過量抗生素致小鼠腸道微環境變化的研究

房雅瑋?朱述英

摘要：目的：通過觀察頭孢曲松鈉對小鼠腸道菌的影響，為指導臨床合理用藥提供數據支持。方法：對實驗動物予以不同劑量頭抱曲松鈉灌胃，每天兩次，連續四天，實驗第28天取盲腸內容物檢測大腸桿菌、腸球菌、乳酸桿菌、雙歧桿菌的菌落數。結果：實驗組小鼠腸道內4種細菌的數量明顯改變，其中大腸桿菌、腸球菌數量明顯增加，而乳酸桿菌和雙歧桿菌明顯減少，表示腸道內正常菌群的平衡遭到破壞，形成了菌群失調。結論：長期使用抗生素可使腸道中厭氧菌數量驟減或消失，其抗感染和調節腸菌群等作用隨之減弱或消失，需氧菌或兼性厭氧菌數量增加使腸道菌群發生了量和質的變化。

關鍵詞：過量;抗生素;腸道微環境

1 引言

抗生素于20世紀40年代首次現身時，被人們驚呼為“神藥”，對感染性疾病治愈率較高，近年來廣泛應用于臨床。隨著抗生素的廣泛應用，其不良反應越來越受到人們的重視。在眾多不良反應中，抗生素相關性腹瀉（antibiotic-as-sociated diarrhea，AAD）相對普遍和嚴重。普遍認為AAD的發生與腸道菌群失調有關，這主要見于長期應用廣譜抗生素治療的患者，其體內對抗生素敏感的細菌被大量殺滅，而不敏感的細菌，如金葡菌、白色念珠菌等則乘機繁殖，引起假膜性腸炎、白色念珠菌性肺炎等，這些疾病臨床上也稱二重感染。

本實驗通過觀察頭孢曲松鈉對小鼠腸道菌的影響，為指導臨床合理用藥提供數據支持，減少患者的內源性感染。

2 實驗材料與方法

2.1 實驗材料

厭氧菌基礎培養基（用于稀釋糞便標本），伊紅美藍瓊脂培養基（用于選擇大腸桿菌），麥康凱瓊脂培養基（用于選擇腸球菌），乳酸桿菌選擇性瓊脂培養基（用于選擇乳酸桿菌），雙歧桿菌培養基（用于選擇雙歧桿菌）;頭抱曲松鈉（商品名羅氏芬）（上海羅氏制藥有限公司出品）;lml注射器（青島蘭威生物制品公司生產）;普通級純系雄性昆明小鼠（購于青島市試驗動物與動物實驗中心，許可證：SCXK（魯）20030010）。

2.2 實驗儀器設備

電子天平：德國Mettler公司PM460

超凈工作臺：蘇州凈化設備公司

電熱恒溫箱：上海國光醫化儀器廠

2.3 實驗方法

2.3.1 造模及給藥

30只小鼠適應10天后，將動物分為三組，分別是正常對照組10只，實驗低劑量組10只，實驗高劑量組10只，對兩個實驗組動物予以頭抱曲松鈉灌胃，每天兩次，連續四天，對照組動物給予生理鹽水灌胃。低、高劑量分別是每千克動物給藥500mg、1000mg。

實驗第28天，頸椎脫臼法處死全部動物。

2.3.2 樣品收集

上述各組小鼠處死后，在無菌條件下剖檢，均取盲腸內容物檢測4種細菌的菌落數。取盲腸內容物置于無菌含玻璃珠的小瓶內，加一定倍數的稀釋液后在振蕩器上振蕩15min，使樣品呈均質狀。然后連續10倍稀釋（10-2～10-7），選二個稀釋度用滴注法分別接種于伊紅美藍瓊脂培養基（EMS）、麥康凱瓊脂培養基、乳酸桿菌選擇性培養基、雙歧桿菌培養基上，7℃培養72h，然后觀察結果。

2.4 統計學處理

采用SPSS22.0統計軟件對以上檢測所得數據進行統計處理，各組數據均采用“均數±標準差（）”的形式表示，用t檢驗進行分析。

3 實驗結果與分析

3.1 小鼠表觀特征觀察

正常對照組小鼠攝食飲水正常，行動活躍，被毛平整光滑。各實驗組小鼠攝食下降，行動遲緩，皮毛失去光澤。

3.2 腸道菌群的變化

如表1所示，與正常對照組小鼠腸道菌群比較，實驗組小鼠給藥后，小鼠腸道內4種細菌的數量明顯改變，其中大腸桿菌、腸球菌數量明顯增加，而乳酸桿菌和雙歧桿菌明顯減少，表示腸道內正常菌群的平衡遭到破壞，形成了菌群失調。

4 討論

胃腸道的正常菌群構成了一道抵御外界病菌入侵的天然屏障，對人體的健康有重要意義。微生物種群的生物拮抗作用，是維持微生態平衡所必需的。正常情況下，腸道菌群保持相對穩定，以厭氧菌為主的腸道原籍菌與腸粘膜緊密粘附，產生定植抗力（Colonizationresistanee，CR），并借助于固有的腸粘膜屏障和腸道內的殺菌物質及免疫系統，共同防止外籍菌的粘附和定植，維持腸道內微生態環境的平衡。正常腸道內環境是一種厭氧、PH及氧化還原電勢（Eh）較低的狀態，有利于厭氧菌和兼性厭氧菌大量繁殖，而過路菌、外襲菌在腸道內定植、繁殖受到抑制和拮抗。特別是雙歧桿菌和乳酸桿菌是腸道內的重要生理菌，通過營養爭奪、產生各種有機酸降低腸道局部PH，產生具有廣譜抗菌作用的物質如親脂分子（1ipophiliemoleeuzes）、小菌素（mieroesn）、過氧化氫等，對腸道內的潛在致病菌起抑制或殺滅作用，在正常情況下能發揮生物屏障與拮抗作用。現已明確，以雙歧桿菌、乳酸桿菌為主的專性厭氧菌定植于腸粘膜上皮，能阻止條件致病菌（多為G一桿菌與球菌）對腸粘膜的戮附和定植，具備所謂的定植抗力，是防止細菌或（和）內毒素易位進而發生腸源性感染的重要因素。

5 結論

長期使用抗生素可使腸道中厭氧菌數量驟減或消失，其抗感染和調節腸菌群等作用隨之減弱或消失，需氧菌或兼性厭氧菌數量增加，腸道內含氧量升高，即有利于外襲菌的定植、繁殖。隨著用藥時間的延長，小鼠腸道的雙歧桿菌和乳酸桿菌數量也隨之下降，腸道菌群發生了量和質的變化。

參考文獻：

[1] 熊德鑫.現代微生物學[M].北京：中國科學技術出版社，2000.

[2] 丁秀芹菜.抗生素的過量使用與細菌耐藥性關系研究[J].中國醫藥導報，2011（29）.

指導老師：朱述英（1983—），女，山東滕州人，碩士，副教授，研究方向：中藥藥理學。

（作者單位：山東協和學院）