北蒼術商品藥材等級標準及質量評價

朱思敏 歐陽麗敏 王新宏 安 叡 崔 波 尤麗莎

（上海中醫藥大學， 上海201203）

蒼術為菊科植物茅蒼術Atractylodes lancea（Thunb.） DC.或北蒼術Atractylodes chinensis（DC.） Koidz.的干燥根莖，具有燥濕健脾、祛風散寒明目的功效［1］?！?00 味常用中藥材的經驗鑒別》 中記載：“2 種蒼術商品均以個大、形如連珠狀、質堅實、有油性、斷面朱砂點或雄黃點多，折斷或切片后放置生白霜，及香氣濃郁者為佳”［2］。

目前，茅蒼術大多為人工栽培，主要供出口日、韓等國，國內市場上流通的主要為野生北蒼術。北蒼術為我國商品藥材的主流品種，主產于秦嶺以北的內蒙、河北、東三省、山東等地，其中以河北、內蒙產量最大，為主產區。北蒼術商品藥材在市場上被分為毛貨（未撞皮）、半光半毛貨（半撞皮）、光貨（撞皮） 3個等級［3］，毛貨及半光半毛貨往往未經撞皮或僅粗略去皮，雜質含有量極高。光貨殘根殘莖去除較為干凈，主要供飲片廠切制成飲片，銷往各地藥房。這種分級方法僅依據藥材的外觀、形態等，不一定能體現北蒼術藥材的內在質量，缺乏科學性?！吨兴幉纳唐芬幐竦燃増F體標準》 中規定了北蒼術的等級標準［4］，但其僅以頭數及是否可見殘莖和碎屑為分級標準，將北蒼術分為2個等級（選貨和統貨），考察指標較少，也未結合內在有效成分進行分析，存在一定的局限性。本研究通過對北蒼術藥材的外在及內在質量綜合研究分析，制定了較規范合理的北蒼術商品藥材等級標準，從而避免以個頭論質量的弊端，以期促進北蒼術商品藥材優質優價體系的建立，為下游企業的優質飲片生產和中成藥投料奠定堅實的基礎，同時也為廣大人民群眾的用藥療效和安全提供保障。

1 材料

1.1 藥材 本研究收集了36 批河北、山西、內蒙等地的北蒼術藥材，經九州天潤（武漢） 中藥研究院藥材研發工程師楊群鑒定，憑證標本存放于上海中醫藥大學。

1.2 儀器與試劑 Agilent-1260 高效液相色譜儀、Agilent-7890B 氣相色譜儀、氫火焰離子檢測器（FID）（美國Agilent 公司）；BT125D 準微量天平（德國Sartorius 公司）；SB-5200D-250型超聲清洗機（寧波新芝生物科技股份有限公司）；SHB-Ⅲ循環水式多用真空泵（鄭州長城科工貿有限公司）；5424R型冷凍離心機（德國Eppendorf 公司）；400 A型仙桃多功能粉碎機（浙江永康市紅太陽機電有限公司）；173618 電熱套（鄭州科泰實驗設備有限公司）。

蒼術素對照品（批號17-2001，純度＞98%，上海中藥標準化研究中心）；β-桉葉醇（批號P24O8F46474，純度≥95%，上海源葉生物科技有限公司）；甲醇（國藥試劑股份有限公司）；娃哈哈純凈水、1-十六醇（國藥集團化學試劑有限公司）。

2 方法與結果

2.1 市場調查及分級依據 本研究調查了安國藥材市場、荷花池藥材市場、亳州藥材市場上北蒼術藥材目前的分級情況，各市場分級方式較為一致，結果見表1。

表1 北蒼術市場分級情況Tab.1 Market classification of A.chinensis

由于市場上半撞皮貨和未撞皮貨雜質灰分過多，不滿足2015 年版《中國藥典》 要求，因此，本研究只對撞皮貨（即光貨） 進行分級，同時考慮到大生產可操作性，采用過篩法按大小對北蒼術藥材首先進行傳統分級，見表2。

表2 北蒼術傳統分級方法Tab.2 Traditional classification method of A.chinensis

2.2 外觀性狀指標選擇及測定

2.2.1 方法 在傳統“辨狀論質” 的基礎上，結合2015 年版《中國藥典》 對北蒼術性狀的描述以及本草記載、市場調查等，選擇北蒼術的長度、單個質量、質地、每1 kg 的頭數為指標進行測定。結果見表3。

2.2.2 測定數量指標選擇 隨機選擇北蒼術一等一份，5 批藥材為一組，測定數量依次遞增到50個，每組3 次重復，計算每組的RSD。以長度及單個藥材質量為測定指標，繪制RSD 隨測量個數改變的變化曲線。結果見圖1，北蒼術一等藥材的長度與單個質量RSD 在測量30個之后趨于平穩，因此在測量北蒼術藥材的長度及單個質量時每份樣本隨機選擇30個重復測定。

圖1 長度及單個質量RSD 與測量個數的變化曲線Fig.1 Change curve of RSD and measurement numbers of length and single weight

2.2.3 外觀性狀等級指標篩選 北蒼術藥材外觀性狀統計分析結果見表4～5。

由表5 可知，北蒼術藥材質地與長度、單個質量、頭數都無相關，但頭數與長度、單個質量的相關系數分別為-0.868、-0.835，為極顯著負相關。

北蒼術藥材的質地、長度、單個質量及每1 kg頭數都是其外觀性狀的重要指標，長度和單個質量可集中反映在頭數上，結合實際測定過程中的可操作性，選擇每1 kg 頭數作為外觀性狀評價的指標。

2.3 北蒼術藥材內在指標選擇及測定 相關文獻研究表明［5-12］，蒼術的藥理活性與其所含的揮發油有關。蒼術揮發油中含有β-桉葉醇、β-芹子烯、茅術醇、α-愈創木烯、蒼術酮等萜類成分，其中β-桉葉醇含有量較高；此外還含有蒼術素、（4E，6E，12E） -十四碳三烯-8，10-二炔-1，3-二乙酸酯等聚炔類成分，其中蒼術素含有量最高。本研究在進行等級研究時，選擇了萜類中含有量最高的成分β-桉葉醇和聚炔類中含有量最高的成分蒼術素，作為北蒼術藥材含有量測定的指標成分。同時，參照2015 年版《中國藥典》 四部，測定北蒼術藥材的雜質（附錄2301 雜質檢查法）、水分（附錄0832水分測定法第四法甲苯法）、總灰分及酸不溶性灰分（附錄2302 灰分測定法）、水溶性浸出物及醇溶性浸出物（附錄2201 浸出物測定法）、總揮發油的含有量（附錄2204 揮發油測定法甲法）。結果見表6。

表3 北蒼術樣本信息及外觀性狀指標測定結果Tab.3 Sample information and appearance index measurement results of A.chinensis

表4 北蒼術外觀性狀統計分析Tab.4 Statistical analysis of appearance index of A.chinensis

表5 北蒼術外觀性狀Pearson 相關性分析Tab.5 Pearson correlation analysis of appearance index of A.chinensis

表6 北蒼術內在指標測定結果（%）Tab.6 Measurement results of internal quality index of A.chinensis（%）

2.3.1 蒼術素含有量測定 參照2015 年版《中國藥典》 蒼術“含有量測定” 項下方法進行［1］，結果見表6。

2.3.2 β-桉葉醇含有量測定 本研究前期在參考文獻［13-17］的基礎上，對β-桉葉醇的含有量測定的方法進行摸索，并進行了系統的方法學考察，建立了穩定可靠的分析方法，結果見表6。

2.3.2.1 色譜條件 HP-INNOWAX 毛細管柱（30 m×320 μm，0.25 μm）；FID 檢測器溫度270℃；進樣口溫度270℃；載氣壓力42.865 psi（1 psi＝6.895 kPa）；尾吹氣N2（99.999%），載氣比例Air-H2-N2＝380∶40∶25；進樣量1 μL；分流比1∶1。升溫程序見表7。

2.3.2.2 對照品貯備液及內標溶液制備 取β-桉葉醇對照品適量，精密稱定，加甲醇配制成1.017 mg／mL的對照品溶液。取1-十六醇適量，精密稱定，加甲醇配制成0.4 mg／mL 對照品溶液。

表7 GC 程序升溫方法Tab.7 Program heating method of GC

2.3.2.3 供試品溶液制備 取蒼術粉末0.4 g，精密稱定，置錐形瓶中，精密加入25 mL 甲醇，稱定質量，超聲處理30 min，取出放冷，再次稱定質量，用甲醇補足減失的質量，搖勻，濾過。精密量取續濾液5 mL 置10 mL 量瓶中，精密加入內標溶液1 mL，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.4 數據分析 采用SPSS 軟件針對影響北蒼術藥材外觀及內在質量的10個指標（頭數、雜質、水分、總灰分、酸不溶性灰分、水溶性浸出物、醇溶性浸出物、蒼術素含有量、β-桉葉醇含有量、揮發油含有量），對36 批北蒼術藥材進行Pearson 相關性客觀分析，同時結合主觀分析，綜合判定北蒼術商品藥材等級劃分指標。

3 規格等級劃分

3.1 等級劃分指標篩選 北蒼術Pearson組間相關性分析見表8。

表8 北蒼術各指標Pearson組間相關性分析Tab.8 Pearson correlation analysis of various index of A.chinensis

表8 表明，頭數與其他因素都無相關，表明傳統按大小進行藥材等級劃分的依據與其內在質量無必然聯系。但是頭數是反映北蒼術藥材外觀的重要參數之一，也是實際生產、交易中的重要等級依據，一般藥材個大易切片，銷往飲片廠切成飲片，價格也較高，個頭小的一般銷往制藥廠或提取車間，價格較低。因此在劃分等級時頭數應列為重要參考依據。

雜質與蒼術素含有量、β-桉葉醇含有量、揮發油含有量的相關系數分別為-0.415、-0.363、-0.410，有顯著負相關，表明雜質越高各項含有量測定指標越低?？偦曳峙c酸不溶性灰分相關系數為0.690，有極顯著正相關，表明總灰分越高酸不溶性灰分越高。統計結果與實際情況比較吻合，北蒼術藥材中含有較多的泥沙雜質，實際生產中如果不充分去除泥沙雜質，往往會引起總灰分超出藥典的限度要求。目前市場上也有按雜質的多少對北蒼術藥材進行分級，雜質含有量不同價格也相差很大，因此本研究將雜質作為北蒼術等級劃分的重要依據。

水分、水溶性浸出物、醇溶性浸出物與其他指標都無顯著相關。故不作為等級劃分的依據。水分是蒼術藥材質量的重要指標，水分過高易發霉變質，因此需控制其含有量限度，但在儲存、運輸過程中水分含有量易發生動態變化，故不作為等級劃分的依據。根據客觀分析的結果水溶性浸出物、醇溶性浸出物也可不作為等級劃分的依據。

蒼術素含有量與揮發油含有量之間的相關系數為0.383，為顯著性正相關，β-桉葉醇含有量與揮發油含有量之間的相關系數為0.425，為極顯著正相關，表明一般揮發油含有量越高，蒼術素及β-桉葉醇含有量也越高。然而北蒼術中β-桉葉醇的含有量波動較大，變異范圍較寬，揮發油含有量測定也存在較大誤差，而蒼術素含有量為藥典中蒼術含有量測定的指標，因此，三者權衡，本研究選擇蒼術素作為北蒼術商品藥材等級劃分的重要依據。

3.2 等級劃分指標值確定 對北蒼術商品藥材等級劃分指標進行描述性統計分析，并采用Excel 中t-test 工具對各組之間的定級指標進行組間雙尾t檢驗，以驗證各等級之間的分級指標是否存在顯著性差異，結果見表9～10。

表9 北蒼術定級指標統計分析Tab.9 Statistical analysis of classification index of A.chinensis

表10 北蒼術定級指標組間t 檢驗分析Tab.10 t-test analysis of classification index of A.chinensis

3.2.1 頭數 由等級之間頭數的顯著性分析可知，北蒼術藥材經過篩后，一等與二等，一等與統貨之間的頭數有極顯著差異，但是二等與統貨之間的頭數無顯著差異。因此可通過頭數來區分一等品，但不能區分二等與統貨。

3.2.1.1 一等 經傳統過篩法（2.5 cm×2.5 cm方孔篩） 分級后，北蒼術一等品每千克頭數在115～157 之間，均值134，其中頭數在115～130 之間有3個樣本；頭數在131～140 之間有7個樣本；頭數在140 以上的有1個樣本。因此北蒼術一等品的頭數不得過140 頭／kg 較為合理。同時為避免人為地在特大貨中摻小，可限定能過2.5 cm×2.5 cm方孔篩的部分不得過5%。

3.2.1.2 二等 經傳統過篩（1.5 cm×1.5 cm 方孔篩） 后，頭數在217～390 之間，均值311，為了在大小上與一等品有區別，北蒼術可限定二等品的頭數大于140 頭／kg，同時限定能過1.5 cm ×1.5 cm方孔篩的部分不得過5%。

3.2.1.3 統貨 統貨對應為目前市場上的撞皮統貨，是自然采收混合未經任何大小篩選的貨。個頭上大小不一，有大有小，有的批次大貨多質量較好，有的批次小貨多，質量較差，但不宜將過篩后的碎末子充當統貨。本研究前期考察了28 批蒼術統貨能過1.5 cm×1.5 cm 方孔篩部分的比例，結果在0.950%～34.9%之間，因此本研究初步規定統貨中能過1.5 cm×1.5 cm 方孔篩的部分不得超過35%。

3.2.2 雜質 由等級之間雜質的顯著性分析可知，北蒼術藥材一等與統貨，二等與統貨之間的雜質有極顯著差異，但是二等與一等之間的雜質無顯著差異。藥材經過篩后一些莖基、殘根、皮屑以及灰塵、泥沙等雜質大部分都被篩去，因此與統貨相比選貨的雜質含有量明顯降低。北蒼術一等品、二等品、統貨的雜質含有量均值分別為1.27%、1.11%、2.02%，結合2015 年版《中國藥典》 中的“藥屑雜質通常不得過3%” 的一般規定，最終定為北蒼術藥材一等品及二等品的雜質含有量不得過1.5%，統貨雜質含有量不得過3%。

3.2.3 蒼術素含有量 蒼術素含有量為劃分北蒼術藥材的重要指標，組間t檢驗表明，按過篩法分級后，一等與二等之間，一等與統貨之間蒼術素含有量無顯著性差異。二等與統貨之間蒼術素含有量有顯著性差異，但若除去三批人工栽培品（CS32-CS34） 后，二等與統貨之間則無顯著性差異，表明差異來源為人工栽培的北蒼術，人工栽培品的樣本數量有限，缺乏代表性，但通過文獻［18］可知人工栽培北蒼術的蒼術素含有量普遍低于野生品。

近年來野生北蒼術資源枯竭，人工栽培品初現市場，由于人工催長，其個頭較大，按傳統定級可列為一等品，但其中一部分有效成分含有量較低，不應列入一等品中，制定合理的一等品的蒼術素含有量限度，可防止劣質栽培品混入一等品中。

一等北蒼術藥材中蒼術素含有量范圍為0.426%～0.742%，均值0.588%，人工栽培品蒼術素含有量范圍為0.316%～0.375%，結合藥典中蒼術素限定的最低值為0.30%，本研究最終規定一等北蒼術藥材中蒼術素含有量不得低于0.45%，二等品及統貨藥材中蒼術素含有量不得低于0.30%。

4 討論

本研究確定的等級劃分標準基本體現了本草記載及市場上北蒼術藥材以“個大、雜質少、有效成分含有量高” 為優的分級觀點，在把控外觀性狀的同時，對北蒼術藥材的內在質量進行控制，能較好地體現北蒼術藥材的綜合質量，更具科學性，在大生產上也具有較強的可操作性，以期為北蒼術商品藥材的市場定級提供一定依據，并進一步促進其優質優價體系的形成。