復合應激刺激對大鼠行為學能力的影響研究

王文欣 劉永

摘要：目的：觀察復合應激因素刺激對大鼠行為學改變的影響，對CFS動物模型的制作提供實驗依據。方法：運用情志刺激與過度勞累相結合的復合應激因素，觀察大鼠在接受刺激后懸掛不動和力竭游泳時間的變化。結果：造模后大鼠懸掛不動時間明顯增加、力竭游泳時間明顯減少。結論：復合應激因素刺激使大鼠體力明顯下降，產生了類似CFS的臨床癥狀。

關鍵詞：復合應激;大鼠;行為學能力

慢性疲勞綜合征（Chronic fatigue syndrome，CFS）是人群亞健康的主要表現形式之一，于1988年由美國疾病控制與預防中心正式確定病名及診斷標準。隨著社會高速發展，在快節奏生活、高壓力工作環境中，以慢性疲勞為主訴的患者日益增多，CFS已成為當今威脅人類健康的重大問題，成為國內外醫者關注和研究的熱點。動物實驗作為研究CFS的重要途徑，模型制備成功與否對研究有重大影響。本研究應用情志刺激與過度勞累相結合的復合應激刺激，制作慢性疲勞大鼠模型，并觀察大鼠行為學的改變，為CFS的動物實驗研究提供實驗依據。

1 實驗材料

1.1 實驗動物

健康清潔級（Ⅱ）雄性Wistar大鼠20只，體重（160±10）g。標準飼料喂養，室溫15～25℃，相對濕度45%～60%，自由攝食、飲水。

1.2 實驗器材

硬塑料束縛筒：管狀，長20cm，筒口外徑6cm，內徑5.3cm，筒內前端置一直徑略小于筒的內徑、并可以前后調節的無底、圓嘴玻璃瓶，其瓶口為通氣口（距離筒口5cm左右），后端為可開關閘門。

游泳箱：規格為185cm×58cm×70cm。

秒表，溫度計。

2 實驗方法

2.1 分組方法

20只大鼠適應性飼養一周后，隨機分為正常組和模型組，每組10只。

2.2 造模方法

采用慢性束縛加強制冷水游泳的復合應激因素刺激制作模型。規定單號日期進行束縛，雙號日期進行冷水游泳，造模時間為4周。在造模的整個過程中，正常組大鼠處于同一環境中，但不予以進食和飲水。

（1）慢性束縛：造模期間，模型組隔日束縛一次，每天束縛時間不同，隨機確定。束縛時，使大鼠鉆進束縛筒內，并調節到不產生強烈反抗的緊張程度，限制其活動，1h后取出放回籠中。

（2）強制冷水游泳：隔日令模型組大鼠在不同時間于冷水（水中置溫度計，視水溫變化調節放入冰塊的數量，使水溫維持在12℃左右）中游泳，期間防止大鼠團抱自救或因力竭沉人水中。每次一組，游泳持續7分鐘，然后將動物撈出，用布擦拭、吹風機吹干皮毛后放回籠中。

2.3 指標測定

（1）一般情況觀察

造模期間，每天觀察大鼠的飲水量、進食量、體重、糞便、鼠毛色澤、爬行動作及對外界刺激敏感度等情況。

（2）鼠尾懸掛實驗

本實驗在造模結束后第2天進行。使大鼠呈倒掛狀，大鼠為克服不正常的體位而掙扎活動，但活動一定時間后，出現間斷性“不動”，顯示“失望”狀態。觀察5min內的不動時間（大鼠處于完全靜止不動狀態的總時間）。

（3）力竭游泳實驗

本實驗在造模結束后第2天進行。游泳時水深為5Ocm，水溫為室溫。將事先標記好的大鼠同時置入游泳池，記錄大鼠從入水到游泳至力竭（頭部沉入水中10秒中不能浮出水面為力竭標準）的時間。

3 統計學分析

采用SPSS19.0統計軟件進行數據處理，各組數據均以“均數±標準差（）”的形式表示，采用單因素方差分析法進行組間比較。

4 實驗結果

4.1 一般情況觀察

造模前，各組大鼠的飲水量、進食量、體重、大鼠糞便、皮毛色澤、瞇眼等均無明顯差異。隨著造模時間的推移，正常組大鼠神態安靜，時而活潑好動，皮毛光潔整齊，眼睛有神，體重正常增長;模型組大鼠飲水量、進食量略有減少，體型瘦弱，體重增加不明顯，精神倦怠，皮毛失去光澤、稀疏，眼神黯淡無光，活動減少，瞇眼明顯，糞便稀，愛扎堆，反應力降低。

4.2 鼠尾懸掛實驗時間測定

結果顯示：模型組大鼠懸尾后不動時間明顯長于正常組，具有顯著差異（P<0.05），表明復合應激因素刺激導致大鼠體力明顯下降，有“抑郁”情緒傾向，具有軀體和心理疲勞。

4.3 力竭游泳實驗測定

結果顯示，模型組大鼠游泳至力竭的時間低于正常組，具有極顯著差異，表明復合應激因素刺激導致大鼠體力明顯下降，力竭游泳時間明顯減少，具有軀體疲勞。

5 討論

本研究通過慢性束縛和冷水游泳相結合的方法建立CFS模型，模仿人類因長期心理應激和軀體應激而誘發產生的煩躁、絕望以及免疫功能低下等CFS癥狀。在實驗中，大鼠在束縛筒中所產生的煩躁、絕望等狀態與人類抑郁、心理壓力增大等精神狀態很相似。同時，根據大鼠游泳喜歡溫水的習慣，選擇冷水游泳，既是對大鼠體力的巨大消耗，也對大鼠精神狀態造成一定壓力。造模結束后，模型組大鼠身體消瘦，體重增加不明顯，反映雙重刺激引起大鼠產生CFS的相應癥狀，導致大鼠體力和精神狀態下降。我們還選擇了比較經典的鼠尾懸掛實驗和力竭游泳實驗評價其行為學能力。通過測定發現，模型組大鼠懸掛不動時間明顯增加、力竭游泳時間明顯減少，說明復合應激因素刺激使大鼠體力明顯下降，其表現出的與人類CFS類似的“抑郁”、“失望”情緒明顯增加。

綜上所述，本研究中的慢性復合刺激所引起的體力和精神損害與臨床的CFS癥狀相似，故認為本模型是可行的。

參考文獻：

[1] Holmes GP，，Kaplan JE，，Gantz NM，et al.Chronic fatigue syndrome：a working case definition[J].Ann Intern Med，1988（10）.

[2] 王天芳，劉雁峰，楊維益，等.消疲怡神口服液治療慢性疲勞綜合征的臨床研究[J].北京中醫藥大學學報，1999（04）.