鹽酸溴己新葡萄糖注射液質量標準改進建議*

陳乃江，李 玲，王婷婷

（江蘇省連云港市食品藥品檢驗檢測中心，江蘇 連云港 222006）

鹽酸溴己新葡萄糖注射液臨床主要用于治療慢性支氣管炎及其他呼吸道疾病，如哮喘、支氣管擴張、硅肺等有黏痰而不易咳出的病癥。目前僅有江西科倫藥業有限公司和石家莊四藥有限公司生產，分別執行局頒標準YBH10902004-2016Z[1]（ 以 下 簡 稱 “標 準 1”） 和YBH04412004-2016Z[2]（以下簡稱“標準2”）。兩種標準項下均收載了性狀、鑒別、pH、有關物質、5-羥甲基糠醛、含量測定等項目。檢驗工作中發現，有些鑒別項無法執行，有些項目方法的設置和色譜條件選擇有待商榷。本研究中通過對鹽酸溴己新葡萄糖注射液2 種質量標準進行比較分析，對試驗方法進行探討，擬對鹽酸溴己新葡萄糖注射液的質量標準提出修訂建議，為該制劑標準的提高提供參考。現報道如下。

1 質量標準比較

現行鹽酸溴己新葡萄糖注射液2 種質量標準中控制限度基本一致，標準1 在鑒別項下增加了鹽酸溴己新芳香第一胺反應，在檢查項中增加了重金屬檢測；2 種標準的含量測定項下均采用高效液相色譜（HPLC）法，僅流動相體系存在差異；葡萄糖含量測定均采用旋光度測定法。2 種標準比較見表1。

表1 鹽酸溴己新葡萄糖注射液兩個版本標準比較

2 各標準項比較

2.1 鑒別項

鑒別項下芳香第一胺反應、還原糖-菲林試劑反應及HPLC 法鑒別均能完全重現，專屬性強。但2 種標準共有的氯化物鑒別不呈正反應，試驗中無法生成白色凝乳狀沉淀。原因在于，供試品溶液中Cl-質量濃度過低，鹽酸溴己新葡萄糖注射液規格為100 mL ∶4 mg，經折算Cl-質量濃度為3 μg/mL。《中國藥典》通則0801 氯化物檢查中，針對微量氯化物的限度檢查，采用的氯化鈉標準溶液為每1 mL 相當于10 μg 的Cl-，也僅產生渾濁，難以生成沉淀。試驗發現，供試品氯化物鑒別難以生成白色沉淀，現象不明顯，且專屬性不強，建議取消該項理化鑒別。

2.2 有關物質項

限度標準：鹽酸溴己新和鹽酸溴己新片是《中國藥典》收錄品種，2010 年版《中國藥典（二部）》對雜質Ⅰ未做要求，2015 年版《中國藥典（二部）》不僅對雜質Ⅰ規定了限度，對其他雜質的要求也更嚴格（見表2）。2 種局頒標準均在2016 年發布并實施，對雜質Ⅰ和其他雜質均未作要求，標準規定的總雜限度值高于2010 年版《中國藥典（二部）》，是2015 年版《中國藥典（二部）》的7 倍。2 種局頒標準不僅滯后于2010 年版《中國藥典（二部）》，對雜質的控制程度更是嚴重落后于2015 年版《中國藥典（二部）》的口服片劑標準，其潛在使用風險不容忽視，理應引起重視。

可操作性探討：標準1“有關物質”項下規定，“供試品溶液的色譜中如有雜質峰，除空白溶液峰外各雜質峰面積的和不得大于對照溶液主峰面積的2.0%”。標準2中對空白溶液峰扣除無要求。執行前者的江西科倫藥業有限公司在內部控制中，按生產工藝流程制得1 份除添加鹽酸溴己新原料以外的陰性樣品，作為空白峰扣除。作為企業可以這樣操作，但對于監督抽驗或第三方檢驗，按處方工藝生產不現實，因為不僅要考慮生產工藝高溫滅菌等，還要涉及相應批次的輔料和原料葡萄糖，在實際檢驗中不具備操作性。建議考察鹽酸溴己新有關物質時，其相關溶劑峰及輔料峰的扣除情況應在標準中予以詳細說明，便于扣除。

已知雜質的控制：2015 年版《中國藥典（二部）》[3]中，鹽酸溴己新及其制劑均增加了雜質Ⅰ的控制，國外藥典中鹽酸溴己新及其制劑對雜質C，D，F 等已知雜質進行了限度控制[4-8]。筆者考察了鹽酸溴己新中雜質Ⅰ，C，D，F，建立了色譜檢測法，4 種雜質均能達到有效分離。但當雜質含量為鹽酸溴己新0.1%時，鹽酸溴己新葡萄糖注射液制劑母液進樣，常規紫外檢測器檢測不到峰，原因在于制劑母液中鹽酸溴己新質量濃度僅為0.04 mg/mL，對應鹽酸溴己新0.1%雜質強度遠小于檢出限。由于該輸液劑含有較高濃度的葡萄糖，對母液中鹽酸溴己新進行富集和濃縮也不現實。建議必要時提高質量標準，采用液相色譜質譜聯用（LC-MS）法對鹽酸溴己新葡萄糖注射液中的已知雜質進行控制。

2.3 5-羥甲基糠醛（5-HMF）項

檢查方法：5-HMF 作為葡萄糖降解雜質之一，對人體橫紋肌和內臟有損害，且有遺傳毒性、致癌性和致突變性，屬2 類遺傳毒性雜質。2015 年版《中國藥典（二部）》中對葡萄糖注射液的檢查方法主要有紫外分光光度（UV）法和HPLC 法[9-10]，HPLC 法限度一般規定為不高于葡萄糖含量的0.02%，UV 法規定在一定濃度時吸光度不得大于0.32。2 種局頒標準均采用UV 法控制限量，優點是簡單便捷、不涉及對照品使用，缺點是供試品溶液中鹽酸溴己新主藥在284 nm 波長處有吸收。5-HMF 檢查時，供試品溶液中鹽酸溴己新的質量濃度為8 μg/mL，取鹽酸溴己新對照品配制同樣質量濃度的對照品溶液，進行掃描（見圖1），對照品溶液在284 nm 波長處的吸光度約為0.02，對5-HMF 的控制有輕微影響。HPLC 法的優點為可直觀、準確地定量分析，缺點是檢測時需要對照品，價格昂貴，需冷凍保存，該對照品低熔點近室溫，引濕性強，稱量要求較苛刻，故推薦UV 法進行5-HMF 檢查。對本品分別采用UV 法和HPLC 法測定5-HMF 含量，結果見表3。

表2 2 種標準與《中國藥典》項下有關物質限度比較

圖1 紫外分光光譜圖

表3 5-HMF 含量測定結果（%）

5-HMF 對有關物質檢查的影響：有關物質考察的是鹽酸溴己新的雜質情況，5-HMF 為葡萄糖的降解產物，在有關物質色譜條件下有較大吸收。有關物質項下5-HMF 峰是否計入一般雜質峰，目前存在爭議。有觀點認為，5-HMF 在檢查項下已明確規定，有關物質中出現的5-HMF 峰不應作雜質論，應予以扣除。另有觀點認為，標準中有關物質項下沒有明確說明5-HMF 不按雜質峰計算，且有關物質檢查和5-HMF 檢查是不同概念，兩者所用方法不同，前者用HPLC 法于249 nm波長處測定總雜，后者用UV 法于284 nm 波長處測定5-HMF 單個雜質。檢驗者一般都會把5-HMF 色譜峰作為一般雜質峰計入樣品總雜，易造成總雜超過標準規定[8]，因5-HMF 峰較大，造成有關物質不符合規定。鹽酸溴己新葡萄糖注射液的規格是為每100 mL 含溴己新4 mg、葡萄糖5 g，5-HMF 的限度值按葡萄糖0.02%計算，每100 mL 鹽酸溴己新葡萄糖注射液中5-HMF 最大允許量為1 mg。可見，5 -HMF 對有關物質測定有較大干擾，建議標準中明確有關物質檢查項中應扣除5-HMF 峰。

2.4 色譜條件

2 個局頒標準均采用HPLC 法測定鹽酸溴己新含量和有關物質，HPLC 法專屬性強、準確度高。2 個標準僅在流動相體系上存在差異，前者為甲醇-水-0.01mol/L 三乙胺甲醇溶液（95 ∶5 ∶1.5，V/ V/ V），后者為甲醇-0.05 mol/L 醋酸銨溶液（89 ∶11，V/ V）。標準1 流動相體系有機相比例為95%，水相比例偏小，在有關物質檢查時，供試品是母液（每1 mL 含50 mg 葡萄糖）進樣，遇到高比例有機相甲醇時，出現析晶粘針現象，造成色譜峰鬼峰。試驗中發現，當水相比例提高至10%時，粘針析糖現象消失，建議修訂質量標準時適當降低有機相比例，重新考察流動相體系。

3 建議

藥物雜質影響藥物的臨床使用安全性和藥品的穩定性，對其進行充分研究和控制是確保藥品安全性的必要環節。針對鹽酸溴己新葡萄糖注射液，控制主藥雜質具體范圍和明確雜質具體限值是控制該制劑質量的重點和難點。該制劑中存在鹽酸溴己新和葡萄糖2 種成分，現行2 種局頒標準均弱于2015 年版《中國藥典（二部）》鹽酸溴己新片口服制劑，且無已知雜質Ⅰ的限度控制項，故局頒標準有提高的客觀要求。100 mL 樣品中僅含主藥鹽酸溴己新4 mg，樣品盡管是母液進針，鹽酸溴己新質量濃度也僅為0.04 mg/mL，而2015 年版《中國藥典（二部）》鹽酸溴己新和鹽酸溴己新片考察雜質制備的樣品溶液濃度為2.5 mg/mL，該質量濃度級別可有效考察限值為2.0%的雜質Ⅰ，有關物質考察客觀要求供試品溶液要有一定濃度，局限性在于樣品本身就是注射劑，采用HPLC-UV 法，供試品無法達到可開展有關物質限度檢查的進樣濃度。對于注射劑，任何所謂富集和濃縮來提高濃度的手段都不現實，且除了濃度達不到要求，另一問題是，100 mL 輸液中還存在5 g 葡萄糖，葡萄糖作為另一主要成分，質量濃度是主藥鹽酸溴己新的1 250 倍，在液相色譜UV 檢測器下，50 mg/mL 葡萄糖背景系統產生的基礎噪音嚴重干擾了主藥雜質的檢測和相關雜質峰識別。基于以上考慮，對于輸液中預控制已知雜質Ⅰ和其他已知單雜C，D，F，企業只有采用更高靈敏度的LC-MS 法控制（外標法）。另外，對于總雜質的控制，只有在系統考察50 mg/mL 葡萄糖背景系統干擾情況下，必要時進行相關色譜峰區分后，可采用面積歸一化法。