右美托咪定對大鼠腦缺血再灌注晚期膠質瘢痕的抑制作用分析

馬家玲 高艷平（通訊作者）

（蘇州大學附屬張家港醫院 江蘇 張家港 215600）

右美托咪定(Dexmedetomidine，DEX)是一種臨床中常見的輔助鎮靜藥物。近年來多數動物實驗和臨床研究均表明DEX 對腦缺血再灌注損傷具有一定保護作用[1]。但DEX 對腦缺血再灌注損傷晚期星形膠質瘢痕的形成的影響，相關報道較少，因此本研究通過給予DEX 來探究其對膠質瘢痕的抑制作用。

1.實驗方法

1.1 動物模型及分組

90 只健康雄性SD 大鼠（300±20g），購置于xxx 實驗動物有限公司，體重在250 ～300g，日齡49 ～63d；隨機分為空白組，模型組和實驗組。其中空白組僅接受右側頸總、內、外動脈游離術，而另外兩組則采用改良線栓法[2]建立短暫性大腦中動脈阻塞模型。實驗組于栓塞前30min 予以腹腔注射DEX 20ug/kg，而空白組及模型組則予以同等劑量的生理鹽水。

1.2 行為學評分

參照NDS 評分[3]于術后1 天進行。

1.3 腦梗死體積

術后1 天將大鼠斷頭取腦，行TTC 染色，拍照，ImageJ 進行測量，并計算腦梗死體積[4]。

1.4 Westernblot 檢測

于術后1d、7d、14d 取梗死周圍腦皮質檢測。經過裂解、離心取得上清蛋白，BCA 法測定并調節蛋白濃度。加熱變性后的蛋白經電泳，轉膜封閉后分別加入GFAP(1：500)、neurocan(1：500)、β-actin(1：5000)等一抗，于4℃冰箱孵育過夜，經TBST 洗膜后，加入HRP 標記的二抗（1：5000）室溫孵育1h，再次洗膜。經ECL 化學發光成像系統中攝像并分析。

1.5 統計學方法

數據采用SPSS21.0統計學軟件分析處理，計數資料采用率（%）表示，行χ2檢驗，計量資料用均數±標準差（±s）表示，行t檢驗，P＜0.05 為差異有統計學意義。

2.結果

2.1 行為學評分及腦梗死體積

術后1d，與空白組行為學評分（0.13±0.13）分比較，模型組行為學評分（1.88±0.13）分更高（P＜0.05）、實驗組行為學評分（2.5±0.19）分更高（P＜0.05）；且與空白組腦梗死體積（0±0）%比較，模型組腦梗死體積（27.42±0.65）%、實驗組腦梗死體積（23.8±1.45）%差異顯著（P＜0.05）。同時，實驗組行為學評分（2.5±0.19）分更高于模型組（1.88±0.13）分、腦梗死體積（23.8±1.45）%顯著小于模型組（27.42±0.65）%（P＜0.05），見表1。

表1 三組行為學評分及腦梗死體積的比較（±s）

表1 三組行為學評分及腦梗死體積的比較（±s）

注：與空白組比較，模型組行為學評分t=42.569、腦梗死體積t=188.655，實驗組行為學評分t=46.039、腦梗死體積t=73.405，*P ＜0.05；與模型組比較，行為學評分t=12.044，腦梗死體積t=10.188，#P ＜0.05。

組別 n 行為學評分(分) 腦梗死體積(%)空白組 30 0.13±0.13 0±0模型組 30 1.88±0.13* 27.42±0.65*實驗組 30 2.5±0.19*# 23.8±1.45*#P＜0.05 ＜0.05

2.2 GFAP 及neurocan 的表達

與空白組術后1d GFAP（0.20±0.02）、Neurocan（0.20±0.05）相較，模型組術后1d GFAP（0.24±0.03）、Neurocan（0.29±0.08）及實驗組術后1d GFAP（0.21±0.07）、Neurocan（0.23±0.07）皆見有增高趨勢，但增高差異不顯著（P＞0.05）；與空白組術后7d 、14d 相較，模型組術后7d GFAP（0.57±0.09）、Neurocan（0.63±0.07）及實驗組術后7d GFAP（0.50±0.09）、Neurocan（0.51±0.12）表達，術后14d模型組GFAP（0.59±0.09）、Neurocan（0.55±0.1） 及 實 驗 組GFAP（0.51±0.07）、Neurocan（0.44±0.1）表達更明顯（P＜0.05）；但本組之間比較，模型組、實驗組7d 與14d 之間無顯著差異（P＞0.05）；同時相較于模型組7d、14d 的GFAP、Neurocan，實驗組7d、14d的GFAP、Neurocan 明顯下降（P＜0.05），見表2。

表2 三組GFAP、neurocan 的灰度值比較（±s）

表2 三組GFAP、neurocan 的灰度值比較（±s）

注：與空白組比較，模型組7d GFAP t=22.357、14d GFAP t=16.941,7d Neurocan t=18.070、14d Neurocan t=12.800，實驗組7d GFAP t=10.983、14d GFAP t=13.101,7d Neurocan t=9.014、14d Neurocan t=7.694，*P ＜0.05；與模型組比較，實驗組7d GFAP t=2.460、14d GFAP t=3.138,7d Neurocan t=3.863、14d Neurocan t=3.479，#P ＜0.05。

組別 GFAP Neurocan 1d 7d 14d 1d 7d 14d空白組 0.20±0.02 0.22±0.07 0.20±0.05 0.20±0.05 0.23±0.07 0.23±0.05模型組 0.24±0.03 0.57±0.09* 0.59±0.09* 0.29±0.08 0.63±0.07* 0.55±0.1*實驗組 0.21±0.07 0.50±0.09*# 0.51±0.07*# 0.23±0.07 0.51±0.12*# 0.44±0.1*#P ＞0.05 ＜0.05 ＜0.05 ＞0.05 ＜0.05 ＜0.05

3.討論

本研究通過比較大鼠腦缺血再灌注損傷后神經行為學評分及腦梗死體積發現，在腦損傷早期，DEX 具有一定的腦保護作用，這與之前的報道是一致的。目前認為，早期膠質瘢痕可防止損傷的進一步擴大，對腦功能的恢復具有積極的作用，而隨著膠質瘢痕的逐漸成熟，在損傷后期其反而會抑制軸突的生長從而阻礙神經功能的恢復。GFAP 作為星形膠質細胞的標志性蛋白，其表達上調，是星形膠質細胞活化和膠質瘢痕形成的重要標志。而neurocan 主要由成熟膠質瘢痕產生，會抑制軸突的生長。這兩種蛋白在腦損傷后表達均有明顯的升高，而給予DE X 后它們的表達會有所下降，說明D EX 在一定程度上抑制了星形膠質細胞的過度活化，且減少了有害蛋白的表達。綜上所述，DEX 對腦缺血再灌注損傷早期具有腦保護作用，并可能在一定程度上會減少晚期膠質瘢痕的產生。