歸脾湯有效成分與現代藥理學的關聯(lián)性

張楚潔 劉慧萍 楊璐瑜 張思敏 張韞玉 張國民

（湖南中醫(yī)藥大學中醫(yī)方證研究轉化醫(yī)學實驗室， 湖南 長沙410208）

歸脾湯首見于《濟生方》，為宋代嚴用和所著，用于治療思慮過度、勞傷心脾、健忘怔忡之癥，后由歷代名醫(yī)大家臨證實踐，不斷補充，添入當歸、遠志等藥材，治療范圍擴展到心脾氣血兩虛、脾不統(tǒng)血、血不養(yǎng)心等證，現代亦可應用于心腦血管、肝、胃、腫瘤、婦科等疾病。因此，研究歸脾湯傳統(tǒng)功效和現代藥理，并探究其有效成分之間的關聯(lián)性，有利于構建該方與現代醫(yī)學之間的橋梁，更能促進臨床推廣應用。

目前，關于歸脾湯的計算機生物學研究活躍，通過應用大量數據分析和基礎理論、大規(guī)模數學建模、計算機仿真技術等，對該方組方原理和規(guī)律、相關作用靶點生物序列的片段拼接及序列對接進行分析，以尋求治療新病癥和藥物組合的新途徑。本文借助數據庫資料，收集挖掘歸脾湯傳統(tǒng)功效及其有效成分發(fā)揮藥效作用的關聯(lián)性，利用Cytoscape 軟件進行分析；基于歸脾湯有效成分的類型和含有量，對歸脾湯臨床應用進行二次挖掘；根據 “君、臣、佐、使” 原則對歸脾湯組成藥物進行分類；采用GEO 數據庫在線分析工具CEO2R 進行分析；應用DAVID（http：／ ／david.abcc.ncifcrf.gov／） 數據庫中KEGG 篩選出相關信號通路；根據“疾病-藥物-有效成分-信號通路-靶點” 的網絡基礎，利用Cytoscape 構建網絡分析其相互作用，對歸脾湯有效成分、主要功效及體內作用過程中主要影響靶點進行專業(yè)綜合地分析，將中藥傳統(tǒng)理論與現代醫(yī)學信息學研究相結合以加快中醫(yī)藥理論→驗證→實踐進程，為相關臨床應用提供參考。

1 傳統(tǒng)功效及應用

歸脾湯現由白術、茯神、黃芪、龍眼肉、酸棗仁、人參、木香、甘草、當歸、遠志10 味藥材組成，可用于心脾氣血兩虛證、脾不統(tǒng)血證。心藏神而生血，脾藏意而統(tǒng)血，思慮太過則兩臟受傷，心血虛而火動，則心悸怔忡，健忘不安，夜寤不寐，脾不統(tǒng)血而血不歸經，上下妄行，脾血不足，見倦怠嗜睡、面色萎黃，勞倦太過，損傷脾臟，氣機不暢，則見少食肢痛。方中黃芪味甘性溫，補脾益氣，而龍眼肉甘平，補脾氣，養(yǎng)心血，二者共為君藥；人參、白術皆為益氣補脾之要藥，與黃芪相伍可助益氣補脾之功；當歸補血養(yǎng)心，酸棗仁寧心安神，二者與龍眼肉相伍時補心血、安神定志之力更強，均為臣藥；佐以茯神、遠志，奏養(yǎng)心安神，交通心腎之效；更佐以木香，理氣醒脾，與諸補氣養(yǎng)血藥相伍，可使其補而不滯；炙甘草補益心脾之氣，并調和諸藥，用為佐使；引用生姜、大棗調和脾胃，以資化源，諸藥配伍，使心脾得補，氣血得養(yǎng)，諸癥自除。

2 有效成分及其現代藥理學

2.1 單味藥 以蒙古黃芪、龍眼肉、人參、白術、當歸、酸棗 仁、茯 苓、茯 神、遠 志、木 香、甘 草、炙 甘草、化學成分、藥理活性為中文檢索詞，Astragalus membranaceusvar.mongholicus、Longan Arillus、Panax、Atractylodes macrocephala、Angelica sinensis、Jujube Seed、Poria、Poria coco、Radix Polygala、Aucklandiae Radix、Glycyrrhizae、Zhigancao、Chemical Composition、Pharmacological Activity 為英文檢索 詞，在維普、CNKI、PubMed 數據庫進行文獻篩選。對獲得的文獻［1-22］及中國天然產物化學成分庫中數據進行分析，得出上述藥材所含具有生物、藥理活性的有效成分，見表1。

表1 單味藥有效成分的生物、藥理活性

2.2 全方 崔景朝等［23］對歸脾湯單煎、合煎后的藥理作用進行對比，發(fā)現兩者無明顯差異，毒性亦然。由于湯劑貯存時間短，攜帶不便，故結合現代科技多將其制成丸劑或超微顆粒［24］。歸脾湯單味藥有效成分或有效部位分別為黃芪中黃芪甲苷、黃芪皂苷Ⅱ、黃芪多糖，龍眼肉中龍眼多糖、腺苷，人參中人參皂苷、人參多糖，白術中蒼術酮、白術內酯、白術多糖，當歸中藁本內酯、阿魏酸、當歸多糖、二氫山芹醇當歸酸酯，酸棗仁中酸棗仁皂苷、酸棗仁黃酮、酸棗仁油，茯神中茯苓多糖、茯神總三萜、茯苓酸，遠志中遠志皂苷、遠志糖脂，木香中木香烴內酯、菜薊苦素、去氫木香內酯、木香堿，炙甘草中甘草次酸、甘草酸、甘草黃酮。根據該方主要臨床應用，以及現代醫(yī)學中對其藥理作用的研究結果［1-22，25-45］，發(fā)現黃芪甲苷、龍眼多糖、人參皂苷、白術多糖、阿魏酸、酸棗仁皂苷、茯苓多糖、遠志皂苷、木香烴內酯、甘草酸是主要成分。本文對歸脾湯現代藥理學進行文獻調研后發(fā)現，該方對神經系統(tǒng)、血液系統(tǒng)、消化系統(tǒng)、心血管系統(tǒng)等均有影響［25-33］，見表2。

表2 歸脾湯現代藥理作用

3 傳統(tǒng)功效與現代藥理學的關聯(lián)性

3.1 脾氣虛與心血虛的機制 歸脾湯主要治療因久病、情志失常、勞傷心脾、損耗氣血導致的心脾氣血兩虛證，以及因脾虛日久、不能統(tǒng)攝血液、血行脈外的脾不統(tǒng)血證。脾旺則氣血生化有源，氣旺則血自生，心得所養(yǎng)［34］，故該方傳統(tǒng)功效的實質是以健脾益氣、養(yǎng)心補血，健脾益氣為主。

3.1.1 脾氣虛《靈樞·本藏篇》有“脾堅，則臟安難傷” 之說，脾為后天之本、氣血生化之源，脾旺可扶助正氣，維持人體健康。舒晴等［35］認為，脾是人體對抗疾病的基礎，脾虛與T 淋巴細胞減少，淋巴細胞相關因子表達失常，酶母菌紅細胞C3b 受體花環(huán)率（RBC-C3b-RR） 及紅細胞免疫復合物花環(huán)率（RBC-IcRR） 降低，免疫球蛋白（IgA、IgG、IgM）、補體（C3、C4）、分泌型IgA（SIgA）水平減少有關。

脾主運化，將飲食水谷精微輸送全身，外養(yǎng)四肢百骸，內養(yǎng)五臟六腑。現代醫(yī)學認為，脾氣虛證主要與消化系統(tǒng)功能失常、全身代謝障礙相關。李思琦等［36］研究表明，脾氣虛證與消化道黏膜損傷，結構、運動異常，吸收功能障礙，胰酶活性降低，糖耐量降低，細胞線粒體功能異常，機體抗氧化能力降低相關。

3.1.2 心血虛《素問·靈蘭秘典論》云：“心者，君主之官也，神明出焉”。心能統(tǒng)帥協(xié)調人體生命活動，主宰精神意識；心主血脈，可推動全身血液運行，若心血不足則失于濡養(yǎng)。扈新剛等［37］通過文獻調研認為，情志與EPO、miR 191、Riok3、Mxi1 等變化有關，心血不足，心失所養(yǎng)，則情志、EPO 等變化異常。

3.2 關聯(lián)分析 本文根據前期研究資料，結合脾氣虛、心血虛相關機制考察，發(fā)現有效成分具有健脾益氣、養(yǎng)心補血的作用，并收集歸納有效數據［1-4，9-11，13-20］，見表3。

除了白術多糖、木香烴內酯外，其他有效成分均增強SOD 活性；黃芪甲苷、人參皂苷、酸棗仁皂苷、茯苓多糖增加GSH 水平；黃芪甲苷、酸棗仁皂苷、茯苓多糖提高CAT 活性；黃芪甲苷上調VEGFR2 表達，與人參皂苷、木香烴內酯調節(jié)VEGF 水平。以上成分共同作用，發(fā)揮補血功效。

黃芪甲苷、茯苓多糖增加ATP、ADP、cAMP 水平；黃芪甲苷上調GLUT3 表達；黃芪甲苷、人參皂苷、阿魏酸上調BDNF 水平；阿魏酸、酸棗仁皂苷抑制5-HT 釋放；阿魏酸抑制TXA2、FGFR1 生成；酸棗仁皂苷降低DA、NE 水平；茯苓多糖提高TXB2水平；遠志皂苷抑制β-淀粉樣蛋白產生。以上成分通過各自作用機制，發(fā)揮養(yǎng)心安神功效。

黃芪甲苷、龍眼多糖、人參皂苷、酸棗仁皂苷、茯苓多糖、遠志皂苷、甘草酸抑制MDA 生成；黃芪甲苷、龍眼多糖、白術多糖、茯苓多糖、遠志皂苷、甘草酸調節(jié)NO水平；黃芪甲苷、酸棗仁皂苷、茯苓多糖增強AOC 能力；人參皂苷、阿魏酸抗血小板凝聚；黃芪甲苷、人參皂苷、茯苓多糖減少NF-κB 核轉位；阿魏酸降低LPO 水平。以上成分共同作用，發(fā)揮益氣活血功效。

茯苓多糖提高 IL-2、TFN-β 水 平，抑 制 HBsAg、HBeAg、IL-10 分泌，并調節(jié)Th1、Th2 比例；黃芪甲苷、龍眼多糖、人參皂苷、甘草酸調節(jié)IL-1β 水平；黃芪甲苷、龍眼多糖、人參皂苷、白術多糖調節(jié)TNF-α 水平；龍眼多糖刺激IL-6 分泌；龍眼多糖、人參皂苷、白術多糖、茯苓多糖刺激IFN-γ 分泌；人參皂苷降低IL-4 水平；人參皂苷降低組胺水平；龍眼多糖、人參皂苷、白術多糖增強巨噬細胞吞噬作用；白術多糖、茯苓多糖上調Bcl-2／Bax 比值；黃芪甲苷抑制MPO 活性，抑制JNK1／2 磷酸化。以上成分共同作用，發(fā)揮健脾功效。

此外，部分有效成分發(fā)揮其各自臨床作用。黃芪甲苷降低ICAM-1、AngⅡ、Ald 水平，與遠志皂苷作用后減少ACE 表達；龍眼多糖提高NOS、LDH 活性，降低BUN、BLA 水平；人參皂苷降低TSLP 水平，抑制AchE 活性；白術多糖促進細胞遷移；阿魏酸上調NGF 水平；茯苓多糖、甘草酸共同抗纖維化；茯苓多糖降低XOD 活性。

表3 有效成分與健脾益氣、養(yǎng)心補血中藥的關聯(lián)

4 有效成分組方結構及歸類分析

歸脾湯中黃芪、龍眼肉補益心脾為君藥，人參、白術、當歸、酸棗仁為臣藥，佐以茯神、遠志、木香，炙甘草用為佐使。為了從現代醫(yī)學角度分析并證明本方組方結構的合理性，本文在 Scifinder 數據庫中 10 種有效成分［3，9-13，15，19，38-45］進行查詢，并對其進行信號通路和第二信使整合，見表4。

表4 有效成分組方結構分析

雖然歸脾湯具有健脾益氣、養(yǎng)心補血的功效，但健脾養(yǎng)心當先健脾，而益氣補血當先益氣，故該方在臨床應用中以健脾益氣為主。

對收集的作用靶點相關信息進行分析后發(fā)現，歸脾湯中所有有效成分均可作用于NF-κB、NO 信號通路；黃芪甲苷作用的信號通路數目最多，并與其他有效成分作用的信號通路部分重合，范圍廣泛；人參皂苷、白術多糖、酸棗仁皂苷、阿魏酸除作用于上述2 條信號通路之外，其他作用的信號通路相互交叉重疊，互相協(xié)助發(fā)揮作用；除人參皂苷、白術多糖、茯苓多糖外，其他有效成分均可作用于MAPK 信號通路；黃芪甲苷、人參皂苷、白術多糖、甘草酸能影響消化系統(tǒng)、免疫系統(tǒng)、血液系統(tǒng)，從而發(fā)揮健脾補氣的作用。

人參、黃芪、白術、甘草為歸脾湯中主要健脾益氣補虛藥材，而龍眼肉、木香、當歸、遠志、酸棗仁、茯苓為輔藥，綜合黃芪甲苷、人參皂苷、白術多糖、甘草酸作用的信號通路發(fā)現，以上藥材均可共同作用于消化系統(tǒng)、免疫系統(tǒng)、血液系統(tǒng)。其中，黃芪中黃芪甲苷作用數目最多，范圍最廣，為君藥；人參、白術中人參皂苷、白術多糖作用范圍與數量相對較小，兩者信號通路與黃芪甲苷交錯而共同發(fā)揮益氣補虛的作用，為臣藥；甘草中甘草酸作用信號通路范圍廣，發(fā)揮調和諸藥的作用，為使藥。

5 討論

中藥復方是中醫(yī)臨床和傳承的重要組成部分，經過數千年的臨床實踐、刪減更替，其療效得到廣泛肯定。如今隨著現代醫(yī)學的飛速發(fā)展，中醫(yī)藥現代化已成為必然趨勢，但如何做好依舊是一條漫長的道路，這不僅需要將古方系統(tǒng)整理歸納，總結其理、法、方、藥的規(guī)律，更需要將傳統(tǒng)中醫(yī)與現代西醫(yī)相聯(lián)系，探究中醫(yī)方劑與現代藥理學的關聯(lián)性。

本文通過對歸脾湯與現代藥理學的文獻調研，探究該方及其有效成分與現代藥理學的臨床關聯(lián)性，在復方、單味藥、有效成分、作用部位4個層次所獲得的的信息進行深入挖掘，以探求其作用機理。

歸脾湯主治心脾氣血兩虛證、脾不統(tǒng)血證，其主要功效為健脾益氣、養(yǎng)心補血，以前者為主。本文經過大量文獻調研發(fā)現，歸脾湯主要通過黃芪甲苷、龍眼多糖、人參皂苷、白術多糖、阿魏酸、酸棗仁皂苷、茯苓多糖、遠志皂苷、木香烴內酯、甘草酸等有效成分之間的相互協(xié)調來發(fā)揮作用，提示該方與現代臨床藥理之間必定有一定聯(lián)系和規(guī)律。通過分析關于歸脾湯有效成分及作用部位的文獻，可對該方組方結構和藥材配伍進行研究，進一步闡明中醫(yī)復方與現代藥理學之間的關聯(lián)性，為中西醫(yī)臨床結合用藥提供新思路及相應的理論基礎。