酶底物法檢測生活飲用水總大腸菌群的效果觀察

馬惘卿 包蕾（通訊作者） 吳林蔚 向正華 鄭超

（云南省玉溪市疾病預(yù)防控制中心 云南 玉溪 653100）

生活飲用水能夠維持人體細(xì)胞形成，促進(jìn)身體機(jī)能新陳代謝，還能夠調(diào)節(jié)細(xì)胞組織和血液。按照我國食品安全標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定顯示，在飲用水中不再保留菌落總數(shù)。過度殺菌或者控制衛(wèi)生指示菌可能會在一定程度上增加飲用水當(dāng)中的酸鹽含量，導(dǎo)致風(fēng)險因素發(fā)生。飲用水能夠促進(jìn)人體吸收，并且將體內(nèi)廢棄物排除掉[1]。生活飲用水會直接影響人們的生活與生存，加大飲用水微生物檢測力度，能夠提升飲用水安全性。此次研究主要是探討分析生活飲用水總大腸菌群檢驗使用兩種不同檢驗方法的應(yīng)用效果，現(xiàn)將此次研究報告作如下匯報：

1.資料與方法

1.1 一般資料

選擇某檢驗科所抽檢的水樣共計500 份，隨機(jī)分為對照組和研究組，每組共有水樣250 份。對飲用水進(jìn)行細(xì)菌檢驗，采集水樣于相應(yīng)試管內(nèi)。

1.2 方法

對照組水樣采用總大腸菌群多管發(fā)酵法，具體如下：此種方法需要通過生化培養(yǎng)，選取10ml 水樣共計5 份，接種于乳糖蛋白胨培養(yǎng)液中（10ml），之后選取樣本接種到乳糖蛋白胨培養(yǎng)液中，選擇樣本于生理鹽水中混合均勻，選擇樣本于培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)。對處理的水樣進(jìn)行檢測和雙料培養(yǎng)[2]。將水樣放置于培養(yǎng)箱內(nèi)，時間控制在20h 左右。陰性標(biāo)準(zhǔn)：培養(yǎng)管無產(chǎn)酸產(chǎn)氣；陽性：培養(yǎng)管產(chǎn)酸產(chǎn)氣。之后按照MPN 檢索表，對水樣中的總大腸菌群MPN 值進(jìn)行報告。

研究組應(yīng)用酶底物法，具體措施如下：選取水樣100ml，添加2.7g 培養(yǎng)基粉末，混合均勻。待其完全溶解后，需要放置于培養(yǎng)箱（36 攝氏度）內(nèi)，培養(yǎng)時間控制在24h。將無菌稀釋瓶中置入100ml 水樣，添加2.7g 培養(yǎng)基粉末，混合均勻。待其完全溶解后，選擇滅菌試管（10 支，15×10mm），通過無菌吸管從稀釋瓶中吸取水樣10ml，置入試管內(nèi)，并且放置于培養(yǎng)箱（36攝氏度）內(nèi)，培養(yǎng)時間控制在24h。觀察培養(yǎng)后的水樣，當(dāng)試管內(nèi)水樣變?yōu)辄S色，表示存在總大腸菌群。當(dāng)試管內(nèi)水樣非黃色時，則表示無總大腸菌群[3]。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法

采用專業(yè)統(tǒng)計學(xué)軟件（SPSS20.0）處理和分析所有患者數(shù)據(jù)資料，采用χ2檢驗計數(shù)資料，并且使用百分比表示，P＜0.05為差異顯著，有統(tǒng)計學(xué)意義。

2.結(jié)果

在分別檢驗兩組樣品之后，對照組檢驗合格率為95.2%；研究組檢驗合格率為97.6%，差異不具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），見表。

表 兩種方法檢測樣品的合格率比較

3.討論

生活飲用水在人類生產(chǎn)生活中占據(jù)重要地位，在經(jīng)濟(jì)發(fā)展過程中，也帶來了嚴(yán)重的環(huán)境污染問題，導(dǎo)致飲用水微生物污染問題加劇。生活飲用水微生物檢測指標(biāo)能夠?qū)λ|(zhì)生物污染進(jìn)行評價。因此為了維護(hù)生活飲用水安全性，必須采用快速有效的方法進(jìn)行檢驗。總大腸菌群是需氧菌和厭氧菌在生長期間，促使乳糖發(fā)酵，且產(chǎn)生革蘭陰性無芽孢桿菌。總大腸菌群不僅存在于糞便當(dāng)中，也存在于其他環(huán)境中[4]。總大腸菌群的檢測，對于檢測人員的技術(shù)水平、檢測設(shè)備以及檢測環(huán)境的要求比較高，且檢測時間比較長，因此在實際應(yīng)用過程中，能夠提升總大腸菌群的準(zhǔn)確性。現(xiàn)階段，在檢驗生活飲用水中的總大腸菌群時，多應(yīng)用酶底物法和多管發(fā)酵法，以上兩種方法的檢測結(jié)果均具備準(zhǔn)確性。當(dāng)水質(zhì)達(dá)標(biāo)時，能夠確保人們安全放心地飲用水源，還能夠?qū)ι铒嬘盟陌踩c質(zhì)量進(jìn)行監(jiān)督。當(dāng)飲用水存在處理不達(dá)標(biāo)和不潔凈問題時，就會導(dǎo)致水中出現(xiàn)微生物細(xì)菌污染。當(dāng)生活飲用水供應(yīng)管道產(chǎn)生破損，二次供水存在問題時，就會污染生活飲用水。所以必須注重生活飲用水的微生物細(xì)菌檢驗。通過此次調(diào)查檢驗?zāi)軌蚩闯觯还苁嵌喙馨l(fā)酵法，還是酶底物法，都能夠提升檢驗結(jié)果的準(zhǔn)確性，酶底物法應(yīng)當(dāng)作為生活飲用水微生物污染總大腸菌群的快速檢驗方法。酶底物法用于清潔水樣中，能夠快速檢測結(jié)果，特別是對于應(yīng)急水樣。當(dāng)水樣的稀釋倍數(shù)越高時，檢測結(jié)果會存在下降趨勢。當(dāng)水樣稀釋倍數(shù)比較低時，且誤差比較小，則可以應(yīng)用酶底物法。

通過此次研究結(jié)果能夠看出，對照組檢驗合格率為95.2%，研究組檢驗合格率為97.6%，兩組水樣在檢驗合格率上不存在顯著差異，P ＞0.05，差異不具有統(tǒng)計學(xué)意義。比較分析不同檢測方法發(fā)現(xiàn)，多管發(fā)酵法的操作時間比較長，且檢測步驟復(fù)雜，必須進(jìn)行驗證試驗。酶底物法便于操作，且檢測結(jié)果獲得時間短，能夠應(yīng)用到常規(guī)快速檢測中。不同檢驗方法的結(jié)果一致性不存在顯著差異，即兩組方法的檢測數(shù)據(jù)基本一致，只是在檢驗數(shù)據(jù)上存在差異性。酶底物法檢驗可以應(yīng)用到大批量快速檢測中，且檢驗過程中不會受到污染影響，能夠?qū)λ畼拥奈⑸镂廴厩闆r進(jìn)行準(zhǔn)確檢測和判斷。

綜上所述，總大腸菌群多管發(fā)酵法和酶底物法的檢測結(jié)果具備一致性特點，但是酶底物法便于操作，因此可以作為水質(zhì)污染的微生物總大腸菌群的標(biāo)準(zhǔn)評價方法。