超聲輔助提取山茱萸熊果酸工藝優化及其抗氧化和抑菌性

張立攀,趙夢瑤,周 莉,李鵬沖,高火亮,王法云

(河南省商業科學研究所有限責任公司,河南鄭州 450000)

隨著經濟發展和生活水平提高,人們的健康養生觀念不斷提升,藥食同源觀念逐漸受到人們重視。在我國,藥食同源具備獨特的優勢,早在2000多年前的《黃帝內經》中就提出了“藥食同源、未病先防”的觀點[1]。中國同時具有悠久的飲食和中醫藥文化,形成了獨具特色的藥食同源營養保健理念[2-3]。山茱萸(CornusofficinalisSieb. et Zucc),是我國傳統中藥材,有著悠久的用藥歷史,最早記載于《神農本草經》,有補益肝腎、澀精固脫的功效[4-6]。山茱萸在我國河南、陜西、山西、四川等地均有分布,在當地存在長期食用的歷史,如煲湯、做菜或制作果酒等,未見不良反應報道[7-8]。2018年國家衛健委發布《關于征求將黨參等9種物質作為按照傳統既是食品又是中藥材物質管理意見的函》,將山茱萸照藥食物質進行試生產,山茱萸將獲批為藥食同源物質。

山茱萸作為傳統中藥材,以往的研究多集中在藥用方面[9-10]。從普通和功能食品角度研究山茱萸,對其作為藥食同源物質的開發利用,具有積極的意義。山茱萸營養豐富,含有葡萄糖、蛋白質和氨基酸等多種人體必需的營養成分[11-12];同時,還含有環烯醚萜類、皂苷、多糖、熊果酸、齊墩果酸、鞣質等[8,13-15]等活性物質。熊果酸是山茱萸重要的質控指標,除了具有降低血糖[16-19]、抗菌[16,20-21]、抗炎[16,20-23]和抗癌[20]等生物活性,還具有明顯的抗氧化功能,是優良的天然抗氧化劑和抑菌劑[23-26]。研究表明[13],氧化應激反應對人體衰老和健康具有非常重大的影響,各種因素導致的過量自由基可以引發一系列的健康問題。因此,應用抗氧化劑對維持人體健康、延緩衰老有著積極的作用[9,13],抗氧化型功能食品是開發功能食品的重要方向[27]。因此,研究山茱萸熊果酸提取工藝及抗氧化、抗菌性能,對開發山茱萸在功能食品領域的應用,充分利用該藥食同源資源,有積極的意義。

目前熊果酸的提取方法主要有:有機溶劑回流提取、微波提取、超臨界萃取等[28-29],這些方法存在工藝復雜、效率較低等缺點。本文采用超聲細胞破碎法,通過單因素及正交試驗對從山茱萸中提取熊果酸的工藝進行了優化,同時對山茱萸熊果酸體外抗氧化性和抑菌活性進行了評價,為研究開發山茱萸熊果酸相關功能食品,提供理論參考。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

山茱萸 河南省洛陽市欒川縣山區,野生;熊果酸 HPLC≥98%,上海安譜實驗科技股份有限公司;金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、變形桿菌、枯草桿菌和黑曲霉菌 河南省商業科學研究所有限責任公司微生物實驗室提供;無水乙醇、乙酸乙酯 分析純,天津市富宇精細化工有限公司;香蘭素 分析純,天津市福晨化學試劑廠;冰乙酸 分析純,天津市科密歐化學試劑有限公司;高氯酸 分析純,州派尼化學試劑公司;DPPH(2,2-二苯基-1-三硝基苯肼) 99%,Sigma-Aldrich;抗壞血酸(VC) 99%,國藥集團;M-H藥敏試驗瓊脂平板 廣東環凱微生物科技有限公司;豬油 買自市場,新鮮煉得;其余試劑 均為市售分析純。

FA2004電子天平 上海衡際科學儀器有限公司;QJ-08B粉碎機 上海兆申科技有限公司;DHG-9052A臺式電熱干燥箱 上海捷呈實驗儀器有限公司;SCIENTZ-IID超聲細胞破碎機 寧波新芝生物科技股份有限公司;AL204-ICF分析天平 梅特勒-托利多國際貿易有限公司;RE-2000A快速旋轉蒸發儀 上海亞榮生化儀器廠;UV-8000ST雙光束紫外可見分光光度計 上海元析儀器有限公司;KW-1000DC恒溫水浴鍋 江蘇中大儀器廠。

1.2 實驗方法

1.2.1 樣品預處理 取成熟的山茱萸鮮果,經清洗處理后在-2 ℃冷凍處理25 h,然后將冷凍后的山茱萸鮮果直接加入75 ℃的熱水中煮3 min后撈出,進行脫核處理,得到山茱萸果肉;自然晾干后,粉碎機磨碎后過40目篩,于50 ℃烘干(8 h),得到山茱萸干果粉[30]。

1.2.2 山茱萸中熊果酸的超聲波輔助提取工藝 稱取一定質量的山茱萸干果粉,加入一定濃度和體積的溶劑中;然后,按照一定的超聲浸提時間、超聲浸提溫度和超聲浸提次數進行提取。提取物經過濾,少量溶劑潤洗濾渣;所有濾液合并旋干,殘留物用60%乙醇(體積比)溶解,并定容至250 mL容量瓶中,為樣品待測儲備液。

1.2.3 山茱萸熊果酸超聲輔助提取單因素實驗

1.2.3.1 超聲浸提時間對熊果酸得率的影響 溶劑中乙醇濃度恒定取60%,功率取200 W,料液比取1∶20 (g/mL),超聲浸提溫度取40 ℃,工作/間歇時間比取5 s/5 s,超聲浸提次數1次,超聲浸提時間分別取10、15、20、25、30 min,進行提取實驗,考察超聲浸提時間對熊果酸得率的影響。

1.2.3.2 溶劑中乙醇濃度對熊果酸得率的影響 功率取200 W,料液比取1∶20 (g/mL),超聲浸提時間取25 min,超聲浸提溫度取40 ℃,工作間歇時間比取5 s/5 s,浸提次數1次,溶劑中乙醇濃度分別取40%、50%、60%、70%和80%,進行提取實驗,考察溶劑中乙醇濃度對熊果酸得率的影響。

1.2.3.3 超聲功率對熊果酸得率的影響 溶劑中乙醇濃度恒定取50%,料液比取1∶20 (g/mL),超聲浸提溫度取40 ℃,超聲浸提時間取25 min,工作/間歇時間比取5 s/5 s,浸提次數1次,功率分別取100、150、200、250、300 W,進行提取實驗,考察超聲功率對熊果酸得率的影響。

1.2.3.4 超聲浸提溫度對熊果酸得率的影響 溶劑中乙醇濃度恒定取50%,功率取200 W,超聲浸提時間取25 min,料液比取1∶20 (g/mL),工作間歇/時間比取5 s/5 s,浸提次數1次,超聲浸提溫度分別取 20、30、40、50、60 ℃,進行提取實驗,考察超聲浸提溫度對熊果酸得率的影響。

1.2.3.5 料液比對熊果酸得率的影響 溶劑中乙醇濃度恒定取50%,功率取200 W,超聲浸提時間取25 min,超聲浸提溫度取40 ℃,工作/間歇時間比取5 s/5 s,浸提次數1次,料液比分別取1∶15、1∶20、1∶25、1∶30、1∶35 (g/mL),進行提取實驗,考察料液比對熊果酸得率的影響。

1.2.3.6 工作/間歇時間比對熊果酸得率的影響 溶劑中乙醇濃度恒定取50%,功率取200 W,超聲浸提時間取25 min,超聲浸提溫度取40 ℃,料液比取1∶25 (g/mL),浸提次數1次,工作/間歇時間比分別取1 s/5 s、3 s/5 s、5 s/5 s、7 s/5 s、9 s/5 s、10 s/5 s,進行提取實驗,考察工作/間歇時間比對熊果酸得率的影響。

1.2.3.7 浸提次數對熊果酸得率的影響 溶劑中乙醇濃度恒定取50%,功率取200 W,超聲浸提時間取25 min,超聲浸提溫度取40 ℃,料液比取1∶25 (g/mL),工作間歇時間比取7 s/5 s,浸提次數分別取1、2、3、4,進行提取實驗,考察浸提次數對熊果酸得率的影響。

1.2.4 山茱萸熊果酸超聲波輔助提取的正交試驗 根據單因素實驗結果,固定超聲浸提溫度為40 ℃,料液比為1∶25 (g/mL),浸提次數為2次,以熊果酸得率為正交試驗的評價指標,選取時間、乙醇濃度、功率和超聲工作/間歇時間比四個因素設計四因素三水平正交試驗。正交試驗設計的因素水平見表1。

表1 正交試驗因素水平Table 1 Factors and levels of orthogonal test

1.2.5 熊果酸得率的測定

1.2.5.1 標準曲線的繪制 采用分光光度法測量[16]。稱取約0.02 g熊果酸標準品,用無水乙醇定容至50 mL容量瓶中,得到熊果酸標準溶液。分別吸取0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.6、0.7 mL熊果酸標準溶液于10 mL比色管,加熱去除乙醇。冷卻后,分別加入0.8 mL 5%香蘭素冰乙酸溶液、2 mL高氯酸。放置于60 ℃水浴中保溫30 min左右,冷卻至室溫,用乙酸乙酯定容至10 mL。在波長546 nm處測定吸光度,以吸光度和濃度建立標準曲線。測定熊果酸的標準曲線為:y=37.862x-0.0188,R2=0.9991。

1.2.5.2 熊果酸含量的測定 吸取0.5 mL樣品儲備液加入到10 mL比色管,加熱去除乙醇。冷卻后,分別加入0.8 mL 5%香蘭素冰乙酸溶液、2 mL高氯酸。放置于60 ℃水浴中保溫30 min左右,冷卻至室溫,用乙酸乙酯定容至10 mL。在波長546 nm處測定吸光度。根據式(1)計算山茱萸提取物熊果酸得率。

式(1)

式中:w為熊果酸得率,%;c為測定液中熊果酸的濃度,mg/mL;m為稱取的山茱萸粉樣品的質量,g;5為換算系數。

1.2.6 山茱萸熊果酸的初步提純 參考文獻[16]并進行修改。采取正交優化后的組合條件得到山茱萸熊果酸提取液,將該儲備液濃縮至原體積的三分之一以下,靜置,以轉速4000 r/min離心15 min得到沉淀物1;使用無水乙醇在超聲下重新溶解沉淀物,然后加入1∶1體積的水,靜置沉淀,經3000 r/min離心10 min后得到沉淀物2,經水洗,在50 ℃下真空干燥后,得到初步提純的熊果酸,用無水乙醇以1 g∶2000 mL的比例制成待測液,按照1.2.5.2進行熊果酸純度的測定。初步提純的山茱萸熊果酸,可用于活性測定研究。

1.2.7 山茱萸熊果酸體外抗氧化活性測定

1.2.7.1 還原能力 以山茱萸熊果酸初步提純產物作為樣品,參考文獻[31],以相同濃度的VC溶液作陽性對照,進行還原能力的測定,還原能力計算按如下公式:

H=A1-A2

式中:H:還原能力;A1:樣品吸光度;A2:空白組吸光度。

1.2.7.2 清除DPPH·能力 參考文獻[32]的方法,用無水乙醇代替甲醇,配制0.1 mmol/L 的DPPH溶液,移取1 mL不同濃度的樣品溶液于10 mL試管中,加入2 mL蒸餾水和2 mL DPPH溶液,搖勻后室溫放置 20 min,于517 nm測吸光值A4,相同體積的蒸餾水和DPPH溶液混勻后的吸光值為A0,1 mL樣品溶液和2 mL蒸餾水與2 mL無水乙醇混勻后的吸光值為A3,平行測定3次,取平均值。以VC作陽性對照,按如下公式計算DPPH·的清除率:

式中,R:自由基清除率,%;A4:樣品吸光度;A3:對照組吸光度;A0:空白組吸光度。

1.2.7.3 清除·OH能力 參考文獻[33]的方法,取1.5 mL不同質量濃度的樣品溶液,分別加入1.0 mL 2.5 mmol/L的水楊酸溶液、1.0 mL 5 mmol/L的FeSO4溶液和2.0 mL蒸餾水,充分混勻,加入1.0 mL 5 mmol/L的H2O2,置于37 ℃恒溫水浴鍋中反應30 min,再置于510 nm波長處測定其吸光度,以蒸餾水作空白對照,同時以VC作陽性對照。按如下公式計算·OH清除率:

羥自由基清除率(%)=[空白對照吸光度-(加H2O2樣品溶液吸光度-不加H2O2樣品溶液吸光度)]/空白對照吸光度×100

1.2.7.4 對豬油的抗氧化能力 參考文獻[34]的方法,以空白油脂為對照,將添加量為0.25%、0.5%和0.75%的山茱萸熊果酸與0.25% VC處理的豬油進行對比;豬油樣品過氧化值測定參照GB/T 5538-2005 的碘量法,進行測定。

1.2.8 山茱萸熊果酸抑菌試驗

1.2.8.1 藥敏試驗 參考文獻[21]的方法,取直徑為6 mm的無菌空白紙片,121 ℃高壓蒸汽滅菌15 min,待用。取20 μL用無菌水制備的50 mg/mL熊果酸溶液,滴加于滅菌的空白紙片上,備用。采用紙片瓊脂擴散法測定抑菌活性,將菌株菌液調整為1.0×108CFU/mL,涂布于M-H平板上,將熊果酸紙片貼于 M-H 平板上,以無菌水作為空白對照,置于37 ℃培養箱 16～24 h,測量抑菌圈直徑。

1.2.8.2 MIC 測定 采用無菌MH肉湯培養基制備稀釋系列,用對倍稀釋法進行測定。將山茱萸熊果酸配制成100、50、25、12.5、6.25、3.125 mg/mL藥液,以不加藥液為陽性對照,各試管的菌液接種量均為2×106CFU/mL,同時設置不加藥液、不接種菌的為陰性對照,37 ℃培養 24 h,取出觀察,以濃度低而無肉眼可見菌生長的一管濃度為山茱萸熊果酸對該菌的MIC[35]。

1.3 數據處理

所有實驗均平行進行三次,實驗數據以Excel 2013進行作圖和統計分析,正交試驗以正交設計助手II V3.1進行實驗設計和數據的統計分析。

2 結果與討論

2.1 單因素實驗

2.1.1 超聲浸提時間對熊果酸得率的影響 由圖1可知,隨著超聲浸提時間的增加,熊果酸得率呈現出先上升后下降的趨勢。當浸提時間為25 min時,得率最大。隨著時間的延長,進入到溶劑中的熊果酸分子增多,但熊果酸與周圍溶劑之間存在傳質平衡,當平衡達到之后,再增加時間,由于其他雜質的不斷溶出,反而對熊果酸的溶解產生了影響,導致熊果酸得率在25 min后呈下降趨勢[29]。故選擇浸提時間為25 min。

圖1 提取時間對山茱萸熊果酸提取得率的影響Fig.1 The effect of extraction time on the yield ofursolic acid from Cornus officinalis

2.1.2 乙醇濃度對熊果酸得率的影響 由圖2可知,隨著乙醇濃度的增加,熊果酸的提取得率增加,當乙醇濃度為50%時,達到最大值,再增加乙醇濃度,熊果酸得率反而下降。由相似相溶原理可知,當溶劑極性與熊果酸的極性相近時,熊果酸易于溶解。50%乙醇溶液的極性與熊果酸較為接近,而乙醇濃度減小或增大時都會導致極性相差變大,所以得率較低[29]。故選擇乙醇濃度為50%。

圖2 乙醇濃度對山茱萸熊果酸提取得率的影響Fig.2 The effect of alcohol concentration on theyield of ursolic acid from Cornus officinalis

2.1.3 超聲功率對熊果酸得率的影響 圖3顯示,隨著功率的增大,山茱萸中熊果酸的得率起初迅速上升,達到200 W時,得率達到最大,之后反而呈下降的趨勢。功率超過200 W時,由于細胞破碎程度過高,導致原本擴散較慢的其他成分分子擴散速率大幅提高,影響了熊果酸分子本身的擴散速率,反而不利于熊果酸的提取。因此功率過大時得率反而下降。故選擇功率為200 W。

圖3 超聲功率對山茱萸熊果酸提取得率的影響Fig.3 The effect of ultrasonic power on theyield of ursolic acid from Cornus officinalis

2.1.4 溫度對熊果酸得率的影響 由圖4可知,得率隨著溫度的增大呈現出先上升后下降的趨勢。在溫度為40 ℃時得率最大。當溫度較低時,分子擴散速度較慢,進入溶劑中的熊果酸分子較少,隨著溫度升高,分子運動加快,使得溶劑中熊果酸溶解增多。但溫度過高時,部分多糖和蛋白質物質開始大量溶出,對熊果酸的溶解產生了抑制作用,導致得率降低。故選擇提取溫度為40 ℃。

圖4 溫度對山茱萸熊果酸提取得率的影響Fig.4 The effect of extraction temperature on theyield of ursolic acid from Cornus officinalis

2.1.5 料液比對熊果酸得率的影響 圖5顯示熊果酸得率隨料液比的變化趨勢。當料液比由1∶15 (g/mL)變為1∶25 (g/mL)的過程中,隨著料液比的增加，擴散進入溶劑的熊果酸分子不斷增多,得率逐漸升高,在1∶25 (g/mL)時達到峰值;而料液比高于1∶25 (g/mL)后,其他雜質的溶出增多,影響熊果酸分子的溶出程度,得率呈現出下降的趨勢。故選擇料液比為1∶25 (g/mL)。

圖5 料液比對山茱萸熊果酸提取得率的影響Fig.5 The effect of ratio of solid to liquid on theyield of ursolic acid from Cornus officinalis

2.1.6 工作/間歇時間比對熊果酸得率的影響 由圖6可知,熊果酸得率隨著超聲工作/間歇時間比的增大呈現出先增大后減小的趨勢。超聲細胞破碎的過程中會釋放出能量使得體系溫度升高。當間歇時間過短時,體系溫度來不及降低,不利于條件控制;同時,由于連續工作時間過長,超聲導致的分子碰撞作用力可能破壞熊果酸的物質結構,反而使得總的得率下降[36]。而間歇時間過長時,實際工作的時間相對來說又縮短,導致得率都會受到影響。故選擇超聲工作/間歇時間比為7 s/5 s。

圖6 工作間歇時間比對山茱萸熊果酸提取得率的影響Fig.6 The effect of the ratio of treatment to intermissionon the yield of ursolic acid from Cornus officinalis

2.1.7 浸提次數對熊果酸得率的影響 由圖7可知,隨著浸提次數的增加,熊果酸得率增加。當提取次數為2次時,得率增加較大,繼續增加提取次數,得率雖然仍呈現出增大的趨勢,但增幅不明顯。故綜合考慮成本及操作的簡便,選取浸提次數為2次。

圖7 浸提次數對山茱萸熊果酸提取得率的影響Fig.7 The effect of extraction times on theyield of ursolic acid from Cornus officinalis

2.2 山茱萸中熊果酸提取的正交試驗

依據單因素實驗的結果,選取影響較大的超聲時間、乙醇濃度、超聲功率、超聲工作/間歇時間比這四個因素,選取不同的實驗水平,設計正交試驗進一步找出最佳的熊果酸提取工藝。正交試驗結果如表2所示。

表2 正交試驗結果Table 2 Results of orthogonal experiment

由表2可知,這四種因素對熊果酸提取的影響大小排序為:超聲時間>超聲工作/間歇時間比>超聲功率>乙醇濃度。通過表3可知,超聲時間和超聲工作/間歇時間比這兩個因素具有顯著性,說明其對采用超聲輔助法從山茱萸中提取熊果酸的影響較大,起到主要的作用。正交優化所得到的最佳提取條件組合為A2B2C3D3,即提取時間為25 min,乙醇濃度為50%,超聲功率為225 W,超聲工作/間歇時間比為8 s/5 s。為驗證正交設計試驗的結果,在此最優條件下進行3次平行試驗,得率平均值達到13.16%。

表3 方差分析Table 3 Variance analysis

由最佳工藝得到提取物按照1.2.6進行提純,所得山茱萸熊果酸的純度達78%,用于活性測定。

2.3 山茱萸熊果酸抗氧化活性

2.3.1 山茱萸熊果酸還原能力測定 還原能力是評價物質抗氧化活性的重要指標[30]。由圖8可知,山茱萸熊果酸具有明顯的還原能力,但在相同濃度下山茱萸熊果酸還原能力要弱于VC,并且0.04 mg/mL山茱萸熊果酸的還原能力與0.01 mg/mL的VC相當。

圖8 山茱萸熊果酸的還原能力Fig.8 Reducing powers of ursolic acid from Cornus officinalis

2.3.2 山茱萸熊果酸對DPPH·清除能力 由圖9可知,山茱萸熊果酸和VC對DPPH·都具有明顯的清除能力。當濃度從0.01 mg/mL上升至0.06 mg/mL時,山茱萸熊果酸對DPPH·的清除率隨著濃度增加而逐漸增大;當濃度大于0.06 mg/mL時,茱萸熊果酸對DPPH·的清除率變化幅度較小,清除率與VC接近。當山茱萸熊果酸的濃度為0.1 mg/mL時,清除率最大為88.1%。

圖9 山茱萸熊果酸對DPPH·的清除能力Fig.9 Scavenging effects of ursolic acidfrom Cornus officinalis on DPPH·

2.3.3 山茱萸熊果酸對·OH清除能力 由圖10可知,山茱萸熊果酸對·OH具有明顯的清除能力。相同濃度下,山茱萸熊果酸對·OH的清除能力要小于VC。在0.01～0.04和0.06～0.1 mg/mL兩個濃度范圍內,山茱萸熊果酸對·OH的清除率與濃度基本呈線性關系變化。當山茱萸熊果酸的濃度為 0.1 mg/mL時,對·OH清除率最大為68.6%。

圖10 山茱萸熊果酸對·OH的清除能力Fig.10 Scavenging effects of ursolic acidfrom Cornus officinalis on hydroxyl

2.3.4 山茱萸熊果酸豬油抗氧化性試驗 由圖11可知,山茱萸熊果酸和VC對豬油都有抗氧化作用。隨著山茱萸熊果酸使用量的增加,對豬油的抗氧化能力增強;當山茱萸熊果酸的添加量達到0.75%時,對豬油的抗氧化能力,與添加濃度為0.25%的VC接近。

圖11 山茱萸熊果酸對豬油的抗氧化效果Fig.11 Antioxidant effect of ursolic acidfrom Cornus officinalis lard

綜上所述,在不同方法的抗氧化實驗中,山茱萸熊果酸均體現出了抗氧化活性,由于山茱萸熊果酸對不同自由基的清除機制各有不同,其抗氧化指標也表現不同。因此,需要結合多種方法來對其抗氧化能力進行綜合評價。

2.4 山茱萸抑菌活性實驗

2.4.1 山茱萸中熊果酸對5種標準菌株藥敏試驗 由表4可知,山茱萸熊果酸對食品領域常見的金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、變形桿菌、枯草桿菌和黑曲霉菌均有抑制作用,對5種菌的抑菌能力大小為:大腸桿菌>金黃色葡萄球菌>枯草桿菌>變形桿菌>黑曲霉菌。

表4 山茱萸熊果酸抑菌直徑Table 4 Inhibitory zone diameters of ursolic acidfrom Cornus officinali against different microorganisms

2.4.2 山茱萸中熊果酸對各種試驗菌株的MIC測定 由表5可見,對不同菌,山茱萸熊果酸達到一定濃度才顯示出抑菌活性。山茱萸熊果酸對大腸桿菌的MIC為6.25 mg/mL,對金黃色葡萄球菌和枯草桿菌的MIC為12.5 mg/mL,對變形桿菌、黑曲霉菌的MIC為25 mg/mL。

表5 熊果酸對標準菌株的MIC值Table 5 MIC of ursolic acid fromCornus officinalis against different strains

3 結論

采用單因素實驗,對各因素對熊果酸得率的影響趨勢進行了研究,然后在單因素實驗的基礎上,選取出四種主要因素,通過設計正交試驗進一步優化得到山茱萸中熊果酸提取的最佳工藝條件。結果表明:幾種因素對提取的影響大小排序為超聲時間>超聲工作/間歇時間比>超聲功率>乙醇濃度,最佳的提取工藝條件為:提取時間25 min,乙醇濃度50%,超聲功率225 W,超聲工作/間歇時間比8 s/5 s,提取次數2次,溫度40 ℃,料液比1∶25 (g/mL)。在此優化條件下進行驗證試驗,測定平均得率可達13.16%。

山茱萸熊果酸具有明顯的抗氧化能力:山茱萸熊果酸對DPPH·和·OH都具有明顯的清除能力,0.04 mg/mL山茱萸熊果酸的還原能力與0.01 mg/mL的VC相當;濃度大于0.06 mg/mL時,茱萸熊果酸對DPPH·的清除率與VC接近,當濃度為 0.1 mg/mL時,對DPPH·清除率最大為88.1%;在0.01～0.04和0.06～0.1 mg/mL兩個濃度范圍內,山茱萸熊果酸對·OH的清除率與濃度基本呈線性關系,當濃度為 0.1 mg/mL時,清除率最大為68.6%;山茱萸熊果酸對豬油有抗氧化作用,當山茱萸熊果酸的添加量達到0.75%時,對豬油的抗氧化能力,與添加濃度為0.25%的VC接近。

山茱萸熊果酸具有較強的抑菌作用,5種菌的抑菌能力大小為:大腸桿菌>金黃色葡萄球菌>枯草桿菌>變形桿菌>黑曲霉菌;對大腸桿菌的MIC為6.25 mg/mL,對金黃色葡萄球菌和枯草桿菌的MIC為12.5 mg/mL,對變形桿菌、黑曲霉菌的MIC為 25 mg/mL。