益生性唾液乳酸桿菌的篩選及其抑菌物質(zhì)的分析與研究

劉宇超 陳雪 樊磊

【摘 要】目的：探討益生性唾液乳酸桿菌的篩選及其抑菌物質(zhì)特征。方法：經(jīng)口腔檢查符合《口腔健康調(diào)查基本方法》身體健康且無口腔疾病的20例18～30歲健康體檢者作為采樣對象，采用垂吐法采集唾液，經(jīng)培養(yǎng)、16srDNA基因測序鑒定篩選出與嗜酸乳桿菌菌種基因相似度≥97%以上的，且抑菌效果最強菌株作為益生性唾液乳酸桿菌，同時測定其不同濃度下的抑菌效果。結(jié)果：本次研究共篩選出5株益生性唾液乳酸桿菌，分別編號為W1、W2、W3、W4、W5，與標準菌種相似度分別為98%、99%、97%、98%、98%。益生性唾液乳桿菌培養(yǎng)原液濃縮2倍（6.16±1.03mm）、3倍（6.98±0.97mm）和4倍（8.56±1.13mm）后抑菌圈直徑均顯著高于原液（4.53±1.42mm），差異具有統(tǒng)計學意義（p<0.05）。結(jié)論：唾液中存在的益生性唾液乳酸桿菌具有抑制變形鏈球菌作用，且抑菌作用隨濃度增加而增加。

【關(guān)鍵詞】益生性唾液乳酸桿菌;篩選;抑菌物質(zhì);分析;研究

近年來，臨床領(lǐng)域關(guān)于益生菌的研究逐漸深入，而益生菌也成為臨床治療的重要藥物或輔助藥物。目前，臨床研究已經(jīng)發(fā)現(xiàn)口腔內(nèi)益生菌對于口腔內(nèi)環(huán)境穩(wěn)態(tài)的維持具有重要意義，但是仍需進一步分析不同益生菌的具體抑菌（病原菌）效果[1]。為此，本次研究采集身體健康且無口腔疾病的20例18～30歲健康體檢者的唾液，進行了益生性唾液乳酸桿菌的篩選，并對其抑菌情況進行了分析，現(xiàn)總結(jié)報道如下。

1 材料與方法

1.1材料與試劑

選擇微生態(tài)技術(shù)中心保存的嗜酸乳桿菌ATCC4356;革蘭染色試劑盒（索萊寶）、細菌DNA提取試劑盒（TaKaRa ）、培養(yǎng)基LBS培養(yǎng)固體基、BHI培養(yǎng)基。

1.2方法

1.2.1篩選與培養(yǎng)

經(jīng)口腔檢查符合《口腔健康調(diào)查基本方法》身體健康且無口腔疾病的20例18～30歲健康體檢者作為采樣對象，采用垂吐法采集唾液，離心后取下層懸液種植于LBS固體培養(yǎng)基

靜置培養(yǎng)24h（37℃） [2]。隨后，選取乳白色菌落進行劃線培養(yǎng)并重新編號，擴增培養(yǎng)24 h（37℃）后，進行常規(guī)處理、基因測序，對比測序結(jié)果。隨后以變形鏈球菌為指示菌，選出具有抑菌作用的乳酸桿菌，使用BHI雙層瓊脂擴散法進行抑菌，24 h后測量抑菌圈直徑。16srDNA基因測序鑒定后，與嗜酸乳桿菌ATCC4356基因相似度≥97%以上的，且抑菌效果最強菌株作為后續(xù)實驗菌，分別為其編號。

1.2.3抑菌濃度測定

實驗菌采用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮，分別進行2倍、3倍、4倍的濃縮，BHI雙層瓊脂擴散法進行抑菌實驗;指示菌：變形鏈球菌。

1.3觀察指標

統(tǒng)計本次研究篩選出的益生性唾液乳酸桿菌菌株，同時其不同濃度下的抑菌能力。

1.4統(tǒng)計學方法

本次研究采用SPSS20. 0 統(tǒng)計學軟件分析所有數(shù)據(jù)，計量資料采用t檢驗;采用χ2檢驗計數(shù)資料，P<0.05 認為差異顯著，有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1篩選結(jié)果

本次研究共篩選出5株益生性唾液乳酸桿菌，分別編號為W1、W2、W3、W4、W5，與標準菌種相似度分別為98%、99%、97%、98%、98%。

2.2不同濃度益生性唾液乳桿菌抑菌效果比較

益生性唾液乳桿菌培養(yǎng)原液濃縮2倍、3倍和4倍后抑菌圈直徑均顯著高于原液，差異具有統(tǒng)計學意義（p<0.05），見表1。

3 討論

益生菌是一類對宿主有益的活體微生物，其在人體內(nèi)發(fā)揮了重要的生物學效應，其生物作用研究具有深刻的臨床價值[4-5]。乳酸桿菌是一種人體內(nèi)分布廣泛的益生菌，臨床研究也相對較多，目前臨床研究也發(fā)現(xiàn)健康人群口腔中也可分離出該菌種，抑菌特性顯著，但有待深入分析與研究。為此，本次研究對身體健康且無口腔疾病的受試者進行益生性唾液乳酸桿菌篩選，共篩選出了5株唾液乳酸桿菌，具有抑制變形鏈球菌的作用。但是，目前益生性唾液乳酸桿菌抑菌物質(zhì)的特征研究相對較少;本次研究發(fā)現(xiàn) ，不同濃度的益生性唾液乳酸桿菌抑菌能力存在較大差異，益生性唾液乳桿菌培養(yǎng)原液濃縮2倍（6.16±1.03mm）、3倍（6.98±0.97mm）和4倍（8.56±1.13mm）后抑菌圈直徑均顯著高于原液（4.53±1.42mm），培養(yǎng)液濃度與抑菌呈正比，可知益生性唾液乳酸桿菌濃度越高，抑菌濃度越強。

綜上所述，唾液中存在的益生性唾液乳酸桿菌具有抑制變形鏈球菌作用，且抑菌作用隨濃度增加而增加。

參考文獻

[1] 宋昊芮，李彥，王樂，姚一帆.乳酸桿菌產(chǎn)胞外多糖培養(yǎng)條件的優(yōu)化[J].吉首大學學報（自然科學版），2019，40（05）：59-62.

[2] 黃佳明，姜寧，張愛忠.乳酸菌作為基因工程菌的研究進展[J].中國飼料，2019（13）：16-20.

[3] 黃思妺. 口腔乳酸桿菌的分離鑒定及其益生功能的研究[D].軍事科學院，2018：20-21.

[4] 薛龍，王立鶴，聶紅兵，等.唾液乳酸桿菌w22a和種植體周圍炎致病菌體外作用的初步研究[J].口腔醫(yī)學研究，2016，32（10）：1042-1046.

[5] 王立鶴，薛龍，聶紅兵，等.益生性唾液乳酸桿菌的篩選及其抑菌物質(zhì)的初步探究[J].口腔醫(yī)學研究，2016，32（08）：819-822.