北柴胡有機(jī)氯農(nóng)藥殘留量分析方法研究

張寬才樊攀陳程（.江蘇九旭藥業(yè)有限公司徐州00；.兆科藥業(yè)（廣州）有限公司廣州546）

柴胡為我國常用中藥材，有“北柴胡”和“南柴胡”之分，具有疏散退熱、疏肝解郁、升舉陽氣等作用，藥用部位為傘形科植物柴胡Bupleurum chinense DC.或狹葉柴胡Bupleurum scorzonerifolium Willd.的干燥根[1]。目前，北柴胡的野生資源有限，難以滿足市場(chǎng)需求。人工栽培的柴胡得到大力發(fā)展，為保證產(chǎn)品免受病蟲害的危害，人們大量使用農(nóng)藥，促進(jìn)增收。有機(jī)氯農(nóng)藥是廣譜殺蟲劑，屬于神經(jīng)和內(nèi)臟毒物，可致癌，曾在世界各國廣泛使用，也曾是我國使用量最大的一類農(nóng)藥，具有見效快、難降解、人體危害較大、污染水體和土壤等特點(diǎn)，是國內(nèi)外嚴(yán)格限制的環(huán)境污染物[2-4]。本文通過建立北柴胡中14種有機(jī)氯農(nóng)藥的毛細(xì)管柱氣相色譜檢測(cè)方法，為提高北柴胡的產(chǎn)品質(zhì)量、建立和完善北柴胡產(chǎn)品中有機(jī)氯農(nóng)藥殘留量檢測(cè)方法提供依據(jù)。

1 儀器、試藥與材料

1.1 儀器：美國Agilent 7890A氣相色譜儀（配有自動(dòng)進(jìn)樣器，電子捕獲檢測(cè)器，Empower3工作站軟件），DB-1毛細(xì)管柱（30 m×0.25 mm×0.25 μm）。

1.2 試藥：乙酸乙酯為分析純，環(huán)己烷為色譜純，硫酸為優(yōu)級(jí)純。

農(nóng)藥對(duì)照品：六六六包括α-BHC（純度98.0%），β-BHC（純度98.4%），γ-BHC（純度 99.5%），δ-BHC（純度 98.5%）4種；滴滴涕包括 PP’-DDE（純度 98.5%），PP’-DDD（純度 99.0%），OP’-DDT（純度98.5%），PP’-DDT（純度98.5%）4種；五氯硝基苯（純度99.0%）；六氯苯（純度99.5%）；七氯（純度99.0%）；氧氯丹；反式-氯丹（純度98.0%）；順式-氯丹（純度99.6%），均購自Dr.EhrenstorfenGmbH。1.3樣品：北柴胡樣品10批，來自江蘇同心堂醫(yī)藥連鎖有限公司。

2 方法

2.1 色譜條件和色譜圖：彈性石英毛細(xì)管柱（30 m×0.25 mm×0.25 μm）（DB-1），63Ni-ECD電子捕獲檢測(cè)器。進(jìn)樣口溫度210 ℃，檢測(cè)器溫度300℃，不分流進(jìn)樣。程序升溫：初始溫度80℃，保持1 min，每分鐘20℃升至180℃，保持5 min，每分鐘5℃升溫至240℃，每分鐘60℃升溫至300℃，保持5 min。進(jìn)樣量1 μL，按內(nèi)標(biāo)法計(jì)算。

2.2 混合對(duì)照品工作溶液的制備：混合對(duì)照品儲(chǔ)備液的制備：精密稱取六六六（BHC）（α-BHC、β-BHC、γ-BHC、δ-BHC）、滴滴涕（DDT）（PP’-DDE、PP’-DDD、OP’-DDT、PP’-DDT）、五氯硝基苯、六氯苯、氧氯丹、七氯、反式-氯丹、順式-氯丹農(nóng)藥對(duì)照品適量，用環(huán)己烷分別制成100 ppb的溶液，即得。

內(nèi)標(biāo)儲(chǔ)備溶液的制備：精密稱取2，4，5，6-四氯間二甲苯對(duì)照品適量，用環(huán)己烷制成100 ppb的溶液，即得。

混合對(duì)照品工作溶液的制備：精密量取混合對(duì)照品溶液（100ppb）1mL，置5mL量瓶中，精密加入內(nèi)標(biāo)工作溶液（約100ppb）1 mL，用環(huán)己烷稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.3 供試品溶液的制備：取本品約2 g，精密稱定，加乙酸乙酯100 mL，超聲處理30 min，過濾，用乙酸乙酯適量洗滌，合并濾液和洗液，于35℃加壓濃縮至約1 mL，用環(huán)己烷轉(zhuǎn)溶劑2次，濃縮液轉(zhuǎn)移至10 mL量瓶中，精密加入內(nèi)標(biāo)工作溶液（約100 ppb）2 mL，用環(huán)己烷稀釋至刻度，搖勻，小心加入濃硫酸1 mL，強(qiáng)力振搖 1 min，離心（3 000 r/min）10 min，分取上清液，即得。

3 結(jié)果

3.1 線性關(guān)系考察：按“2.2混合對(duì)照品工作溶液的制備”項(xiàng)下操作配制混合對(duì)照品儲(chǔ)備液和內(nèi)標(biāo)儲(chǔ)備溶液，精密量取儲(chǔ)備液用環(huán)己烷稀釋成5個(gè)濃度梯度的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，取混合標(biāo)準(zhǔn)溶液測(cè)定，結(jié)果被測(cè)組分在1～40 ng/mL內(nèi)呈良好線性關(guān)系，見表1。

表1 14種有機(jī)氯農(nóng)藥回歸方程

3.2 精密度：精密吸取20 ng/mL混合對(duì)照品溶液1 μL，重復(fù)進(jìn)樣5次，RSD在2.4%～6.1%之間。

3.3 重復(fù)性：稱取同一批樣品5份，每份2 g，精密稱定，分別精密加入20 ng/mL混合對(duì)照品溶液1 mL，按“2.3供試品溶液的制備”項(xiàng)下方法提取并測(cè)定，RSD在2.7%～9.5%之間。

3.4 穩(wěn)定性：取“3.3重復(fù)性”項(xiàng)下的供試品溶液1份，分別在0 h，6 h，12 h，24 h，36 h測(cè)定，RSD 在2.1%～9.0%之間。

3.5 回收率：取同一批號(hào)樣品9份，每份2 g，精密稱定，分成3組，分別加入10 ng/mL、20 ng/mL、40 ng/mL的混合對(duì)照品溶液1 mL，回收率在81.4%～105.2%之間，RSD在3.1%～10.5%之間。

3.6 樣品測(cè)定：精密稱定北柴胡樣品（粉碎，混勻），按“2.3供試品溶液的制備”項(xiàng)下操作測(cè)定，每份樣品檢測(cè)2次，用20 ng/mL混合對(duì)照品溶液做隨行標(biāo)準(zhǔn)，用內(nèi)標(biāo)法定量，結(jié)果見表2。

表2 樣品測(cè)定結(jié)果（ng/g）

4 討論

4.1 中藥材農(nóng)藥殘留量檢查的關(guān)鍵步驟為藥材的前處理，既要盡可能完全提取待測(cè)組分，又要盡可能除去樣品中存在的雜質(zhì)，以避免對(duì)色譜柱和檢測(cè)器等的污染，減少對(duì)檢測(cè)結(jié)果的干擾。采用超聲萃取和硫酸磺化的凈化方法，方法簡(jiǎn)便、快速，14種農(nóng)藥的加樣回收率在81.4%～105.2%之間，RSD在3.1%～10.5%之間，符合測(cè)定要求。

4.2 在10批北柴胡樣品中能檢測(cè)出不同濃度的有機(jī)氯農(nóng)藥，但都符合《中國藥典》2015年版規(guī)定[1]，表明雖然我國明令禁止使用有機(jī)氯類農(nóng)藥已有20多年[5]，但由于這些農(nóng)藥性質(zhì)穩(wěn)定，降解緩慢，部分地區(qū)仍有有機(jī)氯類農(nóng)藥殘留，這就要求我們?cè)谠耘嗨幉倪x地時(shí)仍要對(duì)土壤中農(nóng)藥的殘留量加以監(jiān)測(cè)。