MACC1基因在乳腺癌中的表達及其臨床意義

郭宏艷，何利珍，張 虹，成 慧，張云霏，楊國嶸，安文文

(1.西北民族大學附屬醫院·甘肅省第二人民醫院，甘肅 蘭州 730000；2.廣州醫科大學附屬腫瘤醫院病理科，廣東 廣州 510000；3.解放軍第一醫院病理科，甘肅 蘭州 730030)

乳腺癌是嚴重危害廣大婦女身心健康和生命的重大疾病，發病率居歐美女性惡性腫瘤首位。乳腺癌在我國的發病率是41.64/10萬，位居女性癌癥首位[1]，且其發病率呈明顯的逐年上升趨勢。本研究運用免疫組織化學方法檢測MACC1在乳腺癌中的蛋白表達水平，分析MACC1蛋白表達在乳腺癌發生發展中的作用及其與臨床病理特征之間的關系，為臨床早期診斷、早期治療乳腺癌提供可行的理論依據。

1 材料與方法

1.1 一般資料收集甘肅省第二人民醫院病理科2016年1月至2018年12月乳腺活檢及乳腺癌根治手術標本110例，其中乳腺良性上皮增生40例，乳腺癌70例。乳腺良性上皮增生組包括普通型導管增生(UDH)20例、非典型性導管增生(ADH) 20例；乳腺癌組包括導管原位癌(DCIS)15例、乳腺浸潤性導管癌(IDC)淋巴結轉移陰性26例及淋巴結轉移陽性29例。所選病例均為女性，年齡25～78歲[(47.6±11.6)歲]。其中UDH及ADH取自乳腺局部切除的標本，乳腺癌病例取自根治標本，所有病人術前均未接受化療、放療及其它輔助治療。

1.2 方法所有組織均調取存檔相關切片及蠟塊，由一位副主任醫師及一位主任醫師復診所有病例的HE切片，重新進行組織學分類和分級。其中，組織學分級：Ⅰ級2例，Ⅱ級29例，Ⅲ級24例；腫瘤直徑>2 cm者37例，≤2 cm者18例。所有標本經10%甲醛固定后，用石蠟包埋，4 μm厚連續切片備用，進行EnVision免疫組織化學法檢測。濃縮型兔抗人多克隆抗體MACC1購自美國Sigma公司，常規石蠟切片脫蠟至水，3% H2O2去離子水室溫孵育10分鐘，阻斷內源性過氧化物酶的活性，PBS沖洗3次，每次2分鐘；再滴加10%正常山羊血清，室溫孵育10 min，以消除非特異性染色，滴加稀釋至1∶200 MACC1抗體，置于4 ℃冰箱過夜，次日用PBS沖洗3次，每次2分鐘，然后滴加聚合物輔助劑(Polymer Helper)，室溫孵育20分鐘，PBS沖洗沖洗3次，每次2分鐘，再滴加辣根酶標記羊抗兔/小鼠IgG聚合物，室溫孵育30分鐘，PBS沖洗3次，每次2分鐘，DAB顯色，顯微鏡下觀察5分鐘，蒸餾水沖洗、復染、脫水、透明、封片。以PBS緩沖液置換一抗作為陰性對照，用已知MACC1陽性的切片作為陽性對照。

1.3 結果判斷MACC1蛋白產物主要表達在胞漿，少數可在細胞核表達，胞漿或胞核染色呈黃色或棕褐色者視為陽性細胞，根據陽性細胞百分率和染色程度進行半定量分析。染色強度評分：無色=0；淡黃色=1；棕黃色=2；棕褐色=3。在高倍視野下隨機計數500個腫瘤細胞中陽性細胞所占的比例，劃分3級，未見陽性表達或陽性細胞數<5%為陰性(-)=0；5%≤陽性細胞數<30%為陽性(+)=1；30%≤陽性細胞數<60%為中度陽性(++)=2；≥60%的為強陽性(+++)=3。兩種評分結果相加后劃分為4級：0～1分，陰性；2分“+”，弱陽性；3～4分“++”，中度陽性；5～6分“+++”，強陽性(過表達)。

1.4 統計學方法采用SPSS 13.0軟件對數據進行統計分析。計數資料組間比較采用采用χ2檢驗。P< 0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 不同乳腺病變組織中MACC1蛋白的表達乳腺癌組織中MACC1表達率與乳腺上皮增生組織比較，差異有統計學意義(P< 0.05)。見表1、圖1。

表1 不同乳腺組織中MACC1的表達[n(%)]

圖1 不同乳腺組織中MACC1的表達 (EnVision免疫組化法)a：UDH組織中陰性表達，×10；b：ADH1組織中MACC1陰性表達，×20；c：DCIS組織中MACC1弱陽性表達，×10；d：DCIS組織中弱陽性表達，×20；e：淋巴結轉移陰性的IDC組織中陽性(2+)表達，×20；f：淋巴結轉移陽性的IDC組織中MACC1強陽性(3+)表達，×20

2.2 不同臨床病理特征組間MACC1蛋白表達的比較乳腺癌患者不同年齡MACC1表達率比較，差異無統計學意義(P> 0.05)； 不同腫瘤直徑、病理分級和淋巴結是否轉移的患者之間，MACC表達不同，差異有統計學意義(P< 0.05)。見表2。

表2 不同臨床病理特征組間MACC1蛋白表達的比較 [n(%)]

3 討論

Stein等[2]2009年從結腸癌細胞cDNA文庫中克隆出來一個新基因，命名為MACC1，MACC1位于人類7號染色體上(7p21.1)，由7個外顯子和6個內含子構成，其cDNA序列含有2559個核苷酸，編碼一個含有852個氨基酸殘基組成的結合蛋白。Harpaz等研究發現MACC1基因具有多種單核苷酸多態性[3]。還有研究發現MACC1在肝細胞生長因子/肝細胞生長因子受體(HGF/C-met)信號轉導通路中是一個關鍵的調節因子，在結腸癌侵襲和轉移中起著重要作用，MACC1可明顯上調C-met蛋白的表達，極大促進了腫瘤細胞的化學趨向性和侵襲性，增強了腫瘤細胞的遷移蠕動功能[4，5]。此外，在體外實驗中發現，MACC1可通過激活HGF/C-met信號通路，從而導致結腸癌細胞的增殖、遷移和侵襲能力的增強，而且在動物模型中引起結腸癌細胞移植瘤的肝轉移和肺轉移表現[4]。也有研究發現MACC1在結腸癌原發灶和轉移灶中的表達水平顯著高于結腸黏膜和結腸腺瘤，由此推測在良性病變過渡到惡性病變時(如結腸腺瘤向結腸癌轉變)，MACC1可能起到關鍵性作用；在沒有出現轉移的結腸癌患者中，MACC1表達只出現在腫瘤細胞漿內，一旦MACC1表達在腫瘤細胞核內，隨訪后發現均出現遠處轉移[6]。后續亦有報道表明，MACC1 不僅與結直腸癌轉移有關，與肝癌等也有密切關系，抑制 MACC1表達可以降低腫瘤細胞的轉移能力[7，8]。此外，MACC1還參與其他多種惡性腫瘤的發展，在胃癌、卵巢癌、肺腺癌、食管癌、前列腺癌等癌組織中過表達。

目前關于MACC1蛋白表達與乳腺癌的相關性研究相對較少。本研究結果表明MACC1 蛋白陽性表達率在乳腺癌組織中顯著高于乳腺DCIS和乳腺上皮增生組織，其陽性表達率明顯呈逐漸上升趨勢，推測MACC1蛋白高表達可能是乳腺癌發生的必要因素之一，而MACC1蛋白表達上升有可能使MACC1對腫瘤細胞生長抑制及對細胞黏附的作用減弱，使乳腺組織生長失控，從而有助于乳腺癌的發生。Ren等[9]也有類似研究，他發現在結直腸腺瘤發展為原位癌時MACC1表達上調，原位癌進展為早期浸潤癌時表達進一步增加，從而說明MACC1表達的逐步提高可能是結直腸癌發展的關鍵點，有可能單獨促進癌的發生和早期浸潤性生長。而Ashktorab等[10]的研究發現，腺瘤與癌癥患者之間 MACC1蛋白表達沒有顯著差異，而正常患者與腺瘤患者之間、正常患者與癌癥患者之間的 MACC1 蛋白表達差異具有統計學意義，由此推斷 MACC1蛋白表達水平可以評估結腸惡性病變的潛在風險并加以預防。

此外，本研究發現在乳腺癌組織中MACC1蛋白表達差異與腫瘤的病灶大小、組織學分級和淋巴結轉移有關，但與患者年齡差異比較無關。乳腺癌腫瘤直徑越大，MACC1陽性表達越高；在乳腺癌高中分化組和低分化組中，分化越差，惡性度越高，MACC1表達水平越高；有淋巴結轉移的乳腺癌組織中MACC1蛋白表達率93.10%明顯高于無淋巴結轉移的乳腺癌組織中MACC1蛋白的表達率69.23%。提示MACC1蛋白的高表達可能促進了腫瘤的發生發展，參與了乳腺癌的惡性演變過程。此結果與熊晶等[11]研究結果相一致，MACC1 表達與乳腺癌患者組織學分級、TNM 分期、淋巴結轉移、腫瘤復發顯著相關。邱麗湞等[12]的研究發現MACC1在SW480(低轉移潛能)細胞中呈弱或中等陽性表達，在SW620(高轉移潛能)細胞中呈中等陽性或強陽性表達，提示，MACC1 蛋白高表達和腫瘤細胞的轉移有關，在促進腫瘤細胞轉移中發揮著重要作用。近年來已有研究證實MACC1表達異常與腫瘤的發生及轉移有關，其在胃癌和結直腸癌等腫瘤組織中明顯高表達，并且具有促進腫瘤細胞生長和惡性轉移的作用[13，14]。由此可見，MACC1蛋白表達與否能夠預示乳腺癌患者的預后。由于臨床分期、組織分化程度與乳腺癌預后直接相關，說明MACC1基因的高表達預示腫瘤預后不良，檢測乳腺癌患者癌組織中MACC1的表達水平有助于臨床有效評價乳腺癌的惡性程度和估計預后。

總而言之，MACC1蛋白的陽性表達及表達缺失在乳腺癌的發病中具有重要作用，可為不同人群中研究乳腺癌的病因和發病學環節提供有效的分子生物學檢測指標，同時也可為臨床診斷和治療提供重要的理論依據，有望成為檢測乳腺癌的標記物和評價其預后的指標。