甜玉米蔗糖合成酶基因ZmSus6和ZmSus7的克隆及組織表達特異性檢測

陳慧敏 李敏慧 馮送聯 楊泉女 上官國蓮 鐘希瓊 李國強 汪躍華 王蘊波 吳富旺

摘要：【目的】克隆甜玉米蔗糖合成酶（Sus）基因ZmSus6和ZmSus7，并進行生物信息學分析及組織表達特異性檢測，為深入研究其在甜玉米生長發育和品質形成過程中的調控機制提供理論參考。【方法】以甜玉米品種佛甜10號為材料，采用RT-PCR克隆ZmSus6和ZmSus7基因，通過ProtParam、SOPMA、SignalP 4.0 Server等進行生物信息學分析，利用MEGA 6.0構建系統發育進化樹，并采用實時熒光定量PCR檢測其組織表達特異性。【結果】ZmSus6和ZmSus7基因的開放閱讀框（ORF）長度分別為2550和2574 bp，編碼849和857個氨基酸殘基，對應的蛋白分子量為96.27和97.79 kD，理論等電點為7.63和8.19，均無信號肽和跨膜區域，二級結構以α-螺旋為主。ZmSus6蛋白為不穩定的親水性蛋白，定位于葉綠體或線粒體;ZmSus7蛋白為穩定的親水性蛋白，定位于細胞質中。ZmSus6和ZmSus7蛋白歸屬于PLN00142家族（Sus超級家族），具有Sus和糖基轉移酶的兩個功能域，分別與高粱SbSus6和SbSus7蛋白的氨基酸序列同源性最高，其同源性對應為88.44%和96.62%，歸屬為單子葉植物III型Sus基因家族。ZmSus6和ZmSus7基因在甜玉米的根、莖、葉、玉米芯和籽粒中均有表達，但存在顯著差異（P<0.05），分別以葉和根中的相對表達量最高。【結論】ZmSus6和ZmSus7基因具有一定的組織表達特異性，可能在甜玉米生長發育和品質形成過程中發揮重要作用。

關鍵詞： 甜玉米;蔗糖合成酶;基因克隆;生物信息學;基因表達

中圖分類號： S513.035.3? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 文獻標志碼： A 文章編號：2095-1191（2020）05-1098-10

Abstract：【Objective】To lay the foundation for further revealing role of genes ZmSus6 and ZmSus7 in sweet corn growth and quality formation， the sucrose synthase（Sus） genes ZmSus6 and ZmSus7 of sweet corn were cloned， and their bioinformatics and tissue expression specificity were analyzed. 【Method】RT-PCR was applied to clone ZmSus6 and ZmSus7 genes from sweet corn variety Fotian No. 10， then their biological information was analyzed by ProtParam，SOPMA，SignalP 4.0 Server，the phylogenetic tree was established using MEGA 6.0， and the tissue expression specificity was detected by real-time fluorescent quantitative PCR. 【Results】The open reading frames（ORF） of ZmSus6 and ZmSus7 genes were 2550 and 2574 bp，encoding 849 and 857 amino acids residues，with molecular weights of 96.27 and 97.79 kD，and theoretical isoelectric points（pI） of 7.63 and 8.19，respectively. In addiction，both of protein peptide chains had no signal peptide or obvious transmembrane region，and the secondary structure were mainly α-helix. Stability prediction indicated that SbSus6 was an unstable hydrophilicprotein but ZmSus7 was stable hydrophilic protein. Subcellular localization prediction showed ZmSus6 might locate in the chloroplast or mitochondria，while ZmSus7 in the cytoplasm. Domain ana-lysis suggested both ZmSus6 and ZmSus7 belonged to PLN00142 family（Sus superfamily） including Sus and glycosyltransferase fuctional domains. Moreover，amino acid sequence alignment showed that ZmSus6 had highest homology with SbSus6（88.44%） protein of Sorghum bicolor，while ZmSus7 had the highest homology（96.62%） with SbSus7 of S. bico-lor，respectively，and assigned to the monocotyledonous type III Sus gene family. Finally，the ZmSus6 and ZmSus7 genes widely expressed in root，stem，leaf，cob and kernel of sweet corn with significant differences（P<0.05），but the highest expressions of ZmSus6 and ZmSus7 genes? were in leaves and root tissues respectively. 【Conclusion】The ZmSus6 and ZmSus7 genes have certain tissue specificity expression，and their encoded proteins may play an important role in the growth and quality formation of sweet corn.

Key words： sweet corn; sucrose synthase; gene cloning; bioinformatics analysis; gene expression

Foundation item： National Natural Science Foundation of China for Youth（31701670）; Key Area Research and Development Program of Guangdong（2018B020202008）; Scientific and Technological Innovation Platform of Fresh Food Storage and Processing Construction Project of Foshan（2015AG10011）

0 引言

【研究意義】甜玉米（Zea mays L. saccharata Sturt）為玉米屬中的甜質類型，原產于美洲，也稱為果蔬玉米或水果玉米。我國華南地區是甜玉米的主產區和主要消費區，在國家農業經濟中發揮重要作用。植物生長發育、成熟衰老等過程所需的能量主要來源于糖代謝，包括糖類的積累、運輸及轉化等。當植物遭遇低溫、干旱和鹽堿等極端條件時，蔗糖的積累不僅有利于維持植物細胞膜穩定性，避免蛋白降解，還能在遭受環境脅迫后為植物代謝過程提供能量來源（Yang et al.，2001;Strand et al.，2003;呂文遠等，2018）。蔗糖合成酶（Sucrose synthase，Sus）作為蔗糖代謝過程中的關鍵酶，負責調控植物不同組織中細胞壁成分或淀粉合成，與植物生長發育過程密切相關。因此，克隆甜玉米Sus基因并檢測其組織表達特異性對了解甜玉米糖類代謝及其品質形成具有重要意義。【前人研究進展】目前，已在甜玉米抗逆脅迫、生長發育、分子雜交育種等方面開展大量研究工作（林婕等，2018;Baseggio et al.，2019;李余良等，2019;Yang et al.，2019），但對甜玉米品質形成和成熟衰老過程仍缺乏深層次的認識，尤其是關于Sus基因家族在糖分代謝中作用的研究報道較少。Hardin和Huber（2004）研究表明，在玉米葉片中的Sus可通過磷酸化修飾選擇性地激活蔗糖水解酶活性，從而增強其對底物的親和性。Wei等（2017）研究表明，低溫貯藏能增強枇杷中的蔗糖磷酸合成酶（Sucrose phosphate synthase，SPS）和Sus活性，提高果糖含量，從而增強果實抗冷性，維持果實的外觀品質。Zhu等（2017）研究發現，糖類含量（蔗糖）與果實品質密切相關，而Sus活性能直接影響果實中蔗糖的積累水平。趙云等（2018）研究發現，開花后高溫處理能抑制小麥籽粒的Sus活性，從而影響籽粒中淀粉的累積。Moshchenskayaa等（2019）研究發現，植物的Sus活性不僅受大氣、pH、溫度、土壤濕度及肥料等外界環境因素的影響，還受基因表達水平和翻譯后水平調控的影響。Liu等（2018）研究發現，ERF72轉錄因子（Ethylene-responsive factor）通過負調控Sus1基因表達，從而影響木薯根莖中淀粉的積累。此外，大量研究表明，植物組織中存在不同活性的Sus同工酶，其基因表達也可能具有生長發育特異性和組織特異性。自第一個Sus基因（ZmSH1，Shrunken1）從玉米中克隆后，大量Sus基因家族成員被發現，且不同物種中Sus基因家族成員的數量不同。如擬南芥（Baud et al.，2004）、桃（Zhang et al.，2015）和水稻（Fan et al.，2019）等植物中含有6～10個Sus基因家族成員，而在白楊（An et al.，2014）、煙草（Wang et al.，2015）、蘋果（Tong et al.，2018）和中華梨（Abdullah et al.，2018）等植物中含有較多數量的Sus基因家族成員，分別為11、15、14和30個。通過NCBI數據庫比對發現，在玉米基因組中存在5個Sus基因家族成員，其中ZmSH1、ZmSus1和ZmSus3基因已被成功克隆，且其表達模式也已明確（Hardin and Huber，2004;Duncan et al.，2006）。【本研究切入點】目前，尚未見有關ZmSus6和ZmSus7基因克隆及組織表達特異性的研究報道。【擬解決的關鍵問題】以甜玉米品種佛甜10號的根、莖、葉和果穗為材料，利用RT-PCR克隆ZmSus6和ZmSus7基因，對其進行生物信息學分析，并利用實時熒光定量PCR分析其組織表達特異性，為深入探究二者對甜玉米糖類代謝的調控機制提供理論參考。

1 材料與方法

1. 1 試驗材料

供試甜玉米品種佛甜10號種植于廣東省佛山市南海區顏峰社區試驗地。RNA提取所需試劑如脫氧膽酸鈉、蛋白酶K、Tris、SDS、DTT和無水乙醇等購自廣州鼎國生物技術有限公司;硼酸鈉十水、EGTA、氯化鋰、醋酸鉀和氯化鉀等購自Sigma-Aldrich公司;基因克隆及表達分析的主要試劑為TranTaq? DNA Polymerase High Fidelity（HiFi）、EasyTaq? PCR SuperMix、pEASY-T1載體、TransScript One-Step gDNA Removal and cDNA Synthesis SuperMix和Trans1-T1 Phage Resistant Chemically Competent Cell等，均購自北京全式金生物技術有限公司;DL5000 DNA Marker和TB Green? Premix Ex TaqTM（Tli RNaseH Plus）等購自寶日醫生物技術（北京）有限公司;DNA凝膠回收試劑盒購自廣州艾基生物技術有限公司。

1. 2 試驗方法

1. 2. 1 樣品采集 甜玉米授粉后24 d植株生長狀態較佳，籽粒可溶性糖含量較高，為最佳采收期，此時取玉米芯、籽粒、根、莖和葉等組織，分別用液氮快速凍存，30 min內轉移至實驗室進行后續試驗。

1. 2. 2 總RNA提取及cDNA合成 參照改良的熱硼酸法（Wan and Wilkins，1994）提取佛甜10號不同組織的總RNA，用1.2%瓊脂糖凝膠甲醛變性電泳進行檢測，并利用Nanodrop微量分光光度計檢測其濃度。參照TransScript? One-Step gDNA Removal and cDNA Synthesis SuperMix試劑盒說明反轉錄合成cDNA。

1. 2. 3 基因克隆及陽性克隆鑒定 從NCBI數據庫搜索玉米Sus基因序列信息，得到2個Sus注釋基因即Sus6（XM_008680885.2）和Sus7（XM_008646897.3）。根據二者的核苷酸序列，利用Primer 5.0設計特異引物（表1）。參照TransTaq? DNA Polymerase High Fidelity（HiFi）說明克隆ZmSus6和ZmSus7基因全長序列。其反應體系50.0 μL：10×TansTaq? HiFi Buffer I 5.0 μL，2.5 mmol/L dNTPs 4.0 μL，10 μmol/L上、下游引物各3.0 μL，cDNA模板20 ng，TransTag? HiFi DNA Polymerase 0.3 μL，滅菌超純水補足至50.0 μL。擴增程序：95 ℃預變性3 min;95 ℃ 30 s，55 ℃ 30 s，72 ℃ 150 s，進行30個循環;72 ℃延伸10 min，4 ℃保存。PCR產物用1.0%瓊脂糖凝膠電泳檢測，利用DNA凝膠回收試劑盒切膠回收目的片段，將其連接至pEASY--T1載體，再轉化Trans1-T1感受態細胞，用氨芐青霉素抗性平板篩選陽性克隆，挑取單菌落進行PCR鑒定，并通過測序驗證陽性克隆。

1. 2. 4 生物信息學分析 將基因測序結果提交至NCBI數據庫（https：//www.ncbi.nlm.nih.gov/）進行BLAST比對。采用DNAMAN 8.0對基因編碼的氨基酸序列進行多重比對，并利用MEGA 6.0構建系統發育進化樹。通過ProtParam（https：//web.expasy.org/protparam/）在線預測編碼蛋白的理化性質;利用SOPMA（https：//npsa-prabi.ibcp.fr/cgi-bin/npsa_automat.pl？page=npsa_sopma.html）在線分析蛋白的二級結構;通過SignalP 4.0 Server（http：//www.cbs.dtu.dk/services/SignalP-4.0/）在線預測蛋白的信號肽;利用TMHMM Server V.2.0（http：//www.cbs.dtu.dk/services/TMHMM/）預測蛋白的跨膜結構;采用Wolf Psort（https：//wolfpsort.hgc.jp/）進行亞細胞定位。

1. 2. 5 實時熒光定量PCR檢測 根據測序結果，利用Primer 5.0設計實時熒光定量PCR特異引物（表1）。利用TB Green? Premix Ex TaqTM（Tli RNaseH Plus）熒光定量PCR試劑盒，以玉米微管蛋白基因（TUB）為內參基因，在ABI 7500熒光定量PCR儀系統進行目標基因表達量檢測（Galli et al.，2013）。其反應體系20.0 μL：TB Green? Premix Ex TaqTM（Tli RNaseH Plus）（2×） 10.0 μL，10 μmol/L上、下游引物各0.4 μL，ROX Reference dye II（50×） 0.4 μL，cDNA模板20 ng，滅菌超純水補足至20.0 μL。擴增程序：95 ℃預變性5 min;95 ℃ 5 s，60 ℃ 30 s，進行40個循環。每個樣品重復3次。

1. 3 統計分析

用2-ΔΔCt法計算基因相對表達量，并使用SPSS 19.0進行顯著性分析。其中，根部的基因相對表達量設定為1，其他組織的基因相對表達量為3個重復樣品的平均值，用最小顯著差異法（LSD）進行多重比較分析。

2 結果與分析

2. 1 總RNA提取結果

由圖1可知，28S和18S RNA條帶清晰，說明RNA的提取質量較優。各組織RNA樣品的OD260/OD280為1.9～2.1，說明RNA純度較高，可用于cDNA合成。

2. 2 ZmSus6和ZmSus7基因克隆及測序結果

以甜玉米葉片組織cDNA為模板，PCR擴增ZmSus6和ZmSus7基因，結果（圖2）顯示，擴增產物約為2500和2600 bp，與預期結果相符。測序結果顯示，ZmSus6基因的開放閱讀框（ORF）為2550 bp，編碼849個氨基酸殘基;ZmSus7基因的ORF為2574 bp，編碼857個氨基酸殘基。

2. 3 ZmSus6和ZmSus7蛋白序列分析結果

由圖3可知，ZmSus6和ZmSus7蛋白歸屬于PLN00142家族（Sus超級家族），具有Sus和糖基轉移酶的兩個功能域。由圖4可知，ZmSus6和ZmSus7蛋白的氨基酸序列高度保守，其中，ZmSus6與高粱SbSus6（XP_021315397.1）的同源性最高，為88.44%，其次為黍（XP_025799116.1），為80.66%。非保守序列主要位于N端。由圖5可知，ZmSus7與高粱SbSus7（XP_021305179.1）的同源性最高，為96.62%，其次為小米（XP_004966535.2），為95.10%，非保守序列主要位于C端。可見，甜玉米和高粱的Sus蛋白親緣關系最近，與黍和小米的Sus蛋白親緣關系次之。由圖6可知，ZmSus6和ZmSus7蛋白歸屬于單子葉植物III型Sus基因家族，二者的親緣關系較近，而ZmSH1和ZmSus1屬于單子葉植物I型Sus基因家族，ZmSus3屬于單子葉植物II型Sus基因家族。

2. 4 ZmSus6和ZmSus7蛋白理化性質分析結果

ZmSus6蛋白分子式為C4302H6721N1189O1253S35，分子量為96.27 kD，理論等電點為7.63，不穩定系數46.24（≤40為穩定蛋白），為不穩定蛋白;ZmSus7蛋白分子式C4393H6896N1176O1286S32，分子量為97.79 kD，理論等電點為8.19，不穩定系數34.91，為穩定蛋白。其次，ZmSus6和ZmSus7親水性平均系數分別為-0.339和-0.403，推測二者為親水性蛋白。此外，ZmSus6和ZmSus7的肽鏈中亮氨酸（Leu）含量較高，分別為10.4%和10.0%，其他種類的氨基酸含量均小于10.0%。

2. 5 ZmSus6和ZmSus7蛋白信號肽預測結果

通過SignalP 4.0 Server在線預測ZmSus6和ZmSus7蛋白的信號肽，結果如圖7所示，ZmSus6和ZmSus7蛋白的C、S及Y值的平均值均小于0.2，推測二者無信號肽。

2. 6 ZmSus6和ZmSus7蛋白跨膜結構預測結果

利用TMHMM Server V.2.0對ZmSus6和ZmSus7蛋白進行跨膜結構預測，結果（圖8）顯示，ZmSus6和ZmSus7蛋白肽鏈均不在細胞生物膜上，無明顯跨膜區域，說明二者為非跨膜蛋白（非分泌蛋白），可能存在于細胞器基質中。

2. 7 ZmSus6和ZmSus7蛋白二級結構預測結果

通過SOPMA對ZmSus6和ZmSus7蛋白進行二級結構分析，結果如圖9所示。ZmSus6和ZmSus7蛋白的二級結構均以α-螺旋為主，分別占50.88%和52.04%，其次為無規則卷曲，分別占30.51%和27.77%，延伸鏈結構分別占12.01%和13.07%;β-折疊結構的比例最少，分別占6.60%和7.12%。

2. 8 ZmSus6和ZmSus7蛋白亞細胞定位預測結果

利用Wolf Psort對ZmSus6和ZmSus7蛋白進行亞細胞定位預測，結果顯示，ZmSus6可能定位于葉綠體或線粒體，而ZmSus7可能定位于細胞質中。

2. 9 實時熒光定量PCR檢測結果

以玉米TUB作為內參基因，實時熒光定量PCR檢測ZmSus6和ZmSus7基因在不同組織器官中的表達情況，結果（圖10）顯示，ZmSus6和ZmSus7基因在根、莖、葉、玉米芯和籽粒中均有表達，但存在顯著差異（P<0.05），二者均在根和葉中的相對表達量較高，但不同的是，ZmSus6基因在葉中的相對表達量最高，而ZmSus7基因在根中的相對表達量最高。

3 討論

植物糖分含量變化主要是由蔗糖轉化及淀粉合成引起。Sus作為一種可逆酶，既可催化蔗糖合成又可催化蔗糖分解。至今，已先后從馬鈴薯、甜菜、白楊、擬南芥、煙草、水稻、蘋果、梨、桃和甘蔗等植物中成功克隆多個Sus基因家族成員，研究發現高等植物SuS基因家族可分為Sus I、Sus II和Sus Ⅲ 3個亞家族，而每個亞家族又可分為單子葉組和雙子葉組（Stein and Granot，2019）。本研究從甜玉米品種佛甜10號中克隆獲得ZmSus6和ZmSus7基因，分別編碼849和857個氨基酸殘基，與高粱和小米等物種具有較高的同源性，在不同物種間具有較高的保守性，歸屬于單子葉植物III型Sus基因家族。目前，在水稻和玉米等模式植物中，Sus I和Sus II基因亞家族已廣泛報道，但有關Sus III亞家族基因的生物學功能仍缺乏深入研究（Brzin et al.，2011;Fan et al.，2019）。前人研究發現，不同基因家族成員在植物生長發育過程中發揮不同的生理作用（Wei et al.，2014）。本研究的生物信息學分析結果表明，ZmSus6和ZmSus7蛋白二級結構均以α-螺旋為主，不具信號肽，為非分泌蛋白，但不同的是：ZmSus6蛋白為不穩定的親水性蛋白，可能定位于葉綠體或線粒體中;ZmSus7為穩定的親水性蛋白，可能定位于細胞質中。由此推測，ZmSus6和ZmSus7基因發揮不同的生理調控功能，也與Sus I和Sus II基因亞家族成員（ZmSH1、ZmSus1和ZmSus3）間存在明顯的功能差異有關。

Sus基因家族中不同成員間不僅在基因調控上存在差異，在基因表達上也具有生長發育和組織表達特異性（Wang et al.，2015）。在擬南芥中，Sus基因家族不同成員能受到不同外界條件的誘導，其中，厭氧條件可誘導Sus1和Sus4基因表達，水分脅迫則誘導Sus3基因在不同組織中表達，Sus2基因在開花后12 d特異性表達，可作為種子成熟的標記基因，而Sus5和Sus6基因是組成型表達（Baud et al.，2004）。同一基因在不同物種中的功能也存在差異，如Sus7基因在水稻的根、花和未成熟種子中能大量表達（Cho et al.，2011），在甘蔗中則作為管家基因組成型表達（Thirugnanasambandam et al.，2019）。在玉米中，Sus1基因在根、莖和葉中表達，為淀粉合成提供前體，Sus3基因則在胚乳、胚珠、幼芽和根中表達，而SH1基因在玉米胚乳中特異表達，影響纖維素的合成（Hardin and Huber，2004;Duncan et al.，2006）。本研究的實時熒光定量PCR檢測結果顯示，ZmSus6和ZmSus7基因在根、莖、葉、玉米芯和籽粒中均有表達，但ZmSus6基因在葉中的相對表達量最高，而ZmSus7基因在根中的相對表達量最高。由此推測，ZmSus6和ZmSus7基因與甜玉米Sus I和Sus II基因亞家族成員（ZmSH1、ZmSus1和ZmSus3）可能存在不同的表達模式，參與不同的生長發育過程。

此外，本研究中ZmSus6和ZmSus7基因在根和葉中的相對表達量較高，尤其是ZmSus7基因在根中的相對表達量最高，說明二者具有較強的組織表達特異性。Fan等（2019）研究表明，OsSus1～OsSus6基因在水稻中超表達后，均能通過調控細胞分裂和淀粉積累從而提高谷粒的大小和重量。Fan等（2019）研究發現，黃瓜CsSus4基因表達下調可抑制其花器官和果實的生長發育。Liu等（2018）研究發現，轉錄因子ERF72可抑制木薯Sus1基因的表達，進而影響根莖中淀粉的積累。由此可見，Sus不僅與植物生長發育密切相關，還能影響其營養品質。因此，在今后的研究中可通過構建ZmSus6和ZmSus7超表達載體或突變體進行基因功能驗證，從而揭示其參與甜玉米生長發育、品質形成等過程的分子調控機制。

4 結論

ZmSus6和ZmSus7基因具有一定的組織特異性，其編碼蛋白可能在甜玉米生長發育和品質形成過程中發揮重要作用。

參考文獻：

李余良，索海翠，韓福光，劉建華，胡建廣，高磊，李武. 2019. 基于SLAF-seq技術分析甜、糯玉米種質遺傳多樣性[J]. 玉米科學，27（4）：71-78. [Li Y L，Suo H C，Han F G，Liu J H，Hu J G，Gao L，Li W. 2019. Analysis of genetic diversity of sweet and wax corn germplasms using SLAF-seq technology[J]. Journal of Maize Sciences，27（4）：71-78.]

林婕，于永濤，馬三梅，胡建廣. 2018. 玉米NAC轉錄因子基因ZmNAM的克隆及表達分析[J]. 核農學報，32（5）：864-874. [Lin J，Yu Y T，Ma S M，Hu J G. 2018. Cloning and expression analysis of transcription factor gene ZmNAM in maize（Zea mays L.）[J]. Journal of Nuclear Agricultural Sciences，32（5）：864-874.]

呂文遠，張玲，王延秀，高清華，段可. 2018. 草莓蔗糖轉運基因FaSUT5對“申陽”草莓果實糖分積累的影響[J]. 江西農業學報，30（8）：16-20. [Lü W Y，Zhang L，Wang Y X，Gao Q H，Duan K. 2018. Influence of strawberry sucrose transporter gene FaSUT5 on sugar accumulation in fruits of strawberry “Shenyang”[J]. Acta Agriculturae Jiangxi，30（8）：16-20.]

趙云，李鵬兵，唐冬梅，林靜，馮寬，李衛華. 2018. 花后高溫對小麥籽粒淀粉合成及相關酶活性的影響[J]. 新疆農業科學，55（2）：210-218. [Zhao Y，Li P B，Tang D M，Lin J，Feng K，Li W H. 2018. Effects of post-anthesis high temperature stress on starch synthesis and activities of related enzymes in wheat grain[J]. Xinjiang Agricultural Sciences，55（2）：210-218.]

Abdullah M，Cao Y P，Cheng X，Meng D D，Chen Y，Shakoor A，Gao J S，Cai Y P. 2018. The sucrose synthase gene family in Chinese pear（Pyrus bretschneideri Rehd.）：Structure，expression，and evolution[J]. Molecules，23（5）：1144.

An X M，Chen Z，Wang J C，Ye M X，Ji L X，Wang J，Liao W H，Ma H D. 2014. Identification and characterization of the Populus sucrose synthase gene family[J]. Gene，539（1）：58-67.

Baseggio M，Murray M，Magallanes-Lundback N，Kaczmar N，Chamness J，Buckler E S，Smith M E，DellaPenna D，Tracy W F，Gore M A. 2019. Genome-wide association and genomic prediction models of tocochromanols in fresh sweet corn kernels[J]. Plant Genome，12（1）：UNSP 180038.

Baud S，Vaultier M N，Rochat C. 2004. Structure and expre-ssion profile of the sucrose synthase multigene family in Arabidopsis[J]. Journal of Experimental Botany，55（396）：397-409.

Brzin J，Petrovic N，Ravnikar M，Kovac M. 2011. Induction of sucrose synthase in the phloem of phytoplasma infec-ted maize[J]. Biologia Plantarum，55（4）：711-715.

Cho J I，Kim H B，Kim C Y，Hahn T R，Jeon J S. 2011. Identification and characterization of the duplicate rice sucrose synthase genes OsSUS5 and OsSUS7 which are associated with the plasma membrane[J]. Molecules and Cells，31（6）：553-561.

Duncan K A，Hardin S，Huber S C. 2006. The three maize sucrose synthase isoforms differ in distribution，localization，and phosphorylation[J]. Plant Cell Physiology，47（7）：959-971.

Fan C F，Wang G Y，Wang Y M，Zhang R，Wang Y T，Feng S Q，Luo K M，Peng L C. 2019. Sucrose synthase enhances hull size and grain weight by regulating cell division and starch accumulation in transgenic rice[J]. International Journal of Molecular Sciences，20（20）：4971-4984.

Fan J W，Wang H Y，Li X，Sui X L，Zhang Z X. 2019. Down-regulating cucumber sucrose synthase 4（CsSUS4） suppresses the growth and development of flowers and fruits[J]. Plant and Cell Physiology，60（4）：752-764.

Galli V，Messias R D，Silva S D D E，Rombaldi C V. 2013. Selection of reliable reference genes for quantitative real-time polymerase chain reaction studies in maize grains[J]. Plant Cell Reports，32（12）：1869-1877.

Hardin S C，Huber S C. 2004. Proteasome activity and the post-translational control of sucrose synthase stability in maize leaves[J]. Plant Physiology and Biochemistry，42（3）：197-208.

Liu C，Chen X，Ma P A，Zhang S K，Zeng C Y，Jiang X Y，Wang B Q. 2018. Ethylene responsive factor MeERF72 negatively regulates sucrose synthase 1 gene in cassava[J]. International Journal of Molecular Sciences，19（5）：1281.

Moshchenskayaa Y L，Galibinaa N A，Novitskayaa L L，Nikerovaa K M. 2019. The role of sucrose synthase in sink organs of woody plants[J]. Russian Journal of Plant Physiology，66（1）：10-21.

Stein O，Granot D. 2019. An overview of sucrose synthases in plants[J]. Frontiers in Plant Science，10：95.

Strand A，Foyer C H，Gustafsson P，Gardestrom P，Hurry V. 2003. Altering flux through the sucrose biosynthesis pathway in transgenic Arabidopsis thaliana modifies photosynthetic acclimation at low temperatures and the develo-pment of freezing tolerance[J]. Plant，Cell and Environment，26：523-536.

Thirugnanasambandam P P，Mason P J，Hoang，N V，Furtado A，Botha F C，Henry R J. 2019. Analysis of the diversity and tissue specificity of sucrose synthase genes in the long read transcriptome of sugarcane[J]. BMC Plant Bio-logy，19：160.

Tong X L，Wang Z Y，Ma B Q，Zhang C X，Zhu L C，Ma F W，Li M J. 2018. Structure and expression analysis of the sucrose synthase gene family in apple[J]. Journal of Integrative Agriculture，17（4）：847-856.

Wan C Y，Wilkins T A. 1994. A modified hot borate method significantly enhances the yield of high-quality RNA from cotton（Gossypium hirsutum L.）[J]. Analytical Biochemistry，223（1）：7-12.

Wang Z，Wei P，Wu M Z，Xu Y L，Li F，Luo Z P，Zhang J F，Chen A，Xie X D，Cao P J，Lin F C，Yang J. 2015. Analysis of the sucrose synthase gene family in tobacco：Structure，phylogeny，and expression patterns[J]. Planta，242（1）：153-166.

Wei K F，Wang Y M，Xie D X. 2014. Identification and expression profile analysis of the protein kinase gene superfamily in maize development[J]. Molecular Breeding，33（1）：155-172.

Wei Y Y，Xu F，Shao X F. 2017. Changes in soluble sugar metabolism in loquat fruit during different cold storage[J]. Journal of Food Science and Technology-Mysore，54（5）：1043-1051.

Yang J，Zhang J，Wang Z，Zhu Q. 2001. Activities of starch hydrolytic enzymes and sucrose-phosphate synthase in the stems of rice subjected to water stress during grain filling[J]. Journal of Experimental Botany，52（36）：2169-2179.

Yang T R，Hu J G，Yu Y T，Li G K，Guo X B，Li T，Liu R H. 2019. Comparison of phenolics，flavonoids，and cellular antioxidant activities in ear sections of sweet corn（Zea mays L. saccharata Sturt）[J]. Journal of Food Processing and Preservation，43（1）：e13855.

Zhang C H，Yu M L，Ma R J，Shen Z J，Zhang B B，Korir N K. 2015. Structure，expression profile，and evolution of the sucrose synthase gene family in peach（Prunus persica）[J]. Acta Physiologiae Plantarum，37（4）：81.

Zhu X D，Wang M Q，Li X P，Jiu S T，Wang C，Fang J G. 2017. Genome-wide analysis of the sucrose synthase gene family in grape（Vitis vinifera）：Structure，evolution，and expression profiles[J]. Genes，8（4）：111.

（責任編輯 陳 燕）