腎痿復方顆粒對慢性腎衰竭腹膜透析大鼠TGF-β1/Smad通路表達的影響

吳健，劉東，歐昌良，鄒永根

（西南醫科大學附屬中醫醫院，四川 瀘州）

0 引言

慢性腎功能衰竭（Chronic renal failure,CRF）是由于各種原因起的腎臟結構和功能損害的臨床綜合征，其一般由慢性腎臟病發展而來[1]。隨著人口老年化及糖尿病等可能影響腎臟功能疾病發病率的升高，CRF的發病率也逐年上升，其治療困難、病程漫長，嚴重影響患者的生活質量，加重了社會經濟負擔。目前西醫最常用的治療方式為透析治療，能保護腎臟功能，緩解疾病發展。其中，腹膜透析使用較多，但臨床發現腹膜透析病人腹膜纖維化發病較高，發病多與轉化生長因子 -β1（TGF-β1）等關系密切[2-4]。腎痿復方顆粒作為中藥制劑，能改善腎功能，較低肌酐、尿素水平，臨床使用中發現，腎痿復方顆粒能改善腹膜透析病人腹膜纖維化進展[5-6]。因此，本實驗，通過CRF 大鼠模型，從而觀察腎痿復方顆粒對對慢性腎衰竭腹膜透析大鼠TGF-β1/Smad 通路表達的影響，為腎痿顆粒的臨床應用提供實驗室依據。

1 材料與方法

1.1實驗動物

SPF 級 SD 大鼠 40 只，體質量 200g 左右。購買自西南醫科大學實驗動物中心。

1.2儀器與試劑

腎痿復方顆粒：西南醫科大學附屬中醫院內制劑，專利號[201310123711.3]。4.25% 葡萄糖腹膜透析液：（上海長征富民金山制藥有限公司，批準文號：國藥準字H31020946）；腺嘌呤（江蘇江萊生物科技有限責任公司）；兔抗大鼠TGF-β1 多克隆抗體、免疫組化專用濕盒（科華生物制品有限公司提供）；大鼠磷酸化Samd2/3 抗體（Abcam 公司生產），實驗儀器由西南醫科大學中心實驗室提供。

1.3 模型構建

將 40 只 SD 大鼠飼養 10 天后，B 組、C 組 D 組喂養含腺嘌呤飼料2 月，建立慢性腎功能衰竭大鼠模型。檢測血肌酐（Scr）、尿素氮（BUN）確定模型建立。對C組、D 組模型腹腔注射腹膜透析液，構建大鼠腹膜透析模型。腹透管沖洗通暢時鑒定造模成功。

1.4給藥

C 組大鼠給予腎痿復方顆粒 4g/（kg·d）灌胃；D組大鼠給予腎痿復方顆粒8g/（kg·d）灌胃處理；A 組及B 組大鼠給予同等生理鹽水灌胃處理。

1.5指標檢測

4 組大鼠每2 周進行體重檢測，并記錄其活動次數。于第12 周檢測大鼠體內血肌酐（Scr）、尿素氮（BUN），同時處死大鼠后，對大鼠腎臟進行免疫組化檢測，對 p-Samd2/3、TGF-β1 蛋白測定。

1.6 統計學方法

2 結果

2.1 各組大鼠體質量比較，4 組大鼠前4 周體質量均有提高，A 組 ＞D 組 ＞C 組 ＞B 組，隨著時間推移，各組大鼠體質量增長差別較大，其中部分組大鼠個別死亡，但4～12 周，大鼠體質量變化趨勢為：A 組＞D 組＞C 組 ＞B 組。

2.2各組大鼠活動次數變化及比較

前 4 組 B 組、C 組、D 組較 A 組活動次數均下降，可能是造模對大鼠損傷所致。4～12 周，B 組大鼠部分死亡，存活大鼠較其余3 組活動明顯減少，大鼠活動次數變化趨勢為：A 組 ＞D 組 ＞C 組 ＞B 組。

2.3各組大鼠體內血肌酐（Scr）、尿素氮（BUN）比較

12 周 末，C 組、D 組 大 鼠 較 B 組 大 鼠 Scr 含 量明顯降低，D 組大鼠較C 組Scr 含量降低，差異均有統計學意義（P＜0.05）。C 組、D 組大鼠較 B 組大鼠BUN 含量明顯降低，差異有統計學意義（P＜0.05），C 組、D 組大鼠BUN 含量差異不明顯，差異無統計學 意 義（P＞0.05）。B 組、C 組、D 組 大 鼠 Scr 含 量、BUN 含量較A 組大鼠不同程度升高，差異有統計學意義（P＜0.05）。見表 1。

2.4各組大鼠腎組織p-Samd2/3、TGF-β1的影響

正常組A 組大鼠腎臟組織中p-Samd2/3、TGF-β1在含量極低。C 組、D 組大鼠 p-Samd2/3、TGF-β1 表達較B 組明顯下降，有統計學意義（P＜0.05），C 組較D組表達差異有統計學意義（P＜0.05）。見表1。

表1 各組大鼠血肌酐（Scr）、尿素氮（BUN）、p-Samd2/3、TGF-β1 比較

3 討論

目前西醫對慢性腎功能衰竭病人最常用的治療方式為透析治療，能保護腎臟功能，緩解疾病發展。其中，腹膜透析使用較多，但臨床發現腹膜透析病人腹膜纖維化發病較高，發病多與轉化生長因子-β1（TGF-β1）等關系密切。腎痿復方顆粒作為中藥制劑，能改善腎功能，較低肌酐、尿素水平，臨床使用中發現，腎痿復方顆粒能改善腹膜透析病人腹膜纖維化進展。通過CRF大鼠模型，從而觀察腎痿復方顆粒對對慢性腎功能衰竭腹膜透析大鼠TGF-β1/Smad 通路表達的影響，為該藥的臨床應用提供實驗室依據。

實驗結果表明，腎痿復方顆粒干預的大鼠血肌酐、尿素氮較未干預造模大鼠明顯降低，說明腎痿復方顆粒對慢性腎衰大鼠有一定療效，能改善腎臟功能，減緩腎臟損壞進程。通過活動次數的變化比較，腎痿復方顆粒對慢性腎衰大鼠生活質量有一定改善作用。現代醫學認為慢性腎功能衰竭是腎功能損害、腎臟疾病發展的終末期狀態，其主要的病理基礎是腎纖維化，而腹膜纖維化是是腹膜透析病人的并發癥之一。腎痿復方顆粒是基于“腎痿理論”而來，已有研究表明腎痿方能延緩慢性腎臟疾病患者腎纖維化進程[7-9]，但目前對于“腎痿理論”、由腎痿方研制的“腎痿復方顆粒”是否能減緩腹膜纖維化尚存疑問，缺乏實驗室依據。

TGF-β1/Smad 通路是腹膜透析腹膜纖維化的主要機制，此次研究中，腎痿復方顆粒干預的大鼠p-Samd2/3、TGF-β1 表達較未干預模型大鼠明顯下降，且隨著藥物干預計量的增加，其p-Samd2/3、TGF-β1表達越低，表明腎痿復方顆粒對腹膜纖維化有一定延緩作用，且隨著藥物的增加，纖維化進程降低越顯著。腎痿復方顆粒主要由黃芪、三七、當歸、牡蠣、懷牛膝、昆布、大黃組成。其中黃芪與三七為君藥。黃芪甘溫純陽，能補諸虛。三七止血、活血，黃芪與三七配伍，補納腎氣，祛瘀而不傷新。昆布、牡蠣、當歸作為君藥，當歸溫通，補血活血；昆布入腎經，軟堅散結，利水消腫；牡蠣咸寒，收斂固攝、滋陰潛陽。三藥共奏活血化瘀、軟堅散結、收斂固澀之功。大黃苦寒。清熱攻下，祛瘀；懷牛膝活血化瘀，引藥下行，補益肝腎；供為使藥。諸藥合用，共奏納氣活血、消散癓結，除廢起痿。腎痿復方顆粒是在傳統醫學理論指導下針對慢性腎功能衰竭的辨證論治，隨著對腎痿理論方藥的廣泛應用，除在慢性腎臟病，在越來越多的腎臟疾病、腎臟疾病并發癥得到了大量的應用，有著廣泛的應用前景，值得進一步去開發探索。