滑子菇新品種液體培養基篩選試驗

王廣耀 李雪 李盛旻 李鳳林 于匯 王慧英

【摘? ?要】 該試驗通過單因素試驗和正交試驗，探討不同碳源、氮源對滑子菇新品種液體培養基菌絲生物量的影響。結果得出滑子菇新品種的最佳液體培養基是玉米粉3.0%、葡萄糖2.5%、麩皮3.5%、黃豆粉2.7%。

【關鍵詞】 滑子菇;碳源;氮源;菌絲生物量;液體發酵

[Abstract] Through single factor test and orthogonal test， the effects of different carbon and nitrogen sources on the mycelia biomass in liquid medium of a new mushroom variety were investigated. Results the best liquid medium for the new mushroom variety was corn flour 3.0%， glucose 2.5%， bran 3.5% and soybean flour 2.7%.

[Key words] shiitake mushroom; carbon source; nitrogen source; mycelium biomass; liquid fermentation

滑子菇（Pholiota namekio），屬于真菌界、真菌門、擔子菌亞門、層菌綱、傘菌目[1]，又稱珍珠菇、光帽鱗傘，在日本被叫做納美菇。滑子菇人工栽培始于日本，1977年引入我國[2]。近年來， 在吉林省有近萬滑子菇的栽培戶，但是產量不穩定、質量呈現下降趨勢，主要表現在菌種老化、抗性差、產量低，因此，篩選出適宜當地栽培的新品種非常關鍵。該實驗主要是針對液體培養基所需營養源進行篩選，篩選出最佳的碳、氮源培養基組合，并應用于生產，為滑子菇液體發酵提供理論依據。

1? 材料與方法

1.1? 實驗材料

實驗于吉林農業科技學院食用菌實驗室、吉林市匯豐科技有限公司進行。滑子菇品種由吉林農業科技學院食用菌實驗室提供。所用到的試劑和材料還有瓊脂、酵母膏、可溶性淀粉（98%）、硝酸銨（99%）、蔗糖（99.9%）、葡萄糖（99.9%）、蛋白胨（86%）、麥芽糖（99.9%）、麩皮、玉米粉、黃豆粉，均由吉林農業科技學院食用菌實驗室提供。

1.2? 培養基配方

斜面試管培養基配方：馬鈴薯20%、葡萄糖2%、蛋白胨1%、酵母膏0.5%、K2HPO4 0.1%、MgSO4 0.1%、瓊脂2%、水100%、pH值取自然。與常規配制方法相同;液體種子初培養基配方：在斜面試管培養基配方的基礎上去掉2%的瓊脂，其它相同;碳源供試培養基：馬鈴薯20%，水100%，再分別加入葡萄糖、蔗糖、玉米粉、麥芽糖和可溶性淀粉;氮源供試培養基：馬鈴薯20%，葡萄糖2%，水100%，再分別加入黃豆粉、蛋白胨、酵母膏、硝酸銨、麩皮，馬鈴薯、玉米粉、黃豆粉、麥麩均煮汁，雙層紗布過濾。

1.3? 實驗方法

菌種活化：在無菌操作臺下切取黃豆粒大小菌種，接種到斜面試管培養基中央，然后放到25℃的培養箱中培養菌絲長滿斜面。

液體種子初培養：在無菌操作臺下進行接種，每支試管菌種接2瓶，將培養箱調到25 ℃搖床中靜置48 h后，檢察瓶中菌種是否有雜菌，如無雜菌，在160r/min、溫度為25 ℃條件下培養8d，獲得滑子菇菌液。

碳、氮源液體供試培養：在無菌操作臺下進行接種，按5%的接種量進行接種，分別接到裝有碳、氮源不同液體培養基的三角瓶中，放在25℃的搖床中，培養6d。

菌絲干重的測定：培養好的菌液，經40目過篩，將處理好的菌絲體用蒸餾水沖洗3次后，置于75℃干燥箱內烘干直至恒重，用電子天平準確稱量菌絲干重。

1.4? 試驗設計

碳源供試因素分別為葡萄糖、蔗糖、玉米粉、麥芽糖和可溶性淀粉，氮源供試因素分別為黃豆粉、蛋白胨、酵母膏、硝酸銨、麩皮，試驗設計如表1，每個水平重復三次。

2? 結果與分析

2.1? 不同碳源對滑子菇菌絲干重的影響 見圖1。

由圖1可知，5種碳源隨著水平因素量的增加菌絲干重也隨著增加，滑子菇菌絲對葡萄糖的利用效果最好，在取水平2.5%時菌絲干重達到2.991g/100mL，其次是蔗糖、玉米粉、麥芽糖和可溶性淀粉。從碳源的單糖、二糖、多糖來考慮，選擇小分子單糖，從成本方面來考慮，選擇大分子多糖玉米粉，所以確定先選擇碳源葡萄糖和玉米粉來進行正交試驗。

2.2? 不同氮源對滑子菇菌絲干重的影響 見圖2。

由圖2可知，隨著黃豆粉、硝酸銨、麩皮3種不同水平因素量的增加菌絲干重隨著增加，而隨著蛋白胨、酵母膏兩種因素量的增加菌絲干重隨著減少。滑子菇菌絲對氮源的利用效果最好是黃豆粉，其次是麩皮。從菌絲干重和成本、經濟效益方面考慮，確定選擇黃豆粉和麩皮作為氮源進行正交試驗。

2.3? 碳、氮源正交試驗

根據單因素試驗結果，選擇碳源的葡萄糖、玉米粉和氮源的黃豆粉、麩皮進行正交試驗設計，試驗重復3次，取其平均值，最終根據測得的干重計算其平均值。對所得數據進行L9（34）正交試驗可知，極差次序依次為葡萄糖>麩皮>黃豆粉>玉米粉，由此分析出極差越小，起的作用就越小，說明影響菌絲干重最大的是葡萄糖，其次是麩皮，影響最小的是黃豆粉和玉米粉。

3? 結論與討論

經過單因素試驗，結果選擇碳源是葡萄糖2.5%、玉米粉3.0%，氮源則是麩皮3.5%、黃豆粉2.7%。通過正交試驗，得到滑子菇新品種的最佳液體培養基是玉米粉3.0%，葡萄糖2.5%，麩皮3.5%，黃豆粉2.7%。對于不同的碳源，不論大、小分子碳源，都能被滑子菇菌絲利用上，從生產實際成本出發，選擇既能降低成本又能提高菌絲量的碳源。在氮源的選擇上，發現它在滑子菇發酵過程中起到了相當高的作用，而且氮源作為原材料，為食用菌細胞合成蛋白質和核酸提供了能量。當滑子菇液體培養基中加入硝酸銨時，菌絲生長速度明顯變慢，但加入麥麩、黃豆粉、蛋白胨、酵母膏時，菌絲卻能生長的很好，說明無機氮對滑子菇的作用不大。從經濟方面考慮，麥麩、黃豆粉作為農產品具有方便采購且成本低等特點，因此，選擇麥麩、黃豆粉作為氮源。

（編輯：李曉琳）