慢性乙肝病毒感染引起的肝硬化患者血清microRNA表達變化研究△

鄧巧娟 劉 娜 陳 愷

(1.廣東醫科大學附屬醫院感染內科 湛江 524001；2.廣東醫科大學附屬醫院老年病科 湛江 524001)

肝硬化是由一系列慢性肝臟疾病引起肝臟損傷并最終發展形成的。引起肝硬化的原因有很多，其中酗酒、慢性丙肝病毒感染和非酒精性脂肪肝病(non-alcoholic fatty liver disease，NAFLD)是西方國家肝硬化發生的主要原因，而在亞洲地區，慢性乙肝病毒感染是引起肝硬化的主要原因[1]。在近年的研究中，一些新的標記物被發現并且具有用于肝硬化診斷的前景，其中就包括血清microRNA[2]。但目前關于microRNA在肝硬化中的變化研究相對較少，本課題主要擬對由慢性乙肝病毒感染引起的肝硬化患者進行血清microRNA表達變化檢測，并對肝硬化代償期及失代償期病人血清microRNA表達變化進行比較，分析不同microRNA在肝硬化發生發展過程中的診斷和預后價值，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

隨機選取我院2017年1月～2018年10月間收治的62例肝硬化合并肺炎患者作為此次研究對象，其中男49例，女13例；年齡32～75歲，平均(53.51±2.64)歲；按照肝功能 Child-Pugh分級標準，A級16例，B級31例，C級15例；代償分期：代償期32例，失代償期30例。另選取同期來我院體檢健康者30例設為對照組，其中男18例，女12例；年齡25～59歲，平均(42.11±6.82)歲。收集兩組患者的臨床資料，所得數據對比均無統計學意義(P>0.05)，存在可比性。

入選標準：(1)肝硬化患者診斷符合2000年西安全國病毒性肝炎及肝病學術會議修訂標準[3]，均通過B超，實驗室檢查臨床診斷為慢性乙肝病毒引起肝硬化的患者；(2)神志清楚，自愿參與本研究。

排除標準：(1)肝癌，其他病毒性肝炎，遺傳性肝病，血吸蟲肝病等疾病；(2)存在肝硬化之外可能會對血清microRNA表達產生影響的疾病；(3)臨床資料不全。

1.2 方法

(1)樣品采集：在患者進行治療前抽取患者靜脈血，離心提取血清，凍-80℃備用，同時對對照組部分健康人作為對照。采用TRIzol試劑對血清總的RNA進行提取，并采用Nanodrop 2000測定RNA濃度和純度，采用瓊脂糖凝膠電泳分析RNA質量。

(2)二代測序技術檢測microRNA表達變化：將Adaptor mix(New England biolabs)與小分子RNA(<50nt)進行雜交和連接，然后采用ILLumina HiSeq2000 platform進行小分子RNA反轉錄以及測序分析。測序結果與參考的microRNA庫Bowtie v0.12.7進行比對，分析不同microRNA表達。

1.3 觀察指標

對比兩組血清microRNA表達水平。

1.4 統計學處理

2 結果

肝硬化代償組與失代償組患者microRNA低于對照組，其中肝硬化代償組低于失代償組，microRNA表達高于失代償組，差異有統計學意義(P<0.05)，見表1。

表1 各組病毒載量、甲胎蛋白以及microRNA表達水平對比

組別microRNA(ng/L)肝硬化代償期組(n=32)47.31±19.38肝硬化失代償期組(n=30)6.42±1.84對照組(n=30)77.56±32.36F80.85P<0.05

3 討論

本研究通過調查慢性乙肝病毒感染引起的肝硬化患者血清microRNA表達變化及臨床意義發現：肝硬化代償組與失代償組患者病毒載量、甲胎蛋白以及microRNA均低于對照組，其中肝硬化代償組病毒載量、甲胎蛋白低于失代償組，microRNA表達高于失代償組，差異有統計學意義(P<0.05)；肝硬化代償組與失代償組患者microRNA高表達人數明顯低于對照組，但其中肝硬化代償組microRNA高表達人數高于失代償組，差異有統計學意義(P<0.05)。考慮當在肝硬化發生發展的過程中，肝細胞的壞死或凋亡，炎癥均會導致microRNA被釋放到血液循環中，從而導致血清microRNA含量的改變，而失代償期患者的microRNA含量更低，說明其與肝硬化程度以及壞死性炎癥程度成負相關[4～5]。

綜上所述，microRNA作為一類新的生物學指標，具有良好的穩定性、可重復性等優點，在肝硬化過程中具有重要作用。