肝內膽管細胞癌患者EGFR和Her-2表達水平評估預后的應用價值

李銀珍 杜日昌 丁宇 徐彤 廖羅飛

肝內膽管細胞癌是起源于二級膽管及膽管末梢系統的一種惡性腫瘤，在原發性肝癌中占比達到10～15%[1]。有研究指出在肝內膽管細胞癌中，表皮生長因子受體(epidermal growth factor receptor，EGFR)陽性表達明顯，可能有與鑒別良性、惡性病變、肝癌分期等相關[2]。人表皮生長因子受體-2(human epidermal frowth factor receptor 2, Her-2)近年被作為腫瘤靶向治療的重要靶點之一，其表達亦可能與預后相關[3]。本次研究嘗試對肝內膽管細胞癌患者進行(EGFR)、Her-2檢測，并結合其臨床信息探討EGFR、Her-2在肝內膽管細胞癌預后評估中的價值，現報道如下。

資料與方法

一、一般資料

回顧性分析我院2009年1月—2017年12月收治的77例肝內膽管細胞癌患者的臨床資料，依據患者預后情況分為預后良好組35例與預后不良組42例(生存時間≥1年為預后良好，生存時間<1年為預后不良)。其中男45例，女32例；>60歲者44例；淋巴結轉移50例；腫瘤直徑>5cm 37例；腫瘤數目：單發53例，多發24例；TNM分期：Ⅰ或Ⅱ級37例，Ⅲ或Ⅳ級40例。本次研究經我院倫理委員會批準后實施。

二、納入與排除標準

1. 納入標準：①均經超聲等影像學檢查及病理學檢查確診為肝內膽管細胞癌；②35～75歲；③臨床資料完善。

2. 排除標準：①預計生存時間<3個月；②伴有膽管結石、血吸蟲病等其他疾病；③伴有嚴重心腦血管疾病者；④入院前伴有其他惡性腫瘤。

三、方法

所有患者均于我院行根治性手術治療；術前抽取清晨空腹靜脈血7mL，離心后檢測乙肝病毒基因(HBV-DNA)、甲胎蛋白(AFP)、癌胚抗原(CEA)、總膽紅素(TBil)水平；術后選取切除組織常規石蠟包埋后制成3 μm厚的連續切片，經免疫組化染色后檢測EGFR、Her-2蛋白表達情況；單因素分析肝內膽管細胞癌患者預后情況與性別、年齡、腫瘤數目、淋巴結轉移、腫瘤直徑、TNM分期、HBV DNA、AFP、CEA、TBil、EGFR、Her-2間的關系，同時將有差異的信息納入logistic模型行多因素分析。

四、所用試劑及儀器

HBV DNA使用7500美國ABI基因擴增分析儀以PCR法檢測；AFP使用羅氏601型電化學發光儀檢測，試劑盒由上海羅氏診斷產品有限公司生產，當AFP>20 ng/mL時判定為陽性；CEA以電化學發光法檢測，試劑盒由羅氏公司生產，當CEA>5 ng/mL時判定為陽性；TBil使用日立全自動生化分析儀以速率法檢測，試劑盒由中生北控科技股份有限公司生產，當TBil>20 μmol/L判定為陽性。EGFR、Her-2所用一抗購自羅氏診斷，使用羅氏VENTANA全自動免疫組化儀進行檢測。

五、EGFR、Her-2檢測及判定

石蠟切片嚴格按照一抗說明書進行免疫組化染色，結果判定由兩位高年資病理醫師以盲評法閱片后得出。

EGFR、Her-2免疫組化結果判讀標準：0級為細胞無染色，1+為癌細胞的任意部分中微弱的細胞膜部分染色，2+為完整細胞膜弱染色>癌細胞的10%，3+為完整細胞膜強染色>癌細胞的10%。0級和1+判為陰性，2+判為不確定，3+判為陽性。對2+的標本用FISH的方法進行陰陽性的確認。0級為細胞無染色，1+為癌細胞的任意部分中微弱的細胞膜部分染色，2+為完整細胞膜弱染色>癌細胞的10%，3+為完整細胞膜強染色>癌細胞的10%。0級和1+判為陰性，3+判為陽性。

六、統計學方法

結 果

一、單因素生存分析結果

經單因素分析，預后不良組：淋巴結轉移、TNM分期Ⅲ或Ⅳ級、EGFR陽性、Her-2陽性患者顯著多于預后良好組，差異有統計學意義(P<0.05)。見表1。

二、肝內膽管細胞癌患者預后不良的多因素logistic回歸分析

將有差異的信息納入多因素logistic回歸分析模型，并行量化賦值，見表2，結果指出淋巴結轉移、TNM分期Ⅲ或Ⅳ級、EGFR陽性、Her-2陽性是肝內膽管細胞癌患者預后不良的危險因素(P<0.05)。見表3。

表1 患者預后情況與基礎資料、實驗室指標間的關系 [n(%)]

表2 肝內膽管細胞癌患者預后不良的多因素logistic回歸分析

討 論

本研究結果顯示，預后不良組淋巴結轉移、TNM分期Ⅲ或Ⅳ級、EGFR陽性、Her-2陽性患者顯著多于預后良好組，表明淋巴結轉移、TNM分期Ⅲ或Ⅳ級、EGFR陽性、Her-2陽性可能對患者預后產生不良影響。牛福勇等[4]研究膽管細胞癌患者預后的影響因素時指出淋巴結轉移、TNM分期與膽管細胞癌的預后密切相關，與本次研究結果基本相符。本次研究中預后不良組EGFR陽性、Her-2陽性患者顯著多于預后良好患者，筆者分析具體原因如下：①EGFR具有酪氨酸激酶活性，具有促進細胞分裂、增殖的作用，而腫瘤生長則是不斷繁殖、浸潤的過程[5-6]，當患者EGFR為陽性時體內EGFR呈高表達，可能促使腫瘤細胞繁殖，加劇腫瘤細胞的浸潤，影響患者預后。

經多因素logistic回歸分析證實淋巴結轉移、TNM分期Ⅲ或Ⅳ級、EGFR陽性、Her-2陽性是肝內膽管細胞癌患者預后不良的危險因素，可見EGFR、Her-2在肝內膽管細胞癌患者的預后評估具有重要的意義。另外本次研究仍存在不足，如受樣本量限制納入研究對象較少，可能對本次研究結果的推廣產生一定影響，因此后期仍期待擴大樣本量繼續深入研究，為肝內膽管細胞癌的治療及預后評估提供更充實、可靠的臨床依據。