基因來源于同一親本時,表現為負向互作。由表7還可見,來源于武運粳21的Ⅱa和PUL等位基因對膠稠度、崩解值有降低作用,對熱漿黏度、冷膠黏度、消減值、回復值有升高作用,對糊化溫度、峰值黏度和峰值時間的作用則較小。
隨著生活水平的提高,消費者對于稻米品質的要求越來越高,尤其關心稻米的食味品質。在稻米品質的評價中,蒸煮食味品質的研究同樣最為重要,它決定了稻米口感。而在育種工作中,為了對水稻雜交后代進行更為有效的選擇,進行稻米蒸煮食味品質性狀的遺傳效應分析是很有必要的。大量研究表明,稻米蒸煮食味品質除受主效基因控制外,還受到其他淀粉合成相關基因的調控。Tian等[31]通過關聯分析發現,和()通過影響三個品質性狀直鏈淀粉含量、膠稠度和糊化溫度來決定稻米的蒸煮食味品質。除和外,還檢測到4個影響直鏈淀粉含量的基因(即,,,),檢測到3個影響膠稠度膠稠度的基因(,,),5個影響糊化溫度的基因(,,,和)。He等[32]用“NJ11/Balilla”DH群體研究發現除外,還檢測到、和基因對直鏈淀粉含量、膠稠度、糊化溫度的效應,并且檢測到較多的基因互作效應。Fujita等[33]發現在4種不同程度缺失的水稻突變體中,支鏈淀粉鏈長分布的變化與其活性降低呈正相關。吳洪凱等[34]發現在糯性水稻中,可溶性淀粉合成酶基因基因對RVA譜特征值有重要的影響??荡浞嫉萚35]利用和兩個基因發生分離的株系為材料,得出對糊化溫度、峰值黏度、崩解值和峰值時間有顯著影響。楊博文等[36]分析了、和基因互作對稻米品質的影響,認為、和互作對直鏈淀粉含量、膠稠度、峰值黏度、熱漿黏度、崩解值、冷膠黏度、消減值、回復值、起漿溫度和峰值時間的效應達到極顯著水平,對糊化溫度的效應達到顯著水平。
稻米淀粉的生物合成需要多個基因共同參與,并且這些基因間存在相互作用。本研究通過廣泛篩選淀粉合成相關基因分子標記多態性,選擇在淀粉合酶基因和去分支酶基因存在多態性的半糯品系寧0145和粳稻品種武運粳21進行雜交,獲得F2群體與F3株系。利用分子標記,將含有Wx基因的F2單株與F3株系進行基因型分型,分成4種基因型ⅡaPUL、ⅡaPUL、ⅡaPUL和ⅡaPUL,并分析不同基因型的蒸煮食味品質性狀差異。結果表明來源于武運粳21的Ⅱa基因和PUL基因分別使直鏈淀粉含量增加0.29%~1.00%和0.62%~1.18%,且的效應大于,兩者間存在互作效應。在F2代,只要具有寧0145來源的一個基因,來源于武運粳21的另一基因直鏈淀粉含量的遺傳效應均較大,反之,在具有武運粳21來源的一個基因情況下,來源于武運粳21的另一基因直鏈淀粉含量的遺傳效應均較小。這一結果表明,兩個基因間互作效應的方向隨基因來源不同而異。當兩個基因來源于不同親本時,表現為相互促進,當兩個基因來源于同一親本時,則表現為相互抑制。Ⅱa基因和PUL基因對膠稠度、崩解值有降低作用,對峰值黏度、冷膠黏度、消減值、回復值有升高作用,對糊化溫度、峰值黏度和峰值時間的作用則較小。本研究在主效基因Wx背景相同的前提下研究了基因和基因對蒸煮食味品質的效應,明確和不同基因型及兩個基因互作效應大小,從而為稻米食味品質的改良提供理論依據。
淀粉合成的復雜性以及品質性狀的易變性(易受環境影響)是近年來品質育種滯后的一個重要原因之一。除了遺傳因素,環境條件也是影響稻米食味品質的眾多因素之一[37-38]。其中,水稻灌漿結實期的高溫環境是降低稻米食味品質的重要因素,高溫一方面能造成外觀品質變差,另一方面也能導致直鏈淀粉含量下降[39-40]。由于常規的方法改良稻米品質的效率較低,而控制淀粉合成關鍵基因的分子標記可用于單株的早期選擇,可在低世代對被選單株基因型進行準確鎖定,提高育種的預見性和可操作性,進一步加快稻米品質改良。通常認為,直鏈淀粉含量對于稻米食味品質的影響最大。低直鏈淀粉含量的稻米以其柔軟、富有彈性的米飯質地特點受到人們的青睞。在育種過程中,從雜種早代(如F2或F3代)開始,利用半糯基因Wx對擬選單株進行鑒別,并于隨后的世代中檢測淀粉合成酶基因的親本來源,逐步對稻米食味品質性狀進行測定和跟蹤。根據本試驗結果,對于武運粳21與寧0145的組合,我們傾向于選擇基因型為ⅡaPUL的品系,此類品系直鏈淀粉含量在半糯品系中相對較高并且外觀透亮。這為稻米品質改良育種指明了方向,同時提高了品質育種的效率,減少了育種的盲目性。因此,我們在選擇低直鏈淀粉含量品種的基礎上,可以同時考慮基因背景,選擇直鏈淀粉含量相對高的品種,更好地進行定向選擇。當然參與淀粉合成的酶數目眾多,包括顆粒淀粉合成酶(GBSS)、可溶性淀粉合成酶(SSS)、分支酶(SBE)、脫分支酶(DBE)等,其對應的基因有20多個[41-42]。本研究根據前期分子標記多態性篩選結果,分析了同一遺傳背景下早期分離世代和基因對稻米蒸煮食味品質的效應,對于其在后續世代的效應,我們將進一步跟蹤,并明確其在品質改良中的有效性。同時,其他淀粉合成相關基因對稻米品質的效應也有待于進一步研究。米飯的蒸煮食味品質很大程度上由淀粉的組成和結構決定,因此,本試驗開展的淀粉合成相關基因對稻米蒸煮食味品質影響及其遺傳規律的研究意義重大,為稻米品質的改良提供了理論依據。
[1] Zeng D L, Tian Z X, Rao Y C, Dong G J, Yang Y L, Huang L C, Leng Y J, Xu J, Sun C, Zhang G H, Gao Z Y, Hu X M, Guo L B, Xiong G S, Wang Y H, Li J Y, Qian Q. Rational design of high-yield and superior-quality rice[J/OL]., 2017, 3: 17031.
[2] 嚴長杰, 田舜, 張正球, 韓月澎, 陳峰, 李欣, 顧銘洪. 水稻栽培品種淀粉合成相關基因來源及其對品質的影響[J]. 中國農業科學, 2005, 39(5): 865-871.
Yan C J, Tian X, Zhang Z Q, Han Y P, Chen F, Li X, Gu M H. The source of genes related to rice grain starch synthesis among cultivated varieties and its contribution to quality[J]., 2005, 39(5): 865-871. (in Chinese with English abstract)
[3] Vandeputte G E, Delcour J A. From sucrose to starch granule to starch physical behavior: A focus on rice starch[J]., 2004, 58: 245-266.
[4] 張昌泉, 趙冬生, 李錢峰, 顧銘洪, 劉巧泉. 稻米品質性狀基因的克隆與功能研究進展[J]. 中國農業科學, 2016, 49(22): 4267-4283.
Zhang C Q, Zhao D S, Li Q F, Gu M H, Liu Q Q. Progresses in research on cloning and functional analysis of key genes involving in rice grain quality[J]., 2016, 49(22): 4267-4283. (in Chinese with English abstract)
[5] Li K H, Bao J S, Corke H, Sun M. Genotypic diversity and environmental stability of starch physicochemical properties in the USDA rice mini-core collection[J]., 2017, 221: 1186-1196.
[6] 黃祖六, 許如根, 陳德輝, 陳勇. 中泰軟米資源直鏈淀粉含量的遺傳研究[J]. 揚州大學學報: 農業與生命科學版, 2003, 24(1): 34-36.
Huang Z L, Xu R G, Chen D H, Chen Y. Research on inheritance for amylose content of soft rice from China and Thailand[J].:, 2003, 24(1): 34-36. (in Chinese with English abstract)
[7] Suto M, Ando I, Numaguchi K. Breeding of low amylose content paddy rice variety Milk Queen with good eating quality[J]., 1996, 46(1): 221-224.
[8] 趙春芳, 岳紅亮, 黃雙杰, 周麗慧, 趙凌, 張亞東, 陳濤, 朱鎮, 趙慶勇, 姚姝, 梁文化, 路凱, 王才林. 南粳系列水稻品種的食味品質與稻米理化特性[J]. 中國農業科學, 2019, 52(5): 909-920.
Zhao C F, Yue H L, Huang S J, Zhou L H, Zhao L, Zhang Y D, Chen T, Zhu Z, Zhao Q Y, Yao S, Liang W H, Lu K, Wang C L.Study on eating quality and physicochemical properties in Nanjing rice varieties[J]., 2019, 52(5): 909-920. (in Chinese with English abstract)
[9] Sato H, Suzuki Y, Okuno K, Hirano H, Imbe T. Genetic analysis of low amylose content in a rice variety, Milky Queen[J]., 2001, 3(1): 13-19.
[10] Tomita K, Horiuchi H, Terada K. New-hikari, a new rice cultivar[J]., 2007, 44(6): 1-20.
[11] 王才林, 陳濤, 張亞東, 朱鎮, 趙凌, 林靜. 通過分子標記輔助選擇培育優良食味水稻新品種[J]. 中國水稻科學, 2009, 23(1): 25-30.
Wang C L, Chen T, Zhang Y D, Zhu Z, Zhao L, Lin J. Breeding of a new rice variety with good eating quality by marker assisted selection[J]., 2009, 23(1): 25-30. (in Chinese with English abstract)
[12] 王才林, 張亞東, 朱鎮, 陳濤, 趙慶勇, 趙凌, 周麗慧, 姚姝. 優良食味粳稻新品種南粳5055的選育及利用[J]. 農業科技通訊, 2012(2): 84-87.
Wang C L, Zhang Y D, Zhu Z, Chen T, Zhao Q Y, Zhao L, Zhou L H, Yao S, Breeding and application of new good eating quality rice variety Nanjing 5055[J]., 2012(2): 84-87. (in Chinese with English abstract)
[13] 王才林, 張亞東, 朱鎮, 姚姝, 趙慶勇, 陳濤, 周麗慧, 趙凌. 優良食味粳稻新品種南粳9108的選育與利用[J]. 江蘇農業科學, 2013, 41(9): 86-88.
Wang C L, Zhang Y D, Zhu Z, Yao S, Zhao Q Y, Chen T, Zhou L H, Zhao L. Breeding and application of new good eating quality rice variety Nanjing 9108[J]., 2013, 41(9): 86-88. (in Chinese with English abstract)
[14] 陳濤, 張亞東, 趙慶勇, 朱鎮, 姚姝, 周麗慧, 趙凌, 趙春芳, 王波, 王才林. 優良食味抗病高產晚粳稻新品種南粳3908的選育和栽培技術[J]. 江蘇農業科學, 2019, 47(19): 72-74.
Chen T, Zhang Y D, Zhao Q Y, Zhu Z, Yao S, Zhou L H, Zhao L, Zhao C F, Wang B, Wang C L. Breeding and cultivation technique of a new japonica rice variety Nanjing 3908 with good eating quality, resistant diseases and high yield[J]., 2019, 47(19): 72-74. (in Chinese with English abstract)
[15] 于新, 趙慶勇, 趙春芳, 張亞東, 朱鎮, 趙凌, 陳濤, 周麗慧, 姚姝, 王才林. 攜帶基因的不同類型水稻新品種(系)直鏈淀粉含量分析[J]. 江蘇農業學報, 2012, 28(6): 1218-1222.
Yu X, Zhao Q Y, Zhao C F, Zhang Y D, Zhu Z, Zhao L, Chen T, Zhou L H, Yao S, Wang C L. Analysis of amylose content in different types of new rice varieties (lines) carryinggene[J]., 2012, 28(6): 1218-1222. (in Chinese with English abstract)
[16] 姚姝, 于新, 周麗慧, 陳濤, 趙慶勇, 朱鎮, 張亞東, 趙春芳, 趙凌, 王才林. 氮肥用量和播期對優良食味粳稻直鏈淀粉含量的影響[J]. 中國水稻科學, 2016, 30(5): 535-549.
Yao S, Yu X, Zhou L H, Chen T, Zhao Q Y, Zhu Z, Zhang Y D, Zhao C F, Zhao L, Wang C L. Effects of nitrogen and sowing date on amylose content in good eating quality rice (L.) [J]., 2016, 30(5): 535-549. (in Chinese with English abstract)
[17] Gomez K A. Effect of environment on protein and amylose content of rice[C]//Proceedings of the Workshop on Chemical Aspects of Rice Grain Quality. Philippines: International Rice Research Institute, 1979: 59-68.
[18] Sato H. Genetics and breeding of high eating quality rice: Status and perspectives on the researches of low amylose content rice[J]., 2002, 77(5): 20-28.
[19] Umemoto T, Yano M, Satoh H, Shomura A, Nakamura Y, Mapping of a gene responsible for the difference in amylopectin structure between japonica-type and indica-type rice varieties[J]., 2002, 104: 1-8.
[20] Li Q F, Zhang G Y, Dong Z W, Yu H X, Gu M H, Sun S S M, Liu Q Q. Characterization of expression of thegene encoding a pullulanase-type debranching enzyme during seed development and germination in rice[J]., 2009, 47: 351-358.
[21] Kubo A, Fujita N, Harada K, Matsuda T, Satoh H, Nakamura Y. The starch debraching enzymes isoamylase and pullulanase are both involved in amylopectin biosynthesis in rice endosperm[J]., 1999, 121: 399-409.
[22] 許順菊, 向珣朝, 康翠芳, 龍小林, 蘇文麗, 楊博文, 吳家富. 回交重組自交系中、和基因對稻米蒸煮品質的影響[J]. 西北植物學報, 2015, 35(10): 1978-1988.
Xu S J, Xiang X C, Kang C F, Long X L, Su W L, Yang B W, Wu J F. Effects of,andon eating and cooking qualities of rice under the background of backcross inbred lines quality[J]., 2015, 35(10): 1978-1988. (in Chinese with English abstract)
[23] 康翠芳, 向珣朝, 龍小林, 蘇文麗, 許順菊. 秈爪交水稻F2群體的蒸煮食味品質研究[J]. 植物遺傳資源學報, 2015, 16(3): 561-568.
Kang C F, Xiang X C, Long X L, Su W L, Xu S J. Studies on cooking and eating quality of F2population of/rice[J]., 2015, 16(3): 561-568. (in Chinese with English abstract)
[24] 劉燕清, 強新濤, 趙春芳, 于新, 姚姝, 周麗慧, 陳濤, 趙慶勇, 朱鎮, 張亞東, 王才林. 水稻淀粉合成相關基因分子標記的篩選與利用[J]. 江蘇農業學報, 2015, 31(3): 471-476.
Liu Y Q, Qiang X T, Zhao C F, Yu X, Yao S, Zhou L H, Chen T, Zhao Q Y, Zhu Z, Zhang Y D, Wang C L. Selection and application of molecular markers for starch synthesis-related genes in rice[J]., 2015, 31(3): 471-476. (in Chinese with English abstract)
[25] Rogers S O, Bandit A J. Extraction of DNA from plant tissues[J]., 2012, 54(12): 979-990.
[26] 陳濤, 駱名瑞, 張亞東, 朱鎮、趙慶勇, 趙凌, 周麗慧,姚姝, 王才林. 利用四引物擴增受阻突變體系PCR技術檢測水稻低直鏈淀粉含量基因[J]. 中國水稻科學, 2013, 27(5): 529-534.
Chen T, Luo M R, Zhang Y D, Zhu Z, Zhao Q Y, Zhao L, Zhou L H, Yao S, Wang C L. Detection ofgene for low amylose content by tatre-amplification refractory mutation system PCR in-rice[J]., 2013, 27(5): 529-534. (in Chinese with English abstract)
[27] 萬映秀. 水稻淀粉生物合成途徑中關鍵酶基因分子標記的開發及應用[D]. 雅安: 四川農業大學, 2006.
Wan Y X. Development and application of the key enzyme gene sequence-tagged molecular markers of starch biosynthesis in rice (L.) [D].Yaan: Sichuan Agricultural University, 2006. (in Chinese with English abstract)
[28] 中華人民共和國農業部. 米質測定方法NY147–88[S]. 北京: 中國標準出版社, 1988: 4-6.
Ministry of Agriculture of the People's Republic of China. Rice Quality Measurement Method of NY147–88[S]. Beijing: China Standards Press, 1988: 4-6. (in Chinese)
[29] 中華人民共和國國家標準. 糧油檢驗—大米膠稠度的測定: GB/T22294–2008[S]. 北京:中國標準出版社, 2009.
The People’s Republic of China. Inspection of the grain and oil—Determination of rice adhesive strength: GB/T 22294–2008[S]. Beijing: Standard Press of China, 2009. (in Chinese)
[30] 莫惠棟. 農業試驗統計[M]. 上海: 上海科學技術出版社, 1992: 151-166.
Mo H D. Agricultural Experiment Statistics[M]. Shanghai: Shanghai Science and Technology Press, 1992: 151-166.(in Chinese)
[31] Tian Z X, Qian Q, Liu Q Q, Yan M, Liu X, Yan C J, Liu G, Gao Z, Tang S, Zeng D, Wang Y, Yu J, Gu M H, Li J Y. Allelic diversities in rice starch biosynthesis lead to a diverse array of rice eating and cooking qualities[J]., 2009, 106: 21 760-21 765.
[32] He Y, Han Y P, Jiang L, Xu C W, Lu J F, Xu M L. Functional analysis of starch-synthesis genes in determining rice eating and cooking qualities[J]., 2006, 18(4): 277-290.
[33] Fujita N, Yoshida M, Asakura N, Ohdan T, Miyao A, Hirochika H, Nakamura Y. Function and characterization of starch synthase I using mutants in rice[J]., 2006, 140(11): 1070-1084.
[34] 吳洪愷, 梁國華, 顧燕娟, 單麗麗, 王芳, 韓月澎, 顧銘洪. 水稻淀粉合成相關基因對稻米RVA譜特征的影響[J]. 作物學報, 2006, 32(11): 159-163.
Wu H K, Liang G H, Gu Y J, Shan L L, Wang F, Han Y P, Gu M H. The effect of the starch-synthesizing genes on RVA profile characteristics in rice (L.) [J]., 2006, 32(11): 159-163. (in Chinese with English abstract)
[35] 康翠芳, 向珣朝, 龍小林, 蘇文麗, 許順菊. 水稻淀粉合成相關基因、和對稻米品質的影響[J]. 農業生物技術學報, 2015, 23(3): 311-319.
Kang C F, Xiang X C, Long X L,Su W L, Xu S J. Effects of the starch- synthesizing genes,andon rice (L.) quality[J]., 2015, 23(3): 311-319. (in Chinese with English abstract)
[36] 楊博文, 向珣朝, 許順菊, 許亮. 回交重組自交系中、和不同等位基因互作對稻米蒸煮食味品質的影響[J]. 農業生物技術學報, 2017, 25(10): 1566-1574.
Yang B W, Xiang X C, Xu S J, Xu L. Influences on rice () eating and cooking qualities for interaction of different alleles ofandin backcross recombinant inbred lines[J]., 2017, 25(10): 1566-1574. (in Chinese with English abstract)
[37] Xu Y J, Ying Y N, Ouyang S H, Duan X L, Sun H, Jiang S K, Sun S C, Bao J S. Factors affecting sensory quality of cookedrice[J]., 2018(2): 330-339.
[38] Champagne E T, Bett-Garber K L, Fitzgerald M A, Grimm C C, Lea J, Ohtsubo K I, Jongdee S, Xie L H, Bassinello P Z, Resurreccion A, Ahmad R, Habibi F, Reinke R. Important sensory properties differentiating premium rice varieties[J]., 2010(3): 270-281.
[39] Sreenivasulu N, Butardo V M J, Misra G, Cuevas R P, Anacleto R, Kavi Kishor P B. Designing climate-resilient rice with ideal grain quality suited for high-temperature stress[J]., 2015, 66(7): 1737-1748.
[40] Zhang C Q, Chen S J, Ren X Y, Lu Y, Liu D R, Cai X L, Li Q F, Gao J P, Liu Q Q. Molecular structure and physicochemical properties of starches from rice with different amylose contents resulting from modification of OsGBSSⅠactivity[J/OL]., 2017, 65: 2222.
[41] Nakamura Y. Towards a better understanding of the metabolic system for amylopectin biosynthesis in plants: Rice endosperm a model tissue[J]., 2002, 43(7): 718-725.
[42] 陳雅玲, 包勁松. 水稻胚乳淀粉合成相關酶的結構、功能及其互作研究進展[J]. 中國水稻科學, 2017, 31(1): 1-12.
Chen Y L, Bao J S. Progress in structures, functions and interactions of starch synthesis related enzymes in rice endosperm[J]., 2017, 31(1): 1-12. (in Chinese with English abstract)
Allelic Effects on Eating and Cooking Quality ofandGenes UnderWxBackground in Rice
YAO Shu1, ZHANG Yadong1, LIU Yanqing1, ZHAO Chunfang1, ZHOU Lihui1, CHEN Tao1, ZHAO Qingyong1, ZHU Zhen1, Balakrishna PILLAY2, *, WANG Cailin1, *
[1Institute of Food Crops, Jiangsu Academy of Agricultural Sciences / Jiangsu High Quality Rice Research and Development Center, Nanjing Branch of China National Center for Rice Improvement, Nanjing 210014, China;2School of Life Sciences, College of Agriculture, Engineering and Science, University of KwaZulu-Natal (Westville Campus), Durban, South Africa;*Corresponding author, E-mail: clwang@jaas.ac.cn]
【】Our aimis to analyze the genetic effects of soluble starch synthase geneand debranching enzyme geneon eating and cooking quality under the same main gene background ofWx, so as to lay a theoretical basis for rice quality improvement.】In this study, a semi-glutinousrice line Ning 0145 andrice variety Wuyunjing 21 were crossed to obtain F2population and F3lines. There was polymorphism in soluble starch synthase geneand debranching enzyme genebut no polymorphism in other starch synthase related genes between the two parents. Withmolecular markers, some F2plants and F3lines containingWxgene were selected and divided into four genotypes,ⅡaPUL,ⅡaPUL,ⅡaPULandⅡaPUL(andindicated that the genes were contributed by Ning 0145 and Wuyunjing 21, respectively). The allelic effects ofandgenes on eating and cooking quality under the sameWxgene background was investigated by analyzing the eating and cooking quality and its differences among different genotypes.【】There were significant differences for eating and cooking quality among genotypes of different parental origins. The allelic geneⅡaandPULfrom Wuyunjing 21 increased amylose content by 0.29%–1.00% and 0.62%–1.18% respectively, and the effect ofwas greater than that of. There was interaction betweenandgenes.TheⅡaandPULgenes also decreased gel consistency and breakdown viscosity, increased hot paste viscosity, cool paste viscosity, setback viscosity and consistency viscosity, but had little effect on gelatinization temperature, peak viscosity and peak time. 【】The genetic effects ofandgenes on cooking and eating quality of rice under the background ofWxgenewere clarified. The results lay a theoretical basis for improving rice quality by molecular marker-assisted selection ofandgenes.
semi-glutinous gene; eating and cooking quality; soluble starch synthase gene; pullulanase gene; allelic effect
Q755; S511.033
A
1001-7216(2020)03-0217-11
10.16819/j.1001-7216.2020.9120
2019-11-24;
2020-02-05。
江蘇省自然科學基金資助項目(BK20180302); 江蘇省農業科技自主創新基金資助項目(CX[18]1001); 江蘇省重點研發計劃資助項目(BE2018357); 現代農業產業技術體系建設專項資金資助項目(CARS-1-62); 江蘇省作物基因組學和分子育種重點實驗室開放課題(PL201902)。