祛風(fēng)合劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

★ 李前瓊 張紅波 張靜 高長青*（.濟(jì)南市第二食品藥品檢驗檢測中心 濟(jì)南 50000；.濟(jì)南市第二婦幼保健計劃生育服務(wù)中心 濟(jì)南 50000）

祛風(fēng)合劑為萊蕪市皮膚病防治所的臨床驗方，為該院醫(yī)院制劑。祛風(fēng)合劑主要有荊芥、防風(fēng)、黃芩、蛇床子、連翹等11味中藥組成，具有祛風(fēng)清熱、利濕解毒功效，用于丘疹狀濕疹、瘙癢性扁平疣、傳染性軟疣、泛發(fā)性神經(jīng)性皮炎、接觸性皮炎等的治療。該制劑僅有性狀及裝量、相對密度、pH等合劑通則檢驗，難以達(dá)到有效控制產(chǎn)品質(zhì)量的目的。為更好地控制其質(zhì)量，本研究對制劑中防風(fēng)、連翹及蛇床子建立了薄層色譜鑒別方法，并采用高效液相色譜法對制劑中黃芩所含黃芩苷進(jìn)行了含量測定，能較為全面地控制制劑質(zhì)量。

1 儀器與試藥

1.1 儀器島津LC-20AT高效液相色譜儀，紫外檢測器；梅特勒XSE105DU電子分析天平；GoodSee-20E薄層成像系統(tǒng)（上海科哲生化科技有限公司）；KQ-250DE數(shù)控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；Milli-Q integral 3（美國Millipore）。

1.2 試藥連翹對照藥材（批號120908-201216），防風(fēng)對照藥材（批號120947-201810），蛇床子對照藥材（批號121030-201507），蛇床子素對照品（批號110822-201710），黃芩苷對照品（批號110715-201821），均購自中國食品藥品檢定研究院；祛風(fēng)合劑（規(guī)格：100mL/瓶，萊蕪市皮膚病防治所提供，批號分別為20181217、20181219、20181221）；缺連翹、防風(fēng)、蛇床子及黃芩的陰性對照品分別按處方工藝自制；甲醇為色譜純，水為超純水，其他試劑為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 薄層色譜鑒別

2.1.1 防風(fēng)薄層鑒別取祛風(fēng)合劑30mL，用乙酸乙酯振搖提取2次，每次20mL，再用水飽和的正丁醇振搖提取2次，每次30mL，正丁醇液合并蒸干，加甲醇2mL溶解殘渣，制成供試品溶液。另取缺防風(fēng)的處方按相同工藝制備陰性對照溶液。再稱取防風(fēng)對照藥材1.0g置錐形瓶中，加入20mL丙酮超聲15min，濾過，濾液蒸干，加甲醇2mL溶解殘渣，制成對照藥材溶液。分別吸取上述三種溶液5μL，點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以氯仿-甲醇（4∶1）為展開劑，展開，取出，晾干，噴10%硫酸乙醇溶液，105℃加熱2～3min，紫外光（365nm）檢視，供試品與對照藥材在相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)，陰性對照無干擾。色譜圖見圖1。

2.1.2 連翹薄層鑒別取祛風(fēng)合劑20mL，加入20mL石油醚（30～60℃）振搖提取2次，傾去石油醚液，蒸干水液，加甲醇2mL溶解殘渣，制成供試品溶液。另取缺連翹的處方按相同工藝制備陰性對照溶液。再稱取連翹對照藥材0.5g置錐形瓶中，加入20mL甲醇超聲15min，過濾，濾液蒸干，加甲醇2mL溶解殘渣，制成對照藥材溶液。分別吸取上述三種溶液5μL，點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以氯仿-甲醇（5∶1）為展開劑，展開，取出，晾干，噴10%硫酸乙醇溶液，在105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品與對照藥材在相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)，陰性對照無干擾。色譜圖見圖2。

圖1 防風(fēng)薄層色譜圖

圖2 連翹薄層色譜圖

2.1.3 蛇床子薄層鑒別取祛風(fēng)合劑20mL，加氯仿萃取2次，每次20mL，合并氯仿液，蒸干，加2mL甲醇溶解殘渣，制成供試品溶液。另取缺蛇床子的處方按相同工藝制備陰性對照溶液。再稱取蛇床子對照藥材0.5g置錐形瓶中，加入甲醇30mL超聲10min，濾過，濾液濃縮至約2mL，作為對照藥材溶液。再取蛇床子素對照品，加甲醇制成每1mL含1mg的對照品溶液。分別吸取上述四種溶液5μL，點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以甲苯-醋酸乙酯-正己烷（6∶6∶5）為展開劑，展開，取出，晾干，紫外光（365nm）檢視。供試品與對照藥材和對照品在相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)，陰性對照無干擾。色譜圖見圖3。

圖3 蛇床子薄層色譜圖

2.2 含量測定

2.2.1 色譜條件［1］色譜柱：Thermo ODS HYPERSIL C18柱（150×4.6mm，5μm）；流動相：甲醇-水-磷酸（45∶55∶0.2）；柱溫：35℃；流速：1.0mL/min；檢測波長：280nm，理論塔板數(shù)按黃芩苷峰計算不少于2500。

2.2.2 溶液制備精密稱取黃芩苷對照品0.0118g，置100mL容量瓶中，甲醇定容至刻度，即得對照品溶液；精密吸取祛風(fēng)合劑1mL，置于25mL容量瓶中，定容至刻度，即得供試品溶液；精密吸取缺黃芩的陰性樣品溶液1mL，置于25mL容量瓶中，定容至刻度，即得陰性對照溶液。

2.2.3 專屬性試驗精密吸取2.2.1項下的三種溶液各10μL，按擬訂的色譜條件進(jìn)樣。結(jié)果供試品溶液呈現(xiàn)和對照品溶液保留時間相一致的色譜峰，陰性對照溶液未出現(xiàn)與對照品溶液保留時間相一致的色譜峰，表明制劑中其他成分對黃芩苷的測定無干擾，方法專屬性好。見圖4。

圖4 專屬性試驗液相色譜圖

2.2.4 線性關(guān)系考察分別精密吸取濃度為0.1180mg/mL的黃芩苷對照品溶液1，5，10，15，20μL進(jìn)樣，記錄峰面積。以黃芩苷對照品的進(jìn)樣質(zhì)量為橫坐標(biāo)（X，μg），峰面積積分值（Y）為縱坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，得回歸方程Y= 1977419.90X-1735047.50，相關(guān)系數(shù)r=0.9991（n=5）。試驗結(jié)果表明，黃芩苷進(jìn)樣量在0.118～2.36μg之間，進(jìn)樣量與峰面積線性關(guān)系良好。

2.2.5 精密度試驗精密吸取黃芩苷對照品溶液（0.1180mg/mL）5μL，重復(fù)進(jìn)樣6次，測定峰面積。峰面積的RSD為0.49%，說明儀器精密度良好。

2.2.6 穩(wěn)定性試驗取供試品溶液（批號20181217），在0，2，4，8，12，24h時各進(jìn)樣一次，每次10μL，記錄峰面積。峰面積的RSD為1.70%，表明24h內(nèi)供試品溶液穩(wěn)定。

2.2.7 重復(fù)性試驗取供試品（批號：20181217），按2.2.2項下供試品溶液的制備方法平行制備6份，分別進(jìn)樣10μL，按擬訂的色譜條件測定。結(jié)果6份黃芩苷的含量分別為0.5521，0.5458，0.5586，0.5518，0.5549，0.5610mg/mL，平均含量為0.5540mg/mL，RSD為0.98%，表明該方法在同一條件下重復(fù)性良好。

2.2.8 加樣回收試驗精密量取已知含量的供試品溶液6份（批號：20181217，黃芩苷含量為0.5525mg/mL）各1mL，分別精密加入對照品溶液4.5mL，混勻后依法測定含量，計算回收率為99.42%，RSD為1.07%。試驗結(jié)果表明，測定方法的回收率良好。結(jié)果見表1。

表1 加樣回收率考察結(jié)果（n=6）

2.2.9 樣品含量測定取3批祛風(fēng)合劑，按2.2.2項下方法制備供試品溶液，各精密吸取10μL進(jìn)樣，按擬定的色譜條件進(jìn)行測定。結(jié)果見表2。典及相關(guān)文獻(xiàn)［2-4］對黃芩苷的提取采用50%～100%醇類溶劑提取，故本研究采用甲醇直接稀釋制備供試品溶液。還考察了不同比例的甲醇-水流動相，發(fā)現(xiàn)黃芩苷拖尾較為嚴(yán)重，加入磷酸可以顯著改善拖尾情況，分離度較好，陰性對照無干擾。

表2 黃芩苷含量測定結(jié)果（n=2） mg/mL

本研究確立了祛風(fēng)合劑中防風(fēng)、連翹、蛇床子的薄層色譜鑒別方法及黃芩中黃芩苷含量的液相色譜測定方法。試驗結(jié)果表明，方法重復(fù)性好、專屬性強(qiáng)、結(jié)果準(zhǔn)確可靠，可用于祛風(fēng)合劑的質(zhì)量控制。

3 討論

參考2015年版《中國藥典》（一部）對該制劑中的主要藥材荊芥、防風(fēng)、連翹、蛇床子等進(jìn)行了薄層色譜鑒別，其中防風(fēng)、連翹、蛇床子的薄層鑒別斑點(diǎn)清晰，陰性對照無干擾，而荊芥陰性對照有干擾，故未列入正文方法。

黃芩屬清熱燥濕藥，具有清熱燥濕、瀉火解毒等功效；用于濕熱、熱毒諸證治療，為祛風(fēng)合劑的主藥。對其指標(biāo)成分黃芩苷進(jìn)行了含量測定研究，藥