糖漿劑和合劑中防腐劑限量檢查方法的研究

(荊州市食品藥品檢驗(yàn)所,湖北荊州 434000)

糖漿劑和合劑是藥物以一定形式分散于液體介質(zhì)中所制成的供口服的液體分散體系。具有分散度大，吸收快；易于分劑量，服用方便；減少某些藥物的刺激性等優(yōu)點(diǎn)。是應(yīng)用廣泛的制劑類(lèi)型。糖漿劑和合劑可能由于制劑和使用過(guò)程引入污染源，加入防腐劑是最為方便有效的措施。然而超量使用防腐劑存在中毒、致癌等健康風(fēng)險(xiǎn)，中國(guó)藥典2015版四部制劑通則中糖漿劑和合劑明確規(guī)定了苯甲酸和山梨酸用量不得過(guò)0.3%，羥苯酯類(lèi)用量不得過(guò)0.05%[1]。本方法旨在采用高效液相色譜法限量檢測(cè)糖漿劑和合劑中的苯甲酸、山梨酸、羥苯甲酯、羥苯乙酯、羥苯丙酯和羥苯丁酯。

1 儀器與試劑

高效液相色譜儀：Thermo Ultimate3000；對(duì)照品苯甲酸（北京壇墨質(zhì)檢科技有限公司，批號(hào)A1707298）、山梨酸（中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)190126-201501）、羥苯甲酯（中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)100278-201404）、羥苯乙酯（中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)100847-201203）羥苯丙酯（中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)100444-201403）、羥苯丁酯（中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)110792-200503）；甲醇為色譜純，水為重蒸水，其余試劑為分析純；陰性樣品由實(shí)驗(yàn)室自制；樣品來(lái)源于本所日常檢驗(yàn)之樣品。

2 方法與結(jié)果

2.1 混合對(duì)照品溶液的制備

精密稱(chēng)取苯甲酸、山梨酸、羥苯甲酯、羥苯乙酯、羥苯丙酯和羥苯丁酯對(duì)照品，加流動(dòng)相B制成每1ml分別含苯甲酸60μg、山梨酸60μg、羥苯甲酯10μg、羥苯乙酯10μg、羥苯丙酯10μg、羥苯丁酯10μg的混合對(duì)照品溶液。

2.2 供試品的制備

精密量取樣品1ml，加濃鹽酸200μl振搖后用乙醇定容至50ml，振搖后靜置，取上清液過(guò)0.45μm濾膜濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。

2.3 色譜條件

色譜柱：十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑的色譜柱(5μm 4.6×250mm)；流動(dòng)相：以甲醇為流動(dòng)相A，0.02mol/L醋酸銨（含0.2%甲酸）-甲醇（85∶15）為流動(dòng)相B；按表1梯度洗脫；流速：1.0ml·min-1；柱溫：40℃；檢測(cè)器：二極管陣列檢測(cè)器；檢測(cè)波長(zhǎng)：228nm、256nm；進(jìn)樣量20μl。

2.4 專(zhuān)屬性考察

取樣品和陰性樣品，按2.2項(xiàng)下方法處理。分別取混合對(duì)照品溶液、樣品溶液和陰性對(duì)照樣品20μl注入高效液相色譜儀，照2.3項(xiàng)下色譜條件檢測(cè)。從色譜圖可見(jiàn)該方法的專(zhuān)屬性較好，色譜圖見(jiàn)圖1、2。

2.5 檢測(cè)限考察

以對(duì)照品溶液進(jìn)樣，信噪比為3∶1時(shí)的確定進(jìn)樣量4ng為檢測(cè)限。

圖1 228nm高效液相色譜圖

圖2 256nm高效液相色譜圖

表1 梯度洗脫條件

表2 穩(wěn)定性考察

表3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.6 穩(wěn)定性考察

取對(duì)照品溶液，分別在0、2、4、6、8、10小時(shí)時(shí)測(cè)定其峰面積，結(jié)果表明在10小時(shí)內(nèi)各成分有較好的穩(wěn)定性，結(jié)果見(jiàn)表2。

2.7 樣品限量檢查

取本所日常檢驗(yàn)之19批次樣品按2.2項(xiàng)下處理，按2.3項(xiàng)下方法檢測(cè)限量，檢測(cè)結(jié)果根據(jù)中國(guó)藥典2015版四部制劑通則中糖漿劑和合劑限量規(guī)定判定，實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表3。

3 討論

3.1 色譜條件的選擇

檢測(cè)波長(zhǎng)：考慮苯甲酸、山梨酸、羥苯甲酯、羥苯乙酯、羥苯丙酯和羥苯丁酯最大吸收波長(zhǎng)差別較大且山梨酸、羥苯甲酯、羥苯乙酯、羥苯丙酯和羥苯丁酯最大吸收波長(zhǎng)時(shí)苯甲酸響應(yīng)值較小不適宜計(jì)算，綜合考慮選擇雙波長(zhǎng)（228nm、256nm）一次檢測(cè)。流動(dòng)相：經(jīng)預(yù)試驗(yàn)，在流動(dòng)相加入醋酸有助于改善苯甲酸、山梨酸、羥苯甲酯的峰形和分離度。將0.02mol/L醋酸銨（含0.2%甲酸）與甲醇（85∶15）預(yù)先混合的目的是為了避免醋酸銨在梯度洗脫中因?yàn)橛袡C(jī)相變化比例太大對(duì)儀器和色譜柱造成影響。流動(dòng)相的梯度比例和時(shí)間是經(jīng)過(guò)大量的預(yù)試驗(yàn)最終確定的，主要是考慮大部分樣品在前20分鐘有大量的雜峰出現(xiàn)以及讓山梨酸和羥苯甲酯達(dá)到最佳分離度，而本研究過(guò)程中的難點(diǎn)也是山梨酸和羥苯甲酯的分離度。

3.2 小結(jié)

采用本方法檢測(cè)本單位日常抽檢之樣品，19批次中竟有15批次防腐劑用量超出限量，而中國(guó)藥典2015年版只對(duì)糖漿劑和合劑中防腐劑使用種類(lèi)和用量做出了限制性規(guī)定，卻沒(méi)有提供法定的檢測(cè)方法，給目前的檢測(cè)工作帶來(lái)極大困擾。本方法在參考其他現(xiàn)行行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)[2，3]的基礎(chǔ)上采用HPLC梯度洗脫的方法將糖漿劑和合劑中的限定使用的6種防腐劑成功分離，經(jīng)驗(yàn)證專(zhuān)屬性、耐用性好，檢出限滿足限量要求，適用于日常檢驗(yàn)工作，為糖漿劑、合劑及其他液體制劑生產(chǎn)過(guò)程中質(zhì)量控制和產(chǎn)品檢測(cè)提供了方法。