lncRNA DANCR作為常見惡性腫瘤潛在預后因子的Meta分析

曹揚，封佳曦，魯明，馬翔，趙慶洪

(南京醫科大學第二附屬醫院普外科，南京 210000)

根據國際癌癥研究機構的估計，隨著生育率和預期壽命的變化，全球人口呈現迅速增長和老齡化，最新數據顯示：2018年以來全球發現大約1 810萬新的癌癥病例和960萬癌癥死亡病例[1]。一般的腫瘤標志物及常規檢查在癌癥患者診斷和治療中的作用有限，因此必須找到一種新的生物標志物來預測腫瘤轉移和預后。長鏈非編碼RNA(long-chain non-coding RNA，lncRNA)是一種包含長于200個核苷酸序列的非編碼RNA。LncRNA可以調節染色體結構、基因表達，并在人類疾病的病理生理學特別是腫瘤的發生和發展過程中發揮重要作用，目前它們被定位為各種癌癥類型的潛在生物標志物[2]。分化拮抗非蛋白質編碼RNA(differentiation antagonizing non-protein coding RNA，DANCR)位于人類的第4號染色體上，是一種與腫瘤相關的lncRNA，在許多人類癌癥中表達上調[3]。研究發現，DANCR在多種癌癥中異常表達，且異常表達的DANCR與腫瘤患者的臨床病理分期和總體生存率相關[4]。但在不同種類的癌癥中，DANCR的表達與癌癥的病例特征及預后生存存在差異。本研究通過構建Meta分析模型研究DANCR表達水平與已報道的常見惡性腫瘤患者臨床預后指標的關系。

1 資料與方法

1.1檢索策略 檢索Web of Science、PubMed英文數據庫和萬方、知網中文數據庫，檢索時間為建庫至2019年11月1日。英文檢索詞包括DANCR，differentiation antagonizing non-protein coding RNA，cancer，malignant tumor，prognosis。中文檢索詞包括分化拮抗非蛋白質編碼RNA，癌癥，惡性腫瘤，患者生存，預后。

1.2納入與排除標準 納入標準：①分析DANCR的表達與人類常見癌癥預后的關系；②根據DANCR的高低表達水平對患者進行分組并描述檢測方法；③對患者的生存率進行分析并提供相應的風險比(hazard ratio，HR)和95%置信區間(confidence interval，CI)或生存曲線；④能查閱到全文的文獻。排除標準：①評論、信件、病例報道、會議摘要等無法提供原始數據的非論著文章；②數據重復或重疊研究；③樣本量小于50的研究。

1.3文獻篩選和相關數據提取 為了確保數據提取的準確性，由兩位作者(曹揚和封佳曦)分別根據納入和排除標準提取數據，有爭議的信息由第三個作者協助做出最終決定。提取的數據包括作者姓名，出版年份，國家，腫瘤類型，患者總人數以及高低表達數，DANCR檢測方法，隨訪時間，高低表達分界值，HR和95%CI。按照系統綜述和薈萃分析優先報告的條目聲明[5]的要求進行Meta分析。

1.4質量評估 使用紐卡斯爾-渥太華量表(Newcastle-Ottawa scale，NOS)評估入選文獻的質量。NOS評分范圍0～9分，項目包括納入研究對象的情況、研究對象按照病例組與對照組分類的可比性、結果的可信度3個方面[6]。NOS評分≥6分為高質量研究，即可以納入Meta分析。

1.5統計學方法 采用Stata 12.0(Stata Corp，College Station，USA)軟件進行數據分析。計數資料采用比值比(odds ratio，OR)和HR為效應量，并計算對應的95%CI。通過Cochran′s Q檢驗和HigginsI2檢驗評估納入研究的異質性，如果I2<50%或P>0.05認為無明顯異質性，采用固定效應模型；I2>50%或P<0.05認為存在異質性，采用隨機效應模型[7]。如文獻未直接給出HR和95%CI，則依據原文Kaplan-Meier曲線使用Engauge Digitizer 4.1軟件[8]和Tierney表格[9]獲得相應的HR和95%CI。進行敏感性分析檢驗結果的穩定性，繪制Begg′s檢驗的漏斗圖以及Egger′s檢驗評估納入文獻是否存在發表偏倚，P<0.05表示存在發表偏倚[10]。

2 結 果

2.1納入文獻的基本情況 共檢索文獻103篇，篩除重復文獻后剩余58篇，根據標題和摘要篩除19篇臨床研究，細讀全文后根據NOS評分及納入和排除標準繼續篩除29篇，最終納入10篇原始文獻[11-20]，共2 143例患者。文獻檢索流程見圖1。

lncRNA：長鏈非編碼RNA；DANCR：分化拮抗非蛋白質編碼RNA

2.2納入文獻基本情況 納入文獻均為英文文獻，發表年份為 2015—2019年，研究人群均來自中國且有總生存率比較，其7篇研究[11-13,17-20]給出了臨床病理資料，包括TNM臨床分期、腫瘤分化程度分級、是否淋巴結轉移或遠處轉移。納入研究所包含惡性腫瘤的類型為結腸癌[11]、胃癌[12]、胰腺導管癌[13]、肺癌[14]、腦膠質瘤[15]、三陰性乳腺癌[16]、骨肉瘤[17]、非小細胞肺癌[18]、鼻咽癌[19]和子宮頸癌[20]。納入癌癥按照人體系統分為消化系統、呼吸系統、女性生殖系統腫瘤和其他腫瘤。所有納入的研究中，患者所獲取組織均采用定量實時聚合酶鏈反應(quantitative real time polymerase chain reaction，qRT-PCR)來驗證DANCR的高低表達情況，6篇研究[11,14-15,17-18,20]人群表達量使用中位數作為臨界值，4篇[12-13,16,19]以平均數作為臨界值。其中3篇研究[11,13,19]可從原文結果直接得到HR值和95%CI，7篇研究[12，14-18,20]的HR值和95%CI從生存曲線中獲得，所有納入研究的特征見表1。

2.3DANCR表達與總體生存期的關系 各研究間異質性較小(P=0.340，I2=11.2%)，故采用固定效應模型計算總HR值，結果顯示，與DANCR低表達組患者相比，DANCR高表達組患者的總生存期較短(HR=1.26，95%CI1.18～1.34，P<0.001)，見圖2。由于納入文獻涉及的腫瘤種類較多，進一步按照腫瘤系統進行亞組分析，每組結果均未見明顯異質性，采用固定效應模型計算總HR值，結果顯示，消化道腫瘤患者DANCR高表達組的總生存期短于DANCR低表達組(HR=1.20，95%CI1.12～1.30，P<0.001)；呼吸系統腫瘤DANCR高表達組的生存期短于DANCR低表達組(HR=1.43，95%CI1.24～1.64，P<0.001)，而在其他腫瘤(HR=2.23，95%CI0.88～5.65，P=0.090)和女性生殖系統腫瘤(HR=1.86，95%CI0.88～3.91，P=0.104)患者中DANCR高表達組與DANCR低表達組的生存期比較差異無統計學意義。見圖3、表2。

表1 納入文獻基本情況

qRT-PCR:定量實時聚合酶鏈反應；HR：風險比；NOS：紐卡斯爾-渥太華量表

DANCR：分化拮抗非蛋白質編碼RNA

DANCR：分化拮抗非蛋白質編碼RNA

表2 DANCR表達與總生存期的關系

DANCR：分化拮抗非蛋白質編碼RNA

2.4DANCR表達與臨床病理特征的關系 腫瘤浸潤深度(OR=1.62，95%CI1.13～2.31，P=0.009)、腫瘤分化程度(OR=2.72，95%CI1.01～7.29，P=0.047)與DANCR高表達有關，lncRNA DANCR高表達患者的腫瘤分化程度更差，腫瘤浸潤深度更深。臨床分期(OR=1.29，95%CI0.27～6.14，P=0.747)、淋巴結轉移(OR=2.42，95%CI0.68～8.61，P=0.174)、遠處轉移(OR=1.71，95%CI0.60～4.92，P=0.317)與DANCR高表達無關。見表3。

2.5敏感性分析和發表偏倚評估 由于臨床病理指標的數據較少，本研究僅對總生存期的結果進行評估，結果顯示，納入研究的敏感性分析結果穩定，見圖4；漏斗圖顯示各項結果分布基本對稱，發表偏倚風險較小(Begg′s檢驗：P=0.929；Egger′s檢驗：P=0.053)，見圖5。

3 討 論

隨著生活環境和人們生活方式的不斷改變，腫瘤在世界范圍內的發病率越來越高，過去的十幾年中，人類基因特別是lncRNA與腫瘤發生的相關性調查成為學者們研究的熱點[21]。近年來，研究指出lncRNA在細胞分子水平上與多種腫瘤的發生發展密切相關[3-4]。已有薈萃分析表明，鋅指E盒結合蛋白反義RNA1[22]和前列腺癌相關轉錄-1[23]的表達水平與癌癥預后相關。DANCR最初被確定為表皮細胞分化過程中的抑制因子，且它在幾種類型的癌癥中發揮著致癌驅動因子的作用[24]。DANCR在很多種癌癥中上調且預示著DANCR可作為腫瘤診斷和預后相關的標志物。然而，由于這些研究都僅評估DANCR水平對單種癌癥的影響，因此，本研究從已發表的研究中提取數據進行Meta分析，以更準確地估計lncRNA DANCR的高低表達在癌癥患者中的預后價值。

表3 DANCR表達與臨床病理特征的關系

圖4 敏感性分析(總體生存率)

圖5 發表偏倚(總體生存率，Begg′s漏斗圖)

本研究結果表明：在納入的所有中國人群中，DANCR高表達的腫瘤患者腫瘤分化程度更差、浸潤深度更深，在癌癥患者生存時間上，DANCR的高表達人群總體生存率低于低表達組。在腫瘤病理特征中，高表達的DANCR患者分期更晚，更傾向于淋巴結轉移和遠處轉移，但是嚴格按照異質性的有無采取固定效應或者隨機效應模型所對應的P值差異無統計學意義，因此本研究沒有認定高表達DANCR在這幾項臨床病理特征中的作用。鑒于目前所發表的關于DANCR和癌癥患者預后的研究有限，今后需要納入更多研究來驗證DANCR在臨床分期、淋巴結轉移和遠處轉移的效應。從微觀角度分析，目前一些文獻著重研究了DANCR在腫瘤細胞分子水平的作用機制，這些研究解釋了異常表達的DACNR與腫瘤臨床預后的相關性。如Li和Zhou[15]發現在神經膠質瘤中DANCR通過激活Wnt/β聯蛋白信號通路顯著增加神經膠質瘤細胞的遷移和增殖；Wang等[17]發現DANCR作為一種競爭性內源性RNA，通過miR-335-5p和miR-1972在骨肉瘤中的誘騙作用促進Rho相關卷曲螺旋形成蛋白激酶1介導的癌細胞增殖和轉移。

盡管本研究Meta分析制訂了詳細的檢索策略和嚴格的納入、排除標準，但分析結果后仍存在一些不足：①納入的研究都是基于中國人群，且無法根據性別、年齡、種族和腫瘤大小與癌癥進展相關的因素進行亞組分析；②部分文獻中未直接給出HR值，只能通過對生存曲線計算得到，這可能會影響原始HR的準確性；③在檢索多個數據庫后納入10篇文獻總樣本量為2 143例患者，且最終所有的納入人群均為中國人群，因此無法對國外人群和種族進行分析，這可能會降低合并效應量的統計學效力；④每個DANCR高低表達分組的截止值定義不一致，因此必須建立一個標準統一的截止值。

綜上所述，DANCR在多種惡性腫瘤中高表達，而且DANCR表達水平與患者的總生存期、腫瘤浸潤深度、腫瘤病理分級有關，并總體起促癌效應。因此，DANCR可以作為多種惡性腫瘤的一種新型的預后分子標志物，未來也需要有更多的研究進一步證實和完善這一結論。